Borrelidin介导静脉畸形模型小鼠脾窦内皮细胞凋亡实验研究

目的评价巯螺旋体素（Borrelidin）对小鼠脾窦内皮细胞凋亡的诱导作用,为静脉畸形的研究和治疗探索新的药物。方法 180只10周龄雄性SPF小鼠（specific pathogen free muose,无特定病原体小鼠）,质量25-30g随机分为3组：空白对照组、生理盐水组、Borrelidin组,每组60只。每组又随机分四个日程组（3、7、14、21d组）,每组15只。小鼠脾脏直接注射生理盐水、Borrelidin后分别在3、7、14、21d四个时间点处死该组小鼠取其脾脏为标本：①石蜡切片光镜观察;②超薄切片电镜观察;③末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞;④免疫组化（SABC法）检测细胞凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达;⑤图像分析技术比较Borrelidin不同时段的凋亡率。结果空白对照组和盐水组未发现脾脏萎缩和脾窦组织结构破坏。Borrelidin3天组脾脏有不同程度肿胀,7天肿胀基本消失,14天有不同程度萎缩,21天有肉眼可见的明显萎缩;电镜显示Borrelidin组各时段均可见凋亡细胞,随药物作用时间延长凋亡细胞逐渐增多;TUNEL标记显示Borrelidin作用后3、7天组就有阳性表达,14天后凋亡广泛表达于脾窦内皮细胞;免疫组化显示Caspase-3的表达与凋亡的阳性表达趋势一致。显微图像及统计学分析Borrelidin组凋亡指数及Caspase-3的表达阳性率高,其统计学差异显著。结论 Borrelidin可通过Caspase-3途径诱导小鼠脾窦内皮细胞凋亡,可用于对静脉畸形治疗的进一步研究。     

NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2蛋白表达的影响

目的探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法将舌鳞癌细胞株Tca8113分为对照组(A组)和NS-398 20、40、80μmol/L加药组(分别为B1、B2、B3组);荧光免疫组化和Western blot法检测各组MMP-2蛋白表达情况。结果 B1、B2、B3组MMP-2蛋白表达呈递减趋势,且均较A组明显降低(免疫组化法:366073.100±116272.561、241739.000±12320.270、120672.100±5976.391vs.591518.000±17356.450;Western blot法:0.620±0.084、0.425±0.058、0.172±0.025vs.0.950±0.124)(P<0.05)。结论 NS-398在Tca8113细胞中能抑制MMP-2蛋白表达,并且MMP-2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少。     

TIMPs对舌鳞状细胞癌异常β-DG的作用

目的探讨金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）对舌鳞状细胞癌异常β-肌营养不良蛋白聚糖（β-DG）的调控作用。方法用免疫组化SP和Western Blotting法,检测舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株在MMP Inhibitor或MMP-2/MMP-9 Inhibitor调控前后异常β-DG改变情况。结果未用MMP Inhibitor或MMP-2/MMP-9Inhibitor调控前,舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株无β-DG免疫特染区;调控后,癌细胞出现棕黄色β-DG免疫特染区。舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株有43kDa和30kDa的β-DG蛋白条带;经MMP Inhibitor或MMP-2/MMP-9Inhibitor干预后,30kDa条带消失。结论 MMPs靶向作用Tca8113细胞株于癌细胞β-DG的近C端,使其断裂,从而使细胞与细胞外基质联结体断裂。经MMP Inhibitor或MMP-2/MMP-9 Inhibitor干预后,Tca8113细胞株癌细胞恢复了正常的β-DG;异常30kDa的β-DG消失。因此,MMP Inhibitor或MMP-2/MMP-9 Inhibitor能抑制舌鳞状细胞癌β-DG的断裂。另外,通过TIMPs抑制MMPs,能修复舌鳞状细胞癌断裂的β-DG蛋白,恢复癌细胞与细胞外基质的联结,从而可能会改变舌鳞状细胞癌侵袭和转移的特性。