人精浆中性α-1,4-糖苷酶活性与精子透明质酸酶活性的关系

目的 探讨人精浆中性α-1,4-糖苷酶(中性α-1,4-G)活性与精子透明质酸酶(HYD)活性(HYD阳性反应率及HYD活性强度)的关系.方法 收集年龄24～40岁不育男性精液38例,正常对照12例,根据精浆中性α-1,4-G活性检测结果分为2组:精浆中性α-1,4-G活性正常组(26例)和精浆中性(α-1,4-G活性异常组(12例).24～40岁正常生育男性精液12例作为对照组.用检测盒测定中性α-1,4-G活性,用改良固定底物膜法分别检测精子顶体内HYD阳性反应率及HYD活性强度.结果 不育各组中的精浆中性α-1,4-G活性和精子HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)均显著低于正常生育组(P<0.01).精浆中性α-1,4-G活性与HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)呈显著正相关(r=0.877,r=0.910;P<0.01).结论 精浆中性α-1,4-G活性对精子HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)有明显影响.     

沉默附睾P34H基因对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶活性的影响

目的:通过慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)敲低P34H表达,分析其对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法:构建3种附睾精子P34H shRNA慢病毒表达载体GV-P34H-sh RNA-1、GVP34H-sh RNA-2和GV-P34H-sh RNA-3,提取阳性克隆质粒测序,转染HEK293T细胞,生产慢病毒颗粒。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别注入小鼠附睾中,用real-time PCR和Western blot法分别检测其对P34H m RNA和蛋白的沉默效果。采用免疫荧光法观察P34H蛋白在小鼠精子上的定位,改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测小鼠精子HYD活性(HYD阳性反应率和HYD活性强度)。结果:测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功。感染小鼠附睾后,P34H的mRNA及蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05);其中以GV-P34H-sh RNA-1作用最为显著,精子P34H阳性表达率和HYD活性均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05),而阴性感染组和正常对照组相比差异无统计学显著性。结论:附睾P34H基因沉默可抑制小鼠附睾中精子P34H阳性表达率和HYD活性。     

冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和透明质酸酶活性的影响

目的:探讨冷冻保存对人精子膜蛋白PH-20和顶体内透明质酸酶活性的影响。方法:24例正常生育力精液标本行冷冻保存。免疫印迹检测PH-20蛋白在人精子中的表达,免疫荧光观察PH-20蛋白在人精子上的定位,采用改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测精子顶体内透明质酸酶(HYD)活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度)。结果:免疫印迹显示正常标本冷冻前、后精子均有PH-20蛋白的表达,其PH-20/β-actin平均光密度在正常组冷冻前为0.41±0.15;正常组解冻后为0.24±0.11,两者的平均光密度差异有统计学意义;间接免疫荧光染色后在荧光显微镜下观察冷冻前PH-20阳性率达72.88%±8.04%;解冻后PH-20阳性率降至46.97%±8.38%,差异有统计学意义;解冻后HYD活性与冷冻前比较均有显著性下降。结论:冷冻-解冻过程可引起精子PH-20蛋白表达减少和精子PH-20阳性率降低,以及受精过程中的关键酶-HYD活性减弱。     

盐酸利多卡因体外对精子作用的扫描电镜观察

目的探讨盐酸利多卡因（LHA）体外对人精子形态结构改变的机制。方法选择健康生育男性8名,年龄23～32岁,禁欲3～7d后,手淫取精。分为对照组（A组）,实验B组（LHA终浓度为5mg/mL）、实验C组（LHA终浓度为15mg/mL）。体外孵育1、2h后,采用S3400N扫描电镜观察各组精子形态的改变。结果与A组相比,实验B组1h后精子形态结构改变差异无统计学意义（P〉0.05）,2h后差异有统计学意义（P〈0.05）;实验C组1h后差异有统计学意义（P〈0.05）,2h后差异更为明显（P〈0.01）。结论随着LHA终浓度的增加和孵育时间的延长,LHA对精子形态结构改变越来越明显。     

不育男性精子DCXR mRNA表达与顶体酶阳性反应率的关系

目的 探讨原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精力的关系.方法 收集88例精液标本,其中正常生育组20例,不育男性68例.参照世界卫生组织(WHO)标准方法对标本进行精液常规分析,68例不育标本分为不育A组和不育B组.采用实时荧光定量PCR法,检测DCXR基因mRNA的相对表达量;以固定底物膜法观察顶体酶阳性反应率;以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精试验(SPA)检测精子受精力.结果 实时荧光定量PCR检测结果显示:正常生育组的精子DCXR基因mRNA的相对表达量明显高于不育A、B两组,经统计学分析均有显著性差异(P＜0.05);不育A、B两组的精子顶体酶阳性反应率和受精率与正常生育组比较均有显著性下降(P＜0.05).相关性分析提示精子DCXR基因mRNA的相对表达量与顶体酶阳性反应率存在正相关性(r=0.440,P＜0.01),精子DCXR基因mRNA的相对表达量与受精率存在正相关性(r=0.422,P＜0.01).结论 原因不明男性不育患者精子DCXR mRNA的表达减少,精子DCXR mRNA的表达与顶体酶阳性反应率和受精率有一定相关性.     

鼻内镜下治疗后鼻道出血89例临床分析

鼻出血是耳鼻咽喉-头颈外科三大急症(鼻出血、喉阻塞、气管异物)之一[1]。特别是后鼻道出血的患者,通过前鼻镜常难以窥及具体的出血点,前来就诊的大部分患者,往往都是根据出血的大致部位,首先采用凡纱条紧塞鼻腔后段数次无效后再改为后鼻孔栓子填塞及住院治疗,因鼻腔黏膜的反复损伤及其耐受力的逐渐下降,最终造成患者不必要的精神和经济     

蛋白激酶A与精子活力关系的探讨

目的研究蛋白激酶A（PKA）对精子活力的影响。方法收集36例年龄20~40岁不育男性精液,根据伟力彩色精子质量检测系统检查结果分为3组：不明原因不育组（9例）、少精或畸形精子多组（15例）、泌尿生殖系统炎症组（12例）。以17名20~40岁正常生育男性精液作为对照组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定精液PKA含量;并采用伟力彩色精子质量检测系统分别记录每例的精子活力。结果 PKA含量与精子活力呈正相关（r=0.935,P〈0.01）。不育各组中的精子PKA含量和精子活力分别与正常生育组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论精子PKA含量与男性不育存在一定的相关性,精子PKA含量与精子活力呈明显正相关,精子PKA含量是评定男性生育能力的重要指标之一。