广西横县某水库小型鱼类携带吸虫囊蚴的分子生物学初步检测

目的了解广西横县鱼类吸虫感染的虫种,评价形态学结合ITS2序列分析鉴定囊蚴的有效性。方法采集横县某水库小鱼,采用人工消化法消化收集囊蚴,在解剖镜下分捡单个囊蚴,按形态学特征鉴定分类,提取不同形态囊蚴的DNA后进行ITS序列PCR扩增和测序,获得的序列在NCBI上进行Blast分析,并用Mega 6.0.6软件构建系统发生树。结果检测小型鱼类112条,吸虫囊蚴阳性率为39.29%。观察到5种不同形态的囊蚴。ITS2序列分析鉴定为4种吸虫:华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)、钩棘单睾吸虫(Haplorchis pumilio)、台湾棘带吸虫(Centrocestus formosanus)和日本全冠吸虫(Holostephanus dubinini)。其中一种在形态学上判定为非人类吸虫的囊蚴经分子生物学鉴定为华支睾吸虫。结论在横县某水库小鱼中检出4种吸虫囊蚴,分别为华支睾吸虫、台湾棘带吸虫、钩棘单睾吸虫和日本全冠吸虫。仅靠形态学上对鱼类吸虫囊蚴进行虫种鉴定有一定的缺陷,可以结合ITS2序列分析来完善。     

南宁市福寿螺和褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫调查分析

目的了解南宁市广州管圆线虫中间宿主福寿螺和褐云玛瑙螺的感染现状,为当地广州管圆线虫病的预防和控制提供依据。方法在居民生活区附近的公园、沟渠、水塘及生活区附近的农田和水库等处收集福寿螺和褐云玛瑙螺。采用酶消化法检查广州管圆线虫的感染情况,统计阳性率、幼虫数和幼虫中位数,并进行动物感染后对幼虫和成虫进行分子鉴定。结果从9个调查点共采集到250只福寿螺,其中有8个调查点发现有广州管圆线虫感染,感染率从2.86%到11.25%不等;单个螺检获幼虫数最多为7条,其余为1~3条,检获幼虫的中位数除一个调查点为1.5条外,其余点均为1条。从5个调查点共采集到90只褐云玛瑙螺,其中有3个点发现广州管圆线虫感染,感染率分别为6.25%、21.95%和80.00%,单个螺检获最多幼虫数分别为8、1 200和2 000条,幼虫中位数分别为8、70和100条。结论南宁市不同地区福寿螺普遍存在广州管圆线虫感染,但是感染率和虫体中位数较低。褐云玛瑙螺中的广州管圆线虫感染呈地域性分布,部分地区感染率和虫体中位数较高。南宁市福寿螺、褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫情况广泛存在,居民有潜在的感染风险,应加强相应的防控工作。     

横川后殖吸虫与扇棘单睾吸虫双重PCR鉴别方法的建立

目的建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawai)和扇棘单睾吸虫(Haplorchis taichui)的双重PCR方法。方法从Gen Bank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件设计2对特异性引物,并优化PCR反应体系和反应条件,建立双重PCR法。将横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫与17个相关虫种一起进行PCR扩增,检测方法的特异性。横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的ITS1扩增产物经p MD19-T载体进行TA克隆获得质粒,并将质粒进行梯度稀释,检测其敏感性。应用新建的双重PCR法鉴定从47副猫内脏和40副犬内脏中收集的吸虫,检测该方法的准确性和实用性。结果新建的双重PCR法能扩增出横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的目的片段,大小分别为648 bp和279 bp,不与钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、心形咽口吸虫、次睾属吸虫囊蚴、外睾属吸虫囊蚴、藐小棘隙吸虫、抱茎棘隙吸虫、弗氏棘口吸虫、似锥低颈吸虫、全冠属吸虫、重盘属吸虫、异尖属线虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、瓦氏瓦生吸虫、背孔属吸虫和宫脂属线虫的DNA发生交叉扩增,具有较好的特异性。敏感性试验表明,应用该双重PCR法,2类吸虫DNA的最低检测值分别为1.49×10-1pg和1.14×10-1pg。对来自猫内脏和犬内脏的吸虫检测表明,该方法能够区分横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫,并且不与猫、狗中其他的吸虫DNA发生交叉扩增。结论本研究所建立的双重PCR法可用于快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫。     

食蟹猴体内瓦氏瓦特松吸虫ITS序列测定及其种系发育分析

目的对分离自食蟹猴（Macaca fascicularis）的瓦氏瓦特松吸虫（Watsonius watsoni）进行初步形态学观察．测定其核糖体基因内转录间隔区（internal transcribed spacer region,ITS）序列,并分析其基于ITS2序列的系统发生关系。方法将从食蟹猴中分离的瓦氏瓦特松吸虫用盐酸卡红染色后观察其形态学特征。PCR扩增吸虫的ITSl与ITS2序列并测序：运用在线序列比对工具Clustal W2．将测序结果与ITS2数据库上部分同盘类吸虫及人兽共患吸虫致病种的序列进行多重比对分析．应用MEGA4．0软件,采用邻位相连法构建系统发生树进行分析。结果盐酸卡红染色后显示,瓦氏瓦特松吸虫各形态特征符合经典的分类学描述。PCR测序后获得ITS1、ITS2序列,提交GenBank后获得登录号分别为KC763806、GU999987,其中ITS2长度为295bp,（G＋C）含量为52．20％。基于ITS2建立的系统发生树显示,其与同归属于同盘总科腹盘科的野牛平腹盘吸虫（Homalogaster paloniae）、人拟腹盘吸虫（Gastrodiscoides hominis）构成自展值为95％的拓扑分支。结论测定了瓦氏瓦特松吸虫ITS序列．获得了基于ITS2的系统发生树。     

基于线粒体COⅠ基因的广西不同地区福寿螺遗传多态性分析

目的 通过对广西不同地区福寿螺的COⅠ基因进行分析,以了解广西福寿螺种群的遗传多态性。方法 从南宁市横县、桂林市全州县和荔浦县、贺州市富川县、百色市田林县和崇左市凭祥县共计6个县区采集福寿螺样本,提取DNA并进行COⅠ基因的PCR扩增及测序。运用MAGE 7.0将本研究获得的单倍型与GenBank中的福寿螺单倍型使用邻接法构建系统进化树,并计算个体间的遗传距离,分析其遗传多样性。结果 COⅠ基因长度为493 bp,从11个样本鉴定出2种单倍型：单倍型1（Haplotype 1）和单倍型2（Haplotype 2）。其中9个样本为Haplotype 1,分别来源于南宁市横县（2个）、贺州市富川县（1个）、桂林市荔浦县（1个）、百色市田林县（2个）、崇左市凭祥县（3个）,该单倍型与小管福寿螺遗传距离最近,为0.047;2个样本为Haplotype 2,分别源自为南宁市横县和桂林市全州,与孤岛福寿螺遗传距离最近,为0.062。根据上述条件所构建的进化树形成了7个分支,分别为P. canaliculata、P. camena、P. insularum、P. paludosa、P. diffusa、P. haustrum、和外群Pilaconica。Haplotype 1与来自美国夏威夷 （GenBank登录号 EU 523129）的P. canaliculata组成一个分支,Haplotype 2与来自巴西（GenBank登录号EF514942）的P. insularum组成一个分支,且置信值均在98%以上。结论 初步判断广西地区存在小管福寿螺与孤岛福寿螺两种类型的福寿螺,其种群内没有发现遗传分化。     

广西来宾市1例片形吸虫病诊治及流行病学调查

报道广西来宾市1例片形吸虫病诊疗和流行病学调查过程,为片形吸虫病预防控制提供依据。患者因上腹部疼痛到医院就诊,根据患者主要症状、体征、临床表现,经腹部B超、CT检查及粪便水洗沉淀法镜检发现片形吸虫卵,提取虫卵DNA经ITS2基因扩增、测序和比对,与NCBI巨片形吸虫ITS2序列同源性为99.2%,确诊患者为巨片形吸虫病,经三氯苯达唑驱虫治疗后症状消失、粪便复查虫卵阴性。以水洗沉淀法检测患者周边33份人粪便样本和以压片镜检200份小土蜗螺及20份尖膀胱螺检测片形吸虫卵均为阴性;检测患者居住地附近10份水牛粪便,有8份（占80%）检测到片形吸虫卵,ITS2基因扩增、测序证实为巨片形吸虫;收集患者种植并腌制生吃芋檬10份,也未发现片形吸虫囊蚴粘附。结果表明,本次病例是1例偶然的片形吸虫感染病例,患者临床症状缺乏特异性,需结合大便虫卵检查和分子诊断进行确诊。     

华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段原核表达及其抗原性分析

目的 通过克隆和表达获得华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段重组蛋白并分析其抗原性。方法 以pET-28a-CsCP1-3重组质粒为模板进行目的片段CsCP1a-3a PCR扩增,构建pET28a-CsCP1a-3a表达载体,并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析;表达产物经变性、纯化及复性,与华支睾吸虫感染大鼠血清行Western blot分析。结果 成功构建pET28a-CsCP1a-3a重组质粒;SDS-PAGE分析显示,重组蛋白CsCP1a-3a以包涵体形式表达;重组蛋白CsCP1a-3a可被华支睾吸虫感染后第4、5周大鼠血清识别。结论 重组蛋白CsCP1a-3a具有较好抗原性,可作为华支睾吸虫感染诊断候选分子。     

南宁市市售猫华支睾吸虫感染调查

目的　了解南宁市猫华支睾吸虫感染情况，为华支睾吸虫保虫宿主防控提供依据。方法　从南宁市猫屠宰点购买猫肝，解剖胆囊和肝脏，查找华支睾吸虫并计数；对收集到的不同形态和大小的华支睾吸虫进行形态学观察和ITS2基因扩增和测序，通过BLAST比对分析确定虫体种类。结果　从南宁市2个猫屠宰摊面共收集了105个猫肝脏，其中有68个发现有华支睾吸虫感染，感染率为64.76%。单个肝脏虫体数量最多达980条，虫体数量中位数为72条/个肝脏。从检出的虫体中分离到3种不同大小和形态的吸虫，经形态学和ITS2基因扩增、测序、比对分析鉴定，均为华支睾吸虫。结论 　南宁市市售猫华支睾吸虫感染率较高，应该加强相关防控措施。     

2015—2019年广西壮族自治区国家血吸虫病监测点螺情

目的　了解广西壮族自治区钉螺分布特征,为评估血吸虫病传播风险、科学制定血吸虫病监测方案提供参考依据。方法　2015—2019年,在广西壮族自治区设立19个国家血吸虫病监测点,其中固定监测点4个、流动监测点15个,每年采用系统抽样结合环境抽查法进行钉螺分布调查,对查获的钉螺采用压碎镜检法结合环介导等温扩增技术（LAMP）检测血吸虫感染性。结果　2015—2019年,广西壮族自治区19个国家血吸虫病监测点累计发现有螺面积17 040 ~ 39 527 m2,其中新发现有螺面积6 214 m2、复现有螺面积16 563 m2,活螺平均密度和有螺框出现率分别为0.019 2只/0.1 m2和1.11%,未发现血吸虫感染性钉螺。与2015年相比,2019年广西壮族自治区国家血吸虫病监测点有螺面积增加了121.46%,但总活螺平均密度和有螺框出现率分别下降了50.34%（Z = ?0.422,P > 0.05)和42.85%（χ2 = 130.41,P < 0.01）。发现的有螺环境均分布于4个固定监测点,钉螺分布主要环境类型为沟渠、水田、旱地等,主要植被类型为杂草。结论　 广西壮族自治区存在钉螺局部扩散等血吸虫病再传播的风险因素。今后仍需加强钉螺监测工作,进一步巩固血吸虫病消除成果。     

4种杀虫剂对广椎猎蝽的实验室杀灭效果观察

目的研究4种杀虫剂对广椎猎蝽的实验室杀灭效果。方法在住宅区附近锥蝽集中的栖息场所采集锥蝽成虫和高龄幼虫,对收集的锥蝽进行形态学鉴定,锥蝽线粒体细胞色素b(Cytb)基因的扩增、测序和NCBI比对分析,确定锥蝽的种类。采用4种常用卫生杀虫剂的常规使用剂量按GB/T 13917.1-2009进行室内药效测定杀灭效果。结果锥蝽经形态学鉴定为广椎猎蝽;锥蝽的Cytb基因经NCBI数据库比对表明与广椎猎蝽的同源相似性最高,证实捕获的锥蝽种类为广椎猎蝽。4种杀虫剂的使用剂量为高效氟氯氰菊酯25 mg ai/m~2、高效氯氟氰菊酯25 mg ai/m~2、溴氰菊酯15 mg ai/m~2和残杀威1.0 g ai/m~2,对广椎猎蝽的室内药效KT_(50)分别为13.43、14.50、15.18和17.73 min,24 h死亡率均为100%。结论 4种杀虫剂的常用剂量在实验室条件下对广椎猎蝽均有较好的杀灭作用。