幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a( ),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌（H．pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表达系统，探索研制H．pylorl疫苗的新途径。[方法]培养和收集H．pylori NCTC11637菌株，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序，再将目的基因克隆入PET32a（＋），构建重组表达载体PET32a—OMP36。转化E．coli BL21后舢诱导表达，经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白。[结果]测序分析表明。插入的基因片断为987bp，表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为36kDa。并显示具有良好的抗原性。SDS—PAGE检测表明，表达量占细菌总蛋白的37％。镍亲和层析纯化率约92％。Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的编码基因，其表达产物0MP36有望成为新的Hp疫苗候选分子，为H．pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

程序性细胞死亡Pyroptosis最新研究进展

Pyroptosis是最近发现的一种依赖于半胱氨酸蛋白-1 (Caspase-1)的程序性细胞死亡方式.这种死亡方式和细胞凋亡及其它程序性死亡在细胞学形态、分子机制上有着本质的区别.其主要特征为依赖于Caspase-1剪切激活和促炎症性细胞因子白介素(IL)-1β和IL-18的释放.而Caspase-1的活化受到胞内蛋白复合物炎症体的调控.该炎症体由NLRs蛋白(如NLRP3或NLRC4)、接头蛋白ASC以及Caspase-1构成.Pyroptosis最初是在伤寒沙门氏菌感染小鼠巨噬细胞的模型中被发现,随后研究显示Pyroptosis在细菌和病毒感染、自身免疫性疾病以及肿瘤发生中都起到关键性作用.对这种程序性死亡的深入研究将有助于对细菌感染防治和某些疾病的致病机制研究提供帮助,并最终为临床应用提供新思路.     

肿瘤细胞免疫原性死亡研究进展

某些化疗药物在诱导肿瘤细胞发生凋亡的同时还能诱导肿瘤细胞产生免疫原性死亡,通常具有更好的治疗效果。该过程主要为发生凋亡的肿瘤细胞上调某些特征蛋白（如钙网蛋白、高迁移率族蛋白B1）在细胞表面表达,从而诱导未成熟的树突细胞发育为成熟的树突细胞,并将肿瘤抗原提呈给细胞毒性T细胞,最终激活肿瘤特异性毒性T细胞杀伤肿瘤细胞,达到更好的治疗效果。对肿瘤免疫原性死亡的研究将为肿瘤治疗提供新的方法和手段,为肿瘤免疫研究提供新思路。     

幽门螺杆菌47kDa微孔蛋白基因的克隆表达及特性鉴定

目的对人幽门螺杆菌(H.pylori)编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定,探索研制H.pylori疫苗的新途径。方法培养和收集H.pylori标准菌株NTTC11637及临床菌株,采用酚∶氯仿抽提、纯化基因组DNA。设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增omp47基因片断。将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后,转化至E.coli DH5α及BL21,碱裂解提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定并进行序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片断为1284bp,编码427个氨基酸。与GenBank公布的H.pylori标准株26695、43504及J99序列比对,核苷酸同源性高达94%~96%,编码氨基酸同源性96%~99%。经SDS-PAGE检测,电泳图谱上显示一条相对分子量为47kda的新生蛋白带。Western blot检测表明重组蛋白有较好的抗原性。结论成功克隆了外膜微孔蛋白OMP47的编码基因,为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

幽门螺杆菌外膜蛋白hopX基因克隆表达及生物信息学分析

目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）hopX外膜蛋白编码基因的重组质粒,并进行生物信息学分析,探索筛选Hp疫苗的新途径。方法：应用PCR技术从Hp基因组扩增hopX外膜蛋白编码基因片段,TA克隆后测序分析,用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体hopX-pQE30转化E.coliM15,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白。结果：测序分析表明hopX基因全长为1284bp,与Gene Bank公布的其他Hp菌株的基因序列同源性为96%～97%,氨基酸同源性为97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域。SDS-PAGE检测表明,47kD处有一新生的蛋白带,Western blot检测重组蛋白具有良好的抗原活性。结论：首次获得HpNCTC11637菌株hopX基因,其表达产物为外膜蛋白生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。     

基础医学整合课程体系构建与学生评价

目的:分析临床医学本科专业基础医学整合课程体系的建设方案和成效,为培养高素质医学人才提供理论参考.方法:通过专家反复论证制定基础医学整合课程方案,方案实施后,采取便利抽样法选取临床医学专业300名本科生进行纸质问卷调查.结果:问卷调查发现已完成基础医学相关课程学习的286名本科生中90％对基础医学整合课程体系有一定程度...