实时荧光聚合酶链反应定量检测大鼠视网膜中 转化生长因子β1和β2的表达

转化生长因子β(TGF-β)是一种具有控制增生和分化等生物过程的自分泌或旁分泌生长因子。TGF-β及其受体、细胞内下游信号转导分子的突变在糖尿病视网膜病变的发生、发展中扮演了非常重要的角色。研究TGF-β的不同成员在视网膜中的表达，有助于深入了解它们的来源和作用机制。我们以实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测TGF-β1和TGF-β2在大鼠视网膜中的表达，为研究TGF-β在视网膜病变中的作用机制提供依据。     

慢性肝胆疾患P450同工酶CYP3A4表达的改变

目的:研究肝硬化和黄疸患者肝脏中CYP3A4蛋白含量、活性及其mRNA表达,进一步探讨其药理学意义.方法:提取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸及肝血管瘤患者的肝组织标本,以后者为正常肝组织对照;Nash法测定CYP3A4酶活性,ELISA法测定蛋白量,一步法抽提肝组织总RNA,随机引物标记法制备CYP3A4 cDNA探针,Northern杂交比较CYP3A4基因在以上三组中的表达差异.结果:肝炎后肝硬化患者CYP3A4蛋白量、活性及mRNA表达较正常肝显著降低(P<0.01),而阻塞性黄疸患者该酶改变与正常肝相差无显著性.结论:肝硬化患者CYP3A4 mRNA表达显著降低,导致同工酶含量和酶活性下降,肝脏对包括静脉麻醉药物在内的多种药物的代谢能力下降,提示临床麻醉工作中应考虑药酶改变,减低患者的麻醉药剂量.     

Cyp2e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸肝组织中的表达

为比较cyp2e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸及正常肝组织中的表达差异，并探讨其麻醉药理学意义，取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸肝组织及正常肝组织(来自肝血管瘤患者)标本，一步法抽提肝组织总RNA，随机引物标记法制各cyp2e1 cDNA探针．Northern印迹法检测cyp2e1基因在以上3种肝组织中的表达。结果 发现阻塞性黄疸患者肝组织中cyp2e1基因表达量仅为正常肝组织的21％，而肝炎后肝硬化该基因表达量是正常肝的98％。结果 表明阻塞性黄疸肝组织cyp2e1基因表达显著降低．可能导致其功能蛋白CYP2E1同工酶含量减少；提示应特别注意吸入麻醉药对此类患者的肝肾毒性。     

Gankyrin expression during mouse embryogenesis

Objective: To observe the gene expression of Gankyrin during mouse embryogenesis and reveal the gene biological significance during organs and tissues formation. Methods: The expressions of Gankyrin mRNA in various organs and tissues were detected by in situ hybridization at indicated times during embryogenesis. Results: The expression of Gankyrin mRNA in mouse day 12.5 embryo was mainly in midbrain, interbrain and endbrain; in mouse day 14.5 embryo mainly in midbrain, aorta, liver, gonad, cranium and rib; in mouse day 16.5 embryo mainly in cranium, rib and vertebra;and in mouse day 18.5 embryo mainly in cranium, rib and intestinal mucesa. Conclusion: Gankyrin gene probably participates in the development of the neural tissues (such as midbrain, interbrain and endbrain etc.), aorta, liver and gonad, intestinal mucosa and bone tissues, which may be closely associated with the function of the organs and tissues.     

gpc3/mxr7基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的：通过原核表达并纯化GPC3蛋白，免疫家兔获得抗—GPC3多克隆抗体，为深入研究gpc3／mxr7基因的功能及其临床应用奠定基础。方法：将gpc3／mxr7基因片段亚克隆至pPROEX^TM HTb原核表达载体，采用融合6—his的融合蛋白方法原核表达GPC3蛋白质，纯化蛋白后免疫家兔，鉴定并纯化出抗—GPC3多克隆抗体。结果；原核诱导表达出GPC3蛋白，免疫家兔后获得多克隆抗体，经鉴定为抗--GPC3特异性多克隆抗体，并能识别原核、真核表达的外源性及HepG2和Hu-h7细胞内源性GPC3蛋白。结论：GPC3蛋白多克隆抗体能特异识别GPC3蛋白，可应用于gpc3／mxr7基因的功能研究，并为临床原发性肝癌的血清学早期诊断提供新的标记物。     

普鲁泊福对原代培养人肝细胞CYP3A4同工酶的影响

目的：观察不同浓度普鲁泊福对原代培养肝细胞中CYP3SA4同工酶活性及蛋白表达的影响，并进一步探讨其临床药理学意义。方法：取肝血管瘤患者的瘤旁正常肝组织标本，胶原酶消化制备原代培养肝细胞，不同浓度普鲁泊福孵育24h后，Nash法测定CYP3A4同工酶比活性，Western印迹法测定CYP3A4蛋白表达，结果：临床剂量（0．01mmol/L)的普鲁泊福即可抑制CYP3A4同工酶的活性，且酶的活性与普鲁泊福的浓度呈负相关，临床剂量的普鲁泊福对该同工酶蛋白的表达并无显著影响，直至浓度为0．5mmol/L时才轻度抑制CYP3A4蛋白表达，结论：麻醉药普鲁泊福对CYP3A4产生明显的抑制作用，可能是一种潜在的P450抑制剂，会导致CYP3A4底物的生物转化速率的下降，其作用主要在表达后水平。     

gpc3/mxr7基因在原发性肝癌及其它肿瘤组织中的表达

目的　研究原发性肝癌及其它肿瘤组织中 gpc3/mxr7基因的表达与临床病理指标的关系。方法　收集正常成人肝、肾、肺等组织 ,原发性肝癌组织 79例和其它肿瘤组织 9例 ,采用Northern杂交方法 ,检测 gpc3/mxr7基因的表达 ,并分析其与临床病理指标的相关性。 结果　Northern杂交显示 gpc3/mxr7基因在正常肝脏组织中不表达 ,在肾、肺中有低丰度的表达。 79例肝癌组织中 gpc3/mxr7基因阳性率为 73 4 1% (5 8/ 79) ,明显高于其癌旁组织 (6 32 % ,5 / 79,P <0 0 1) ,其阳性率与肝癌的大小和恶性程度呈正相关 (P <0 0 5 )。gpc3/mxr7基因在其它肿瘤中均不表达。结论　gpc3/mxr7基因可能是具有肝癌组织特异性的高表达基因 ,可望成为临床肝癌诊断、治疗和预后的辅助参考指标。