中枢神经内的单胺氧化酶——Ⅰ.单胺氧气酶B

单胺氧化酶(nonoamine oxidase,MAO)位于神经细胞线粒体膜上,参与单胺能神经递质包括多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(moradrenaline,NA)和5-羟色胺(serotonin,5-HT)的降解过程,这种酶还发现于脏器内,如肝,肾和小肠。中枢神经系统中的MAO确认于五十年代末。MAO活性被抑制可导致内源性单胺的蓄积。MAO抑制剂常被用作抗镇静剂,这些药物在动物和人可引起长时间觉醒和取消异相睡眠(或快动眼睡眠)。机理在于增加中缝核内神经元可能是5-HT能神经递质和释放。抗MAO药物还可抑制利血平导致的桥膝枕(ponto-geniculo-occipital,PGO)电活动,它们还可以改变对内分泌的控制和抑制,例如催乳素的释放。     

应用复合诱导突变分离PCR法检测mtDNA的单核苷酸多态性

目的应用复合诱导突变分离PCR(multiplexed mutagenically separated PCR,MS-PCR)技术、银染分型,建立线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)编码区单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型系统,探讨其应用价值。并调查了成都汉族群体mtDNA编码区4个SNP基因座等位基因频率和单倍型分布情况。方法根据SNP基因座(C12705T、A8701G、G8584A、C10400T)设计两条片段相差4个碱基的等位基因特异性引物和一条公共引物,4个SNP基因座复合扩增,PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP基因座为长度不同的单一谱带,其分型结果与直接测序一致。在成都汉族160名无关个体中,4个SNP基因座C12705T、A8701G、G8584A、C10400T等位基因频率分别为0.3813/0.6187、0.4813/0·5187、0.8250/0.1750、0.4938/0.5062;共检出6种单倍型,单倍型的基因多样性为0.7137。结论建立的MMS-PCR银染分型系统是一种简单、快速、准确、有效的SNP分型方法,对建立mtDNA编码区SNP数据库,研究群体遗传学、进化学和进行法医学个人识别和亲子鉴定有重要意义。     

A型肉毒毒素治疗大鼠致敏性鼻炎的实验研究

目的　研究A型肉毒毒素 (botulinumtoxin A ,BTX A)对大鼠变应性鼻炎、鼻溢是否有治疗作用及对血管活性肠肽 (vasoactiveintestinalpolypeptide ,VIP)免疫表达的延时性。 方法　用卵清蛋白 (ovalbumin)致敏健康Wistar大鼠 ,制作变应性鼻炎动物模型。将 2 0只大鼠随意分为 3组 ,即对照组 (8只 )、致敏组 (12只 )和致敏后BTX A用药组 (6只 )。观察给予BTX A前后时限大鼠鼻部症状和体征的变化。采用组织学和免疫组织化学方法观察鼻腔黏膜形态学改变以及对VIP表达的影响。结果　 (1)致敏组动物鼻分泌量明显增多。组织学结果显示 :致敏组鼻腔黏膜水肿、腺体增生、嗜酸性粒细胞增多。免疫组织化学结果显示 :致敏组腺体周围VIP纤维密集 ,呈束状。 (2 )致敏后BTX A用药组 ,鼻分泌量逐渐减少 ,致敏后BTX A用药组与致敏组相比鼻分泌量差异有显著性(P <0 0 5 )。组织学结果示 :鼻黏膜上皮完整 ,腺体明显减少 ,腺管萎缩。免疫组织化学结果示 :致敏组动物致敏后BTX A用药组腺体周围VIP纤维减少 ,未见束状VIP纤维。结论　BTX A能缓解变应性鼻炎流涕 ,VIP纤维密度、数量和免疫阳性反应减少 ,能治疗变应性鼻炎的鼻溢症状     

Estazolam逆转结节乳头体核组胺引发的觉醒

目的观察增加γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid,GABA)受体与GABA亲和力的Estazolam对结节乳头体核(tuberomammillary nucleus,TMn)组胺(histamine,HA)产生觉醒的作用,探究GABA与TMn的HA对睡眠-觉醒周期的调节。方法♂SD大鼠随机分为对照组,生理盐水组,Estazolam组,HA组,以及HA+Estazolam(2.5mg)组,HA+Estazolam(5mg)组。颅骨和颈肌植入脑电图(EEG)和肌电图(EMG)电极,带芯的不锈钢导管植入TMn邻近区以备微量注射药物。术后恢复7d,各组分别记录24h的EEG和EMG,分析睡眠-觉醒周期中各时相的变化。结果:TMn内注射HA(1μg.kg-1)在24h中觉醒时间增加(P<0.01),慢波睡眠被抑制,但不影响异相睡眠(paradoxicalsleep,PS)。灌胃给予Estazolam(5mg.kg-1)产生以深度慢波睡眠(SWS2)增加(P<0.01)为主要特征的总睡眠时间增加。在HA引起的觉醒达高峰(2h)的时候分别灌胃给予Estazolam2.5mg.kg-1与5mg.kg-1,使觉醒转为睡眠,并呈剂量依赖性。结论TMn内HA能神经元促进和维持觉醒,作用于GABA神经元末梢的苯二氮类(benzodiazepine,BZD)1受体的Estazolam,通过增加SWS2而增加总睡眠时间,并逆转HA引起的觉醒状态。     

A型肉毒毒素降低偏头痛大鼠颈静脉血、脑干和三叉神经节的P物质含量

目的通过观察A型肉毒毒素(botulinumtoxintypeA,BTX-A)对硝酸甘油引发的偏头痛大鼠颈静脉血浆、脑干和三叉神经节中P物质(substanceP,SP)含量变化,探讨BTX-A止痛机理。方法将大鼠分为对照组(n=5)和偏头痛模型组(n=15)。偏头痛模型组造模后分别皮下注0.9%NaCl(n=5)、BTX-A5U·kg-1(n=5)、BTX-A10U·kg-1(n=5)6d后,应用放射免疫检测法测定颈静脉血浆、脑干和三叉神经节中P物质的含量。结果动物皮下注射硝酸甘油后出现偏头痛症状,例如双耳发红、前肢频繁搔头、爬笼次数增多,其评分与对照组相比有明显差异(P<0.01)。生理盐水组颈静脉血浆、脑干和三叉神经节中SP含量与对照组比较显著升高(P<0.01);BTX-A5U·kg-1组、BTX-A10U·kg-1组分别与生理盐水组比较,SP含量显著降低(P<0.05)。结论硝酸甘油导致偏头痛症状产生及SP在颈静脉血浆和延髓、脑桥和三叉神经节中的含量增加。局部皮下注射BTX-A可减轻偏头痛大鼠的症状,并能降低颈静脉血浆、脑干和三叉神经节中SP含量,结果提示BTX-A通过抑制“三叉神经血管系统”(tri-geminalvascularsystem,TVS)中SP释放而减轻偏头痛症状。     

应用抗p30血清检验人类精斑的研究

作者用自制的抗P30血清做琼脂双向扩散试验,检验人类精斑,并采用随机抽样和盲法试验与精子检出法进行比较。结果表明,用抗P30血清确证精斑的敏感性和准确性均高于精子检出法,且不受精液中有无精子的影响,也不受阴道液和唾液的干扰,并能正确区别人类与动物精斑,是目前确证人类精斑的最好方法。     

剥夺异相睡眠导致大鼠学习记忆的能力下降的机制

目的：揭示学习记忆是否会在睡眠中得到加强和巩固，取消异相睡眠是否会导致学习记忆能力下降及其下降的机制。方法：45只雄性Wistar大鼠进行连续4d的Morris水迷宫空间记忆学习任务训练后，立即随机分为剥夺异相睡眠(paradoxical sleep deprivation,PSD)、大平台组(TC)、对照组(CC)3组，每组又分为24，48，72h3个亚组，每组各5只。其中所有的PSD组、CC组及TC组在第4天最后1次训练结束后立即分别放入睡眠剥夺箱、大平台水箱和普通鼠笼。24，48和72h后，分别将各组大鼠再次任意选取两个入水点，每个点连续两次寻找平台，来衡量空间参考记忆和空间工作记忆的变化,此时平台所处的位置与学习训练时相同。整个行为学研究过程由水迷宫测试系统记录游泳轨迹和相关参数。结果：①随着训练次数的增加，大鼠逐次各点第1次游泳潜伏期逐渐缩短，记忆得分的值逐渐增大。②PSD各组大鼠与配对的TC组及CC组相比较，其各点第1次游泳潜伏期随PSD时间延长而延长[72h时为：(88．17&;#177;875),(22.83&;#177;3.98)，(22．12&;#177;4．95)s，t=15.05、P&;lt;0.001]，记忆得分小于TC,CC组大鼠(72h时为：16．75&;#177;4.36，28．15&;#177;5.31，30.83&;#177;4.97，t=15．05，P&;lt;0．001)，其差异有显著性意义：TC，CC组大鼠之间其参数统计差异没有显著性意义(P&;gt;0.05)。结论：PSD可造成大鼠空间记忆的巩固障碍，异相睡眠与学习记忆有关。     

大豆磷脂酰胆碱提高幼年大鼠学习记忆能力及对海马CA3区突触可塑性的影响

目的：观察大豆磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine from sovbean lecithin，SB—pc)对幼年大鼠空间辨别性学习记忆能力及海马CA3区突触可塑性的影响，探讨海马突触可塑性机制及SB-pc作用机制。方法：5周龄雄性Wistar大鼠33只，随机分为SB—pc添加喂养组(11只)，迷宫对照组(11只)，正常对照组(11只)。喂养8周，SB-pc添加喂养组和迷宫对照组大鼠在Morris水迷宫中进行连续4d的空间辨别性学习记忆能力检测，计算机分析系统自动记录逃避潜伏期(escape latencv．EL)等相关参数，分析大鼠行为变化。用免疫组织化学方法检测SB-pc添加喂养组、迷宫对照组和正常对照组3组大鼠海马结构CA3区突触素(synaptophysin，SYN)的免疫表达。用电镜观察海马CA3区突触结构的变化。结果：SB-pc添加喂养组4d的EL分别小于迷宫对照组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。SB—pc添加喂养组海马结构CA3区SYN免疫反应阳性产物的吸光度(0．5400&;#177;0．0245)高于迷宫对照组(0．4679&;#177;0．0247)．差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；迷宫对照组吸光度大于正常对照组(0．3581&;#177;0．0133)，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。SB-pc添加喂养组海马CA3区突触数密度[(104．51&;#177;9.68)个／μm^3]和突触活性区膜面积[(0．067&;#177;0．009)μm^2/μm^3]分别大于迷宫对照组[(84．97&;#177;6．53)个／μm^3，(0．047&;#177;0．005)μm^2／μm^3]，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；迷宫对照组的突触数密度和突触活性区膜面积大于正常对照组[(29．48&;#177;2．81)个／μm^3，(0．020&;#177;0．001)μm^2／μm^3]，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：添加SB-pc喂养幼年大鼠，可促进其海马CA3区突触的增长和突触活性区膜面积增加，突触素的免疫表达增强，提高了突触的可塑性，从而提高幼年大鼠的空间辨别性学习记忆能力。