大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的ＤＮＡ聚合酶可用于ＰＣＲ检测     

霍乱弧菌溶原性噬菌体CTXΦ的氯霉素抗性基因标记及诱导

目的　对携带霍乱毒素基因的溶原性噬菌体CTXΦ进行遗传标记 ,以深入研究CTXΦ对霍乱弧菌的转染机制。方法　将CTXΦ基因组中ctxAB的上下游同源序列连接到cat基因的两侧 ,然后通过自杀质粒介导的DNA同源重组技术将霍乱菌株N16 96 1染色体上CTXΦ基因组中的ctxAB基因缺失掉 ,替换以氯霉素抗性基因 ,对CTXΦ基因组进行遗传标记 ,然后用丝裂霉素C诱导这种经抗性基因标记的噬菌体 ,再利用它对古典型霍乱弧菌的转染检测活性。结果　获得了ctxAB缺失、带有cat遗传标记的重组菌株N Φc;诱导出的CTXΦc噬菌体颗粒成功感染了霍乱菌株 1119。结论　N Φc中的CTXΦ带有了氯霉素抗性标记 ,诱导出具有感染活性的CTXΦc可用于研究毒力基因的水平转移     

2015-2016年全国和高发省份伤寒、副伤寒流行病学分析

目的 分析2015-2016年伤寒、副伤寒法定报告病例数,了解全国及高发省份流行病学特点和变化趋势,为防控措施和策略的制定提供依据。方法 采用描述性流行病学方法对网络直报系统中2015-2016年伤寒、副伤寒报告病例数进行分析。结果 2015-2016年全国共报告伤寒、副伤寒病例22 536例,死亡2例,年平均发病率为0.83/10万,较2014年的伤寒、副伤寒发病率下降18.63%。监测点共对14 465份血样标本进行培养,分离出菌株289株,阳性分离率为2.00%,伤寒与副伤寒之比为1.21:1。病例均以农民和民工为主,其次为散居儿童和在校学生,伤寒、副伤寒发病率均以0~4岁组儿童最高（分别为1.70/10万和0.80/10万）。贵州、云南、广西、广东、浙江、湖南和新疆为疫情高发省份,非监测点病例数上升。结论 2015-2016年全国伤寒、副伤寒发病水平处于相对较低的状态,<10岁儿童是防控重点人群,伤寒菌成为优势菌型,应加强非监测点疫情监测。     

罗哌卡因复合舒芬太尼蛛网膜下腔麻醉在剖宫产术中的应用

目的探讨罗哌卡因复合小剂量舒芬太尼蛛网膜下腔注射在剖宫产术中的应用。方法将120例择期行剖宫产术产妇随机均分3组:A组为0.75%罗哌卡因10 mg。B组为0.75%罗哌卡因10 mg复合舒芬太尼3μg。C组为0.75%罗哌卡因10 mg复合舒芬太尼5μg。经L2-3行腰—硬联合麻醉,留置硬膜外导管备用。记录3组产妇麻醉效果,感觉和运动阻滞程度和时间,术中血流动力学变化和不良反应、新生儿apgar评分及硬膜外追加局麻药情况。结果 3组均安全完成手术,最高感觉阻滞平面、运动阻滞程度及恢复时间、新生儿apgar评分差异无统计学意义。麻醉优良率C组>B组>A组,但皮肤瘙痒的例数C组>B组>A组,C、B 2组镇痛时间长于A组(P<0.05),3组产妇生命体征变化差异无统计学意义,均无呼吸抑制发生。硬膜外追加局麻药的例数A组明显高于C、B 2组(P<0.05)。结论罗哌卡因复合舒芬太尼蛛网膜下腔麻醉效果满意,术后镇痛时间长,不良反应少,可安全用于剖宫产术。     

老年股骨颈骨折手术的麻醉处理体会

目的：探讨老年股骨颈骨折手术中麻醉方法及其效果。方法选取该院2011年8月-2013年11月收治的老年股骨颈骨折患者70例,均进行手术治疗,将其随机分为对照组与观察组各35例。观察组采取腰-硬联合麻醉,对照组采取连续硬膜外麻醉,对比2组患者用药剂量、麻醉效果、生命体征改变情况。结果观察组局麻用药剂量小于对照组,麻醉起效时间短于对照组,差异均有统计学意义（P ﹤0.05）;2组术中血压、心率及呼吸频次差异均无统计学意义（P ﹤0.05）。结论老年股骨颈骨折患者行手术治疗时,采取腰-硬联合麻醉可快速发挥麻醉效果,安全性较高,值得在临床中推广。     

小儿先天性心脏病手术的麻醉处理分析

目的：对小儿先天性心脏病行手术治疗时的麻醉处理方法及处理效果进行分析。方法选取行手术治疗的小儿先天性心脏病患者43例,均利用舒芬太尼行静吸全麻处理,对各时段患儿平均动脉压、心率改变情况、清醒时间、拔管时间及不良反应进行分析。结果43例患儿停药后清醒时间（2．7＆#177;0．2）h,拔管时间（3．6＆#177;0．7）h,不良反应发生率为2．3％。患儿各时段平均动脉压及心率未发生明显改变,只在锯胸骨时患儿心率明显下降,但仍为正常。结论在为小儿先天性心脏病行手术治疗时,利用舒芬太尼行全麻处理效果显著,安全性较高,值得在临床中推广。     

利用实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测人及动物粪便中的沙门菌

目的为了快速检测、鉴定沙门菌属细菌,提高食源性疾病暴发应对能力,本研究建立了针对沙门菌属的实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测方法,并对其特异性、敏感性和检测下限进行评价。方法筛选针对沙门菌的属特异基因,并建立该基因的qPCR检测体系,利用肠道不同种属细菌、不同亚种及血清型沙门菌属细菌、动物及人粪便样本评价该体系的特异度、灵敏度及检测下限。结果获得沙门菌的属特异基因ttrA,建立基于该基因的qPCR检测方法。发现该方法对纯DNA的最低检测下限为2拷贝/反应。对沙门菌属以外的肠道致病菌无扩增,对1 100株不同亚种及血清型的沙门菌的扩增结果均为阳性,对150份沙门菌致腹泻患者的粪便增菌液和210份动物带菌粪便增菌液均检测阳性。结论本研究建立的基于单一基因的沙门菌属快速分子检测方法具有特异度高、灵敏度高的特点,可用于快速筛查、鉴定沙门菌及由其引起的感染性腹泻。     

实时聚合酶链反应检测O1群和O139群霍乱弧菌方法的建立及应用

目的建立检测O1群和O139群霍乱弧菌的实时荧光聚合酶链反应（RT—PCR）方法并进行水体标本的检测评价。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb序列设计引物，利用SYBRGreen染料，建立同时检测霍乱弧菌O1群和O139群的RT—PCR方法，对所建立的方法分别进行实验室内的灵敏度、特异性及重复性评价。采集河口水标本增菌后进行RT—PCR检测，与分离培养方法比较评价实际应用价值。结果建立了检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重RT—PCR方法，根据扩增产物的溶解温度能有效区分O1群和O139群霍乱弧菌两种目标片段的扩增；对其他10种弧菌染色体DNA没有扩增；RT—PCR检测524份河口水体标本的增菌液，与常规分离方法相比显示了明显的灵敏性，并且所有常规分离方法阳性标本其荧光PCR检测亦为阳性。结论以O1群和O139群rfb基因为目标检测片段建立的霍乱弧菌RT—PCR方法可用于环境水体样本中霍乱弧菌常规分离前的快速筛查。