2009-2015年邯郸市健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌率调查及分子分型研究

目的 了解邯郸市健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌状况以及菌群分布变化情况,为预测流脑发病趋势、合理制定流脑防控措施提供依据。 方法 2009-2015年间,采集7个年龄组健康人群的咽拭子,接种于巧克力双抗琼脂平板进行脑膜炎奈瑟菌分离培养鉴定。 结果 共采集3 528份健康人群咽拭子,其中阳性100株,带菌率为2.83%;通过血清分群鉴定出71株,其中A群8株, B群36株, C群18株, W135群 9株;未分群29株,包括多凝菌(12株)、自凝菌(8株)、不凝菌(9株),并且以15～岁年龄组的带菌率最高。通过PCR的方法对未分群的菌株进行分子分型,鉴定出18株,分型率为62.1%;其中A群3株,B群8株,C群6株,29E群1株,仍有11株未分型。 结论 2009-2015年邯郸市健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌率较低,但10~25岁年龄组带菌率显著。流行株在2009-2011年主要以B群为主,并且集中在10~25岁之间,但是到2014年、2015年的流行株就有所改变,主要是C群和W135群。这更应该引起关注,进一步加大卫生宣传力度和流脑疫苗接种率。     

邯郸市2010-2012年肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的明确邯郸市2010-2012年EV71流行株的基因型及其VP1区基因特征,为手足口病防治提供分子生物学依据。方法用RD细胞分离培养EV71病毒,RT-PCR方法扩增VP1区基因片段,进行核苷酸和氨基酸序列同源性分析,构建系统进化树。结果邯郸市EV71分离株VP1区核苷酸同源性为96.4%~100.0%,与A、B基因型代表株VP1区核苷酸同源性在81.8%~82.7%与83.6%~84.5%之间。与已知基因型C1、C2、C3、C4代表株的核苷酸同源性分别在89.9%~90.3%、89.3%~90.1%、87.9%~88.7%和96.0%~96.9%之间,与1998年台湾分离株同源性为92.4%~93.2%,与2008年阜阳、2009年河南、2010年河北和2011年陕西分离的EV71代表株同源性在96.6%~99.1%之间。基于VP1区构建的EV71系统进化树显示,这14株EV71均为C4a亚型。结论邯郸市2010-2012年EV71流行株为C4a亚型,与中国大陆近年流行株分离结果一致。     

环介导等温扩增技术在脑膜炎奈瑟菌检测中的应用

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种快速敏感的脑膜炎奈瑟菌属检测方法。方法对脑膜炎奈瑟菌种属基因(ctr A)序列的6个区域设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),同时设计2条环引物,并对反应条件和反应体系进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与PCR检测方法进行比较。结果适宜反应条件所设计引物对脑膜炎奈瑟菌采用LAMP扩增技术,其特异性及敏感性均高于PCR检测。结论本实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜炎奈瑟菌。相比普通PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应,扩增效率高,反应不需要精密控温设备和高级复杂的分析仪器,对操作人员的熟练度和专业水平要求不高,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。     

2012年邯郸市乙型Yamagata系流感病毒HA1基因变异分析

目的研究邯郸市2012年流感监测中分离的Yamagata系乙型流感毒株HA1的抗原性和基因特性,阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK细胞分离培养流感病毒,提取病毒核酸,采用RT-PCR方法特异性扩增病毒HA1基因,进行核苷酸序列测定,用DNAStar中Megalign软件进行分析。结果2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒与2008~2009年代表株B/Florida/4/2006相比亲缘关系较远,核苷酸同源性为96.2%~96.8%,氨基酸同源性为96.5%~97.4%,HA1区9个位点氨基酸发生替换,其中6个参与抗原表位构成;与WHO推荐的2012~2013年疫苗株B/Wisconsin/01/2010相比亲缘关系近,核苷酸同源性为98.8%~99.4%,氨基酸同源性为97.4%~98.5%,有5个位点发生氨基酸替换,其中3个参与抗原表位的构成;与国家流感中心提供的标准抗血清的血凝抑制滴度≥1︰640。结论邯郸市2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白HA1与B/Florida/4/2006相比已形成新的变种,与B/Wisconsin/01/2010相比也发生了新的变异,但尚不能确定是否形成Yamagata系有代表性的新变种。     

Victoria系乙型流感病毒HA1基因变异特征分析

目的阐明2012年邯郸市分离的Victoria系乙型流感毒株HA1抗原性和基因变异特征。方法对2012-2013年分离的流感病毒采用RT-PCR方法特异性扩增HA1基因,扩增产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar中Megalign软件进行比对分析,构建系统进化树。结果邯郸市2012年分离的Victoria系乙型流感病毒与WHO推荐的2009-2012年北半球代表株相比,核苷酸同源性为98.1%-99.2%,氨基酸同源性为98.2%-99.4%。HA1区未发生氨基酸丢失和插入,与B/Brisbane/60/2008相比2个位点氨基酸替换具有共性（146I〉V和197D〉N）,而这2个位点与2006-2008年疫苗株B/Malaysia/2506/04相同。与B/Brisbane/60/2008相比7个毒株中有2个毒株发生了另外4个位点（58L〉P、129N〉S、171N〉D和174G〉E）的替换。结论 2012年邯郸市分离的Victoria系乙型流感病毒血凝素蛋白未发生明显的抗原性改变,与WHO推荐的2011-2012年的流感疫苗株B/Brisbane/60/2008匹配,不属于Victoria系乙型流感病毒新变种。