桔青霉素简介及其免疫学检测方法研究进展

桔青霉素是能引起肾脏毒性的真菌毒素 ,并有致癌性。本文综述了桔青霉素的物理、化学和生物学特性及其免疫学检测方法研究进展。     

化学发光酶免疫分析法测定牛奶中的双酚A

目的建立牛奶中双酚A(bisphenol A,BPA)的间接竞争化学发光酶免疫分析检测方法。方法通过优化抗原包被浓度、甲醇浓度、酶标二抗的稀释比例、缓冲液的pH、离子强度(以Na~+计)等建立竞争抑制曲线,确定线性范围和检出限,并对牛奶样品进行加标回收实验。结果在最佳实验条件下,半抑制浓度(IC_(50))为3.95 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.66 ng/m L,牛奶样品中双酚A加标回收率为95.0%~112.9%,相对标准偏差为0.93%~3.96%。结论该方法具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于牛奶样品中双酚A的测定。     

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

抗桔青霉素单克隆抗体的研制与鉴定

目的制备抗桔青霉素的单克隆抗体。方法采用活性酯法、甲醛加成法和羰基二咪唑法制备了4种桔青霉素与载体蛋白的偶联物(A、B、C和D),免疫小鼠制备抗桔青霉素单克隆抗体。结果免疫原性鉴定证明偶联物C可刺激BALB/c小鼠产生抗桔青霉素的抗体,细胞融合后筛选到一株抗桔青霉素的单克隆抗体,单抗与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为20~10,00ng/ml,检测下限为10ng/ml。在小麦样品中的加标回收率为95%~112%,变异系数为9.1%~18.6%。结论本研究成功筛选到抗桔青霉素单克隆抗体。     

采用噬菌体展示技术筛选黄曲霉毒素B_1模拟抗原表位

目的从随机肽库中筛选黄曲霉毒素B1模拟抗原表位,以建立无需黄曲霉毒素B1偶联抗原的免疫学检测方法。方法利用噬菌体展示技术,以抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体为靶分子,从随机七肽库中进行生物亲和淘选,ELISA鉴定阳性克隆,通过DNA测序对每个阳性克隆进行定性分析。结果通过4轮结合/扩增循环,获得了能与抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体结合的肽,采用间接竞争ELISA,筛选到了4株能抑制黄曲霉毒素B1的阳性克隆子,经DNA测序得到HXXDPXH共有序列,其中X为任意氨基酸。以其中P10噬菌体阳性克隆建立竞争ELISA方法,线性范围为500~2000pg/ml,检测下限为50pg/ml。结论利用噬菌体展示技术筛选到了黄曲霉毒素B1模拟抗原表位,并以其代替黄曲霉毒素B1偶联抗原建立了免疫学检测方法。     

乙型病毒性肝炎患者血清IL-2、sIL-2R和TNF-α的水平及其临床意义的研究

目的：探讨各类型的乙型病毒性肝炎患者血清白细胞介素-Ⅱ（IL-2）、可溶性白细胞介素-Ⅱ受体（sIL-2R）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化规律和临床意义,以及重症肝炎患者进行人工肝支持系统（ALSS）治疗后上述指标的变化规律。方法：应用酶联免疫吸附实验（ELISA）测     

辣椒粉中苏丹红Ⅰ的免疫亲和柱-高效液相色谱法检测

目的 建立用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定食品中苏丹红Ⅰ的方法.方法 将制备好的苏丹红Ⅰ单克隆抗体与经修饰的琼脂糖凝胶Sepharose-4FF偶联,制成苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,样品经乙腈提取,并用PBS缓冲液稀释成20％乙腈-PBS溶液后,过实验室自制的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱净化,建立IAC-HPLC法检测苏丹红I含量.结果 测得辣椒粉中SudanⅠ的回收率为29.12％ ～90.32％,并随机抽检了市售的及自种的四种辣椒粉,检测结果均为阴性.结论 成功制备了苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,并建立了免疫亲和柱-HPLC法测定辣椒粉中的苏丹红Ⅰ的方法.     

免疫印迹法检测过敏原用于过敏性皮肤病诊断的价值

目的 探究免疫印迹法检测过敏原用于过敏性皮肤病诊断的价值。方法 选择2020年1月至2022年10月来永新县皮肤病防治所就诊的过敏性皮肤病患者120例,入院后均进行免疫印迹法检测,记录吸入性过敏原及食入性过敏原特异度IgE抗体阳性率,并分析不同性别及不同季节的过敏原特异度IgE抗体阳性率情况。结果 本研究中吸入性过敏原排名前三的是：尘螨组合(屋尘螨/粉尘螨)31.7%、树花粉(柳树/杨树/榆树)19.2%、猫毛皮屑17.5%;食入性过敏原排名前三的是：牛奶20.0%,鸡蛋白16.7%,鱼虾蟹15.0%;男性与女性患者的尘螨组合(屋尘螨/粉尘螨)、树花粉(柳树/杨树/榆树)、艾蒿的阳性率比较,差异有统计学意义(χ²=5.393、6.009、5.428,P=0.020、0.014、0.020),而两者在猫毛皮屑、狗毛皮屑、普通豚草、蟑螂、真菌混合组及食入性过敏原阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同季节的尘螨组合(屋尘螨/粉尘螨)、艾蒿阳性率比较,差异有统计学意义(χ²=11.130、8.750,P=0.011、0.033),而...     

蒜氨酸酶基因水平研究进展

蒜氨酸酶又叫半胱氨酸亚砜裂解酶,能将蒜氨酸催化成蒜素,后者具有抗血小板聚集、调节血压、降血糖、降胆固醇、抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、增强免疫力、抗肿瘤和抗氧化等药理学功能。该文从基因水平角度,综述了蒜氨酸酶在不同葱属植物中的基因研究情况,归纳了NCBI核酸数据库中检索到的九种植物中32条蒜氨酸酶核酸序列,并具体介绍了洋葱鳞茎蒜氨酸酶基因;综述了蒜氨酸酶基因研究方法发展历程以及蒜氨酸酶基因重组与表达的研究进展。     

高灵敏度玉米赤霉烯酮免疫层析检测卡的研制

目的 研制高灵敏度玉米赤霉烯酮免疫层析检测卡。方法 制备一种粒径为(116.7±2.0)nm、分支多的金纳米花(AuNFs),用AuNFs标记玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(AuNF-ZEN-Mab),研制出用于检测粮食和饲料中的玉米赤霉烯酮金纳米花免疫层析卡(ZEN-GFICT)。结果 对比法ZEN-GFICT和消线法ZEN-GFICT对ZEN标准品的检测灵敏度分别为0.5和6 ng/mL,对实际样品检出限分别为5和60μg/kg,是传统ZEN纳米金免疫层析检测卡(ZEN-GICT)的6倍(对比法)和4.5倍(消线法)。21份样品的ZEN-GFICT判断结果(对比法和消线法)与ELISA试剂盒检测结果相比,总符合率均为90.5%。结论 ZEN-GFICT对比法和消线法可以对样品中ZEN含量做出5、 5～60和60μg/kg的三个区间判定。检测样品时,能够筛查ZEN污染程度低的样品。