鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验中通过吸光度值测定菌液浓度的方法研究

目的：研究鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）中菌液浓度和吸光度值[D（λ）值，λ为波长数值]的关系，开发通过吸光度值测定菌液浓度的方法。方法：选取Ames试验中常用的营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA102作为试验菌株，严格控制菌液扩增条件，对比分析540和600 nm波长下菌液的吸光度值的高低以确定最佳测定波长，对比分析菌株扩增0、2、4、6、8、10、12、14 h后的菌液浓度以确定最佳扩增时间。在最佳测定波长和最佳扩增时间下，测定菌液吸光度值，并通过平板菌落计数法测定菌液浓度，获得菌液浓度和吸光度值的回归方程。结果：菌株TA102的最佳测定波长为540 nm，最佳培养条件为37℃、100 r/min、10 h，菌液浓度和D（540）值的直线回归方程为y=4×10⁹x[方程中x为D（540）值；y为菌液浓度，单位为个/mL]。结论：应用上述菌液浓度和D（540）值的直线回归方程，可通过测定D（540）值实时控制菌液达到要求浓度，从而确保试验菌液的质量。     

氟化钠的体外遗传毒性

[目的]研究氟化钠对小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y TK+/-3.7.2c)微核的影响及其对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)细胞染色体畸变及细胞凋亡的影响. [方法]以灭菌注射用水为阴性对照,采用胞质分裂阻滞微核细胞组学试验法,并以丝裂霉素(0.1 μg/mL)为阳性对照,研究氟化钠3个浓度组(100、75与50 μg/mL)对L5178Y TK+/-3.7.2c细胞总微核率、核分裂指数、核质桥发生率、核芽突发生率与含核突芽的双核细胞数/含Ⅰ型微核与含Ⅱ型微核的双核细胞数值的影响.以空白细胞为阴性对照,丝裂霉素(0.2 μg/mL)为阳性对照,氟化钠以600、360、216和130 μg/mL的浓度作用于CHL细胞,以观察其对CHL细胞致突变的作用.用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测氟化钠对CHL细胞凋亡的影响. [结果]与阴性对照组的相比:①阳性对照组(丝裂霉素,0.1 μg/mL)和75、100 μg/mL氟化钠组L5178Y TK+/-3.7.2c细胞微核率明显升高(P＜0.05),且氟化钠三个浓度的氟化钠染毒组细胞核质桥发生率、含核突芽的双核细胞数/含Ⅰ型微核与含Ⅱ型微核的双核细胞数值均升高(P＜0.01);②阳性对照组(丝裂霉素,0.2 μg/mL)CHL细胞畸变率明显升高(P＜0.05);氟化钠各染毒组畸变率差异无统计学意义(P＞0.05),其早期凋亡率随染毒浓度的增加而上升(r=0.814,P＜0.05). [结论]氟化钠对L5178Y TK+/-3.7.2c细胞染色体具有损伤作用,对CHL细胞没有致突变作用,可以诱导CHL细胞的早期凋亡,呈现剂量相关性.     

盐酸溴己新中杂质N-(2-硝基)-N-环己基-N-甲胺的遗传毒性评价

目的：评价盐酸溴己新国抽杂质的遗传毒性,为其制定合理限值提供毒理学依据。方法：按照 《中国药典》和 ICH M7指导原则的要求,采用基于专家知识规则Derek和基于统计学的Sarah的(Q) SAR软件对杂质N-(2-硝基)-N-环己基-N-甲胺进行分类,采用Mini-Ames试验进一步验证预测结果并进一步对杂质进行准确分类,制定合理限度。结果：通过(Q)SAR评估,N-(2-硝基)-N-环己基-N-甲胺为3类杂质;Mini-Ames试验结果显示N-(2-硝基)-N-环己基-N-甲胺在无和有活化系统条件下,各剂量组菌落数均未增加,Mini-Ames试验为致突变阴性。结论：N-(2-硝基)-N-环己基-N-甲胺没有遗传毒性,可按普通杂质制定限值。     

雷公藤红素体内与体外急性毒性试验结果的比较

[目的]研究雷公藤红素对3T3细胞的毒性作用,获得的细胞毒性结果预测急性毒性半数致死量(LD50),并与采用小鼠上下法(UDP)和Bliss法测定的急性毒性数值进行比较. [方法]以已验证的3T3细胞中性红摄取为细胞毒性模型,以0.01～2.05 mg/L的8个浓度(剂间比为2.15)的雷公藤红素进行处理,分别于处理后48h进行中性红摄取试验,计算半数抑制浓度(IC50).以RC数学模型预测其全身急性毒性LD50.参考此LD50值设定起始剂量进行小鼠上下法实验.取70只ICR小鼠,雌雄各半,以3、4、5、6、7、8mg/kg的雷公藤红素溶液和0mg/kg[4％二甲亚砜(DMSO)氯化钠注射液]静脉给药,观察14d,根据动物死亡率采用Bliss法计算LD50. [结果]雷公藤红素3T3细胞中性红摄取试验的IC50值为(0.1197 ±0.0187)mg/L(n=2),决定系数R2＞ 0.96,预测其全身急性毒性LDs0为5.375 mg/kg.上下法起始剂量设为3.3 mg/kg,测得雷公藤红素在ICR小鼠的LD50值为3.157 mg/kg,95％可信区间为3.1～5.5 mg/kg.小鼠Bliss法测定急性毒性LD50为4.899mg/kg,95％可信区间为4.483～5.354 mg/kg. [结论]雷公藤红素的体外3T3细胞毒性预测急性毒性与体内方法所得数值一致.