环境污染物内暴露剂量测量的应用研究现状及其前景

环境污染物的内暴露剂量检测可以用于职业健康评价、环境监控、国家普查等多个领域。近年来,为了考察日益严重的环境污染对人体的危害影响,环境污染物的内暴露剂量测量方法在国内外迅速发展。随着＂多污染多效应模型＂的提出和环境污染物内暴露剂量测量方法的不断完善,反映了这一技术在健康生活环境建设中的重要应用价值。     

细胞色素P—450 CYP2D6基因分型与表型的吻合率

研究细胞色素Ｐ４５０－２Ｄ６基因分型测定方法及其与表型的吻合率。方法：利用等位基因特异扩增法基本原理,对ＣＹＰ２Ｄ６酶缺陷等位基因ＣＹＰ２Ｄ６＊３,＊４,＊６和＊７进行测定。结果;通过１６８例基因分型,并将结果与表型对照,发现同时测定ＣＹＰ２Ｄ６＊３,＊４,＊６和＊７等位基因时,１２５例快代谢者和４３例慢代谢者的基因分型结果与表型结果的吻合率为１００％。     

大肠杆菌T蛋白的高效表达和分离纯化

 目的构建高效表达菌株，以大量表达大肠杆菌T蛋白，为后续的新药作用靶点研究提供活性蛋白质材料。方法利用高效表达质粒pET26b+克隆了大肠杆菌TyrA基因，并在其C端融合了一个由6个组氨酸组成的his-tag以利分离纯化。结果T蛋白的表达量达每1L培养液200 mg，细胞裂解液经一次his-tag亲和柱色谱，纯度达98%，分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶的比活性分别为130和98 U·mg^-1。结论本法表达的大肠杆菌T蛋白，表达量高，纯化容易，酶活性正常，为进一步研究T蛋白的结构与功能，并进行新药设计奠定了基础。     

植物雌激素大豆苷原(daidzein)对结肠癌LoVo细胞生长的影响

目的　了解植物雌激素大豆苷原(daidzein)对结肠癌细胞生长的影响。方法　取对数生长期的人结肠癌细胞株LoVo细胞,以不同浓度的大豆苷原处理细胞2 ,3,4和6d ,然后应用MTT法测定细胞的生长率。结果　大豆苷原在高浓度10 0 μmol/L时在体外对LoVo有明显的抑制作用(P<0.01) ,而在低浓度<5 μmol/L时对LoVo细胞又具有促增殖作用。结论　大豆苷原在体外对LoVo细胞的生长具有促进和抑制的双向作用     

一步法分析细胞色素P450 2D6酶活性缺陷等位基因CYP2D6A和CYP2D6B

 目的：CYP2D6A和CYP2D6B是引起细胞色素P4502D6(CYP2D6)酶活性缺陷的最主要的等位基因 ，对CYP2D6A和CYP2D6B的检测可准确(>92%)预测CYP2D6慢代谢者。本研究利用等位基因特异扩增法，建立了一步PCR法测定CYP2D6A和CYP2D6B等位基因。方法：等位基因特异扩增法分析CYP2D6A和CYP2D6B等位基因；右美沙芬作为探针药物测定表型。结果：经130例测定，说明本法更为快捷、更少污染。结论：本法的建立为该项测定应用于临床、指导临床合理用药奠定基础。     

大肠杆菌T蛋白PDH结构域的高效表达纯化与活性测定

 目的构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T蛋白的预苯酸脱氢酶(PDH),为研究T蛋白双功能结构域CM和PDH的相互协同作用以及T蛋白抑制剂对其影响提供活性蛋白材料。方法利用pGEX高效融合表达系统将PDH与谷光甘肽疏基转移酶(GST)编码序列在表达宿主BL21实现高效表达,并利用对GST具有亲和作用的GlutathioneSepharose4B琼脂糖珠进行亲和层析以对其分离纯化。结果表达产物达菌体总蛋白的40%,可溶性目的产物得量为240mg·L^-1,利用亲和层析法纯化后纯度达92.5%,GSTPDH融合蛋白的PDH的比活为38U·mg^-1。结论本法成功构建高效表达PDH菌株,表达量高,纯化度高,GST-PDH酶活性正常,为进一步研究奠定基础。     

美国化学仿制药立项调研及评估

目的 为拟在美国注册申报化学仿制药的中国企业提供立项指导和帮助,从目标产品的初步获得、产品具体信息的调研分析评估,到最终策略的制定,进行系统的介绍。方法 主要采用例证法。结果 获得美国仿制药立项信息收集及评估的途径和方法,形成并明确开发注册策略制定的思路和要素。结论 美国的药品信息比较透明公开,从公共途径基本可以获得产品开发所需要的相关信息。立项评估并不能做到百分百正确无误,企业可以设立自己的立项标准,只要在企业可接受范围内即可进行。     

伊立替康脂质体的血浆药物含量检测及药动学研究

目的 考察伊立替康脂质体大鼠血浆药物浓度随时间变化趋势和药动学参数,并与伊立替康注射液进行比较,评价伊立替康脂质体药动学特性。方法 大鼠尾静脉注射给予伊立替康脂质体注射液,给药剂量分别为5,10,20 mg·kg^-1,对照组给予伊立替康注射液20 mg·kg^-1。采用HPLC检测大鼠血浆中伊立替康含量。采用DAS 3.0软件,按药动学模块非房室模型计算分析药动学参数。采用SPSS 18.0软件进行药动学参数的统计分析。结果 伊立替康血浆对照品溶液在0.20~100.02 μg·mL^-1内线性良好,r=0.999 3。与伊立替康注射液相比,伊立替康脂质体注射液的血浆达峰浓度C_max显著提高（82倍）,平均滞留时间MRT_（0-t）显著延长（14.6倍）,半衰期t_1/2显著延长（6.5倍）,总伊立替康血浆暴露量极大提高（748.5倍）,经统计学分析均有显著性差异。结论 伊立替康脂质体注射液的药动学参数与伊立替康注射液相比有显著改善,可达到增强药效的目的。     

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准，但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测，本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔，制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验，检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20 ng·mL^-1，在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%，采用本法检测质量浓度分别为100 ng·mL^-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI)，均呈现阴性反应，说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测，发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。     

人UGT1A3催化黄酮类化合物葡醛酸结合反应定量构效关系研究

 目的建立人UGT1A3催化黄酮类化合物定量构效关系,考察不同结构参数对葡醛酸结合反应的影响。方法采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1及逐步回归方法对11个黄酮类化合物的结构参数和UGT1A3催化葡醛酸反应的K_m值进行定量构效关系研究。结果所建立的QSMR模型(pK_m=-2.207 07+0.002 56HOF+3.212 90 Q_C5)具有较好的拟合性。结论分子生成热(HOF)和5位C上的静电荷这两个结构参数是影响其葡醛酸结合活性的主要结构因素。