果蝇Presenilin蛋白影响神经肌肉接点分布

为观察 Presenilin蛋白对突触可塑性的影响 ,本研究以果蝇神经肌肉接点分布为模型 ,发现 Presenilin突变 Psns3可导致神经肌肉接点数量的明显减少 ,而且当提高温度后 ,可造成接点数量的进一步减少。提示 ,Presenilin蛋白参与了突触的形成过程 ,进而可能会影响到学习记忆。结果还提示 ,温度对于维持突变蛋白的构象及功能发挥着重要影响     

Wistar大鼠SONIC HEDGEHOG基因的克隆和表达

为了获得SHH蛋白以研究它在治疗神经变性疾病中的作用，本室提取不同胚龄Wistar胎鼠中的总RNA，应用RT-PCR技术获得SHH-N的cDNA，重组于pGEM-T载体，经测序鉴定后，构建原核表达质粒并获得表达菌株p15．SHH-H，然后诱导SHH蛋白的表达。结果发现，在E11．5-E20．5胎鼠的脊索中能克隆到630bp的cDNA片段，并且随胚龄增加，此片段的表达量逐渐减少；测序结果显示，此片段及其所编码的氨基酸序列同数据库中人、小鼠和SD大鼠的SHH—N的序列有较高同源性；表达菌株经诱导后产生约21kD的融合蛋白。提示SHH-H是一种发育相关基因，在不同种属中的同源性较高，并且在原核系统中能进行表达。     

乙酰胆碱对海马神经元网络自发同步钙振荡的调控作用

目的 以体外原代培养海马神经元网络为模型,应用钙成像技术,观察不同浓度乙酰胆碱(ACh)对海马神经元网络同步自发钙振荡的调控作用.方法 取(18±1)d的SD胎鼠,分离海马组织,制成细胞悬液,进行细胞培养.培养9～13d的海马神经元用于实验.分别加入不同浓度的ACh,应用钙成像技术,观察其对钙振荡频率的影响.结果 加入1μmol/L ACh后,钙振荡频率增加至对照期的(116.10±2.63)% (x±s,n=16);加入10μmol/L,100μmol/L ACh后,钙震荡频率增加到对照期的(138.39±4.03)%(n=27)和(141.37±2.33)%(n=21);而加入500μmol/L ACh钙震荡频率在前4min可增加到对照期的(156.81±1.65)%(n=18),但在后6min时段内海马神经元网络同步自发钙震荡频率减慢,到16～18min,钙震荡频率减慢至对照期的(52.27±0.55)%(n=18).结论 ACh在一定浓度范围内可以加快海马神经元网络同步自发钙振荡频率,调节神经元网络兴奋性.     

功能性SDF-1受体在非洲爪蟾胚胎发育中的表达研究

本文目的在于探索骨髓基质细胞源因子-1(SDF-1)的功能性受体在非洲爪蟾胚胎发育过程中的表达状况,进而探讨SDF-1在胚胎发育中的作用。采用胚胎细胞分散培养及钙成像技术对不同发育时期及胚胎不同部位的分散培养细胞进行了检测,结果证明:在主要由神经板、神经嵴细胞和基板迁移而来的胚胎头部组织中,其功能性受体表达量远高于背部及尾部组织(P<0.001),并从胚胎14～21期呈上升趋势,在21～35期保持高表达率。结果提示,此功能性受体在胚胎期的表达密度与成体相应区域的器官结构复杂程度呈正相关,说明SDF-1及其受体在爪蟾的生长发育中起作用。     

人神经营养素-3基因的克隆、表达及其活性检测

为了获取神经营养素 -3 (NT-3 )将之用于神经系统疾病的治疗 ,采用 RT-PCR技术 ,从人胎脑组织特异性扩增并克隆了人 NT-3全长以及成熟蛋白编码基因 ,将其分别克隆至表达载体 pc DNA3 .1与 p ET2 8a,构建了重组真核表达载体 pc DNA3 .1-NT3和重组原核表达载体 p ET2 8-NT3 s。 pc DNA3 .1-NT3经脂质体介导转染至大鼠胚胎脑纹状体神经胶质细胞 ,以 G418筛选出抗性阳性克隆 ,该克隆株与大鼠胚脑纹状体神经干细胞体外共培养 5 d,MAP-2 (微管相关蛋白 2 )免疫细胞化学反应结果显示 ,转染细胞株所表达的 NT-3蛋白具有生物学活性 ,可促进共培养的纹状体神经干细胞的突起生长。将 p ET2 8-NT3 s转化大肠杆菌 ,以 IPTG诱导 ,获得了相对分子质量约 18k D的 6XHis-NT3融合蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 0 %左右。经镍柱亲和纯化 ,得到纯度达 95 %的 rh NT-3蛋白 ,免疫印迹证实所获蛋白产品具有特异的免疫反应性     

IGF-1对海马神经元抑制性突触传递的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对原代培养海马神经元抑制性突触传递的影响并探讨其可能机制。方法采用无血清培养基培养海马神经元,在10~14d时用于实验。电生理实验分为正常对照组和IGF-1处理组(实验前24h加入IGF-1,终浓度为10μmol/L)。细胞免疫化学实验分为正常对照组、IGF-1处理组和MAPKS转导通路抑制剂(PD98059)预处理组(IGF-1处理前1h加入PD98059,终浓度为10μmol/L)。采用全细胞膜片钳记录方法观察IGF-1对抑制性突触后电流(IPSC)的影响,用细胞免疫化学方法观察其对γ-氨基丁酸能细胞数目影响。结果IGF-1能够显著降低IPSC的频率,但与对照组比较其幅度差异无统计学意义;IGF-1能够明显减少GABA阳性细胞数目,应用PD98059后可阻断这种作用。结论IGF-1的上述作用可能参与海马对学习记忆功能的调节过程。     

氧化乐果对烟碱样乙酰胆碱受体离子通道的阻断作用

在非洲爪蟾胚胎神经和肌肉细胞上，用膜片钳技术研究了有机磷杀虫剂氧化乐果对烟碱样乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）离子通道的作用，发现它对自发微终板电流（ＭＥＰＣ）有双重作用，低浓度（８．６４μｍｏｌ·Ｌ－１）增加其幅度和频率，高浓度（３０．１６μｍｏｌ·Ｌ－１）则相反．６５９μｍｏｌ·Ｌ－１氧化乐果缩短通道开放时间，降低开放概率，对ｎＡＣｈＲ通道电流幅度和细胞膜钠，钾通道电流无影响．提示氧化乐果为ｎＡＣｈＲ离子通道开放阻断剂．本实验从分子水平上为有机磷杀虫剂对ＡＣｈＲ的直接作用提供了依据．     

Capsazepine抑制培养海马神经元网络线粒体转运(英文)

capsazepine(CZP)是辣椒素的合成类似物,也是野香草型瞬时感受器电位通道1(TRPV1)的选择性抑制剂。TRPV1在体内有广泛的表达谱,使CZP有广泛的作用位点。除此之外,以往的研究结果表明CZP除了作用于TRPV1外还有更复杂的信号通路。本课题研究了CZP对体外培养的大鼠海马神经元网络内线粒体转运的作用并分析其可能机制。结果显示:20μmol/L的CZP可有效抑制原代培养海马神经元网络中的线粒体转运。CZP急性作用不引起胞内钙离子浓度的升高,也不引起细胞的调亡。胞外更换为无外钙记录液,或者将GSK3β抑制剂SB415286与CZP共孵育,均不影响CZP对线粒体转运的抑制作用。然而,将BAPTA-AM与CZP共孵育,抑制了CZP对线粒体转运的抑制作用。本研究结果表明,CZP直接通过胞内钙信号通路影响神经元的线粒体转运,与胞外钙流或转运蛋白的磷酸化无关。     

有机磷杀虫剂氧化乐果和乐果对爪蟾胚胎神经肌肉细胞突触传递的影响

有机磷杀虫剂氧化乐果和乐果对爪蟾胚胎神经肌肉细胞突触传递的影响徐海滨贺锡雯谢佐平１何凤生（中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所，北京１０００５０；１清华大学生命科学与技术系，北京１０００８０）有机磷杀虫剂通过抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）而产生毒性...     

有机磷杀虫剂乐果对乙酰胆碱受体通道的阻断作用

在非洲有爪蟾蜍胚胎神经和肌肉细胞上，用膜片钳技术研究了有机磷杀虫剂乐果对乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）通道的作用，发现它对自发微终板电流（ＭＥＰＣ）有双重作用，低剂量（２１．６μｍｏｌ／Ｌ）增加其幅度和频率，高剂量（２３７μｍｏｌ／Ｌ）则相反。１４６μｍｏｌ／Ｌ乐果缩短通道开放时间降低开放概率。对ＡＣｈＲ通道电流幅度和细胞膜钠、钾通道电流无影响。提示乐果为ＡＣｈＲ通道开放阻断剂。本实验从分子水平上为有机磷杀虫剂对ＡＣｈＲ的直接作用提供了依据。