表观遗传学在登革病毒感染中的研究进展

登革热是世界上广泛流行的蚊媒病毒性热带疾病。关于登革病毒感染的病理与免疫机制至今尚未完全阐明,诸多报道显示表观遗传学在病毒感染中起重要作用,其中关于登革病毒也有一些报道。本文论述了表观遗传学在病毒感染及登革病毒感染中的研究进展。     

2型登革病毒诱导RAW264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响

 目的：探讨2型登革病毒（DENV2）感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法：用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果：DENV2感染RAW264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导RAW264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论：登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。     

人胎盘无细胞是悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用

为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较，用人胎盘无细胞悬液及ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＦＰＯ作为刺激因子，并应用甲基纤维素半固体培养体 对骨髓ＧＭ－ＣＦＵ，ＧＭ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ进行了培养和比较，研究结果表明，人胎盘无细胞悬液对骨髓ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ体外扩增最适蛋白浓度是２００－３００μｇ／Ｌ，人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓血干／祖细胞的体外扩增效果优于单独ＩＬ－３，单独ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＥＰＯ组。结论提示，人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子，用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干／祖细胞细胸具有有效而价廉的特点。     

CXCR4抑制剂AMD3100对2型登革热病毒诱导血管内皮细胞株Eahy926凋亡的影响

目的: 探讨趋化因子受体CXCR4抑制剂AMD3100对2型登革热病毒(DV2)诱导人脐静脉血管内皮细胞株 Eahy926凋亡的影响。方法: 免疫组织化学法检测Eahy926细胞的Ⅷ因子。Eahy926细胞分成未感染组和DV2感染组,流式细胞术检测两组细胞不同时点(24 h、36 h、48 h和60 h)CXCR4的表达水平。流式细胞术分析未感染组、DV2感染组及DV2+AMD3100组不同时点的细胞凋亡率。免疫荧光法检测细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(PS)。结果: Eahy926细胞有Ⅷ因子表达。在DV2感染Eahy926后的4个时点中,CXCR4的表达均有上调,其中以48 h感染组最明显(66.13%±10.30%,P<0.05)。DV2感染能诱导Eahy926细胞凋亡,其中36 h感染组凋亡率出现高峰(29.85%±15.78%,P<0.05)。应用AMD3100后在各时点均能上调DV2感染组的凋亡率,免疫荧光观察到DV2感染组及DV2+AMD3100组绿色荧光标记的细胞增多。结论: DV2感染能诱导血管内皮细胞Eahy926凋亡并上调CXCR4的表达,CXCR4抑制剂AMD3100促进DV2诱导Eahy926细胞凋亡的发生。     

留学生医学微生物学教学心得体会

本阐述留学生在医学微生物学学习过程中存在的语言和学习方法等普遍问题，从教学实践中探索解决这些影响学习的问题和探索提高他们学习效果的方法。     

隆突性皮肤纤维肉瘤免疫表型和COL1A1/PDGFB融合基因的临床应用研究

目的:探讨隆突性皮肤纤维肉瘤（dermatofibrosarcoma protuberans,DFSP）诊断中免疫表型和荧光原位杂交（fluores cence in situ hybridization,FISH）检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的应用价值。方法:观察73例DFSP中免疫组织化学标记物vimentin、CD34、CD99、S100、desmin 、SMA 和FISH检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的表达。选取85例非DFSP作为免疫组织化学的对照组,10例非DFSP作为FISH检测COL 1A 1/PDGFB 融合基因的对照组。结果:vimentin、CD34、CD99、S100、desmin 、SMA 在73例DF?SP中阳性率分别是100% 、91.78% 、61.64% 、0、0、6.85% ,在对照组中不同程度表达,其中CD34的表达在鉴别诊断中有意义。COL 1A 1/PDGFB 融合基因在DFSP的阳性率为86.96%（60/ 69）,对照组均阴性。结论:在DFSP的诊断中,COL 1A 1/PDGFB 融合基因是DFSP较为特异性、敏感性的标记,而CD34是DFSP相对理想的标记。      

2型登革病毒通过线粒体途径诱导EA.hy926细胞凋亡

 目的：探讨登革病毒诱导EA.hy926细胞(人脐静脉内皮细胞融合细胞株)相对活力的变化与线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm)改变及线粒体凋亡途径的关系。方法：用2型登革病毒(dengue virus type 2, DENV-2)感染EA.hy926细胞,MTT法检测感染前后EA.hy926细胞的相对活力,荧光显微镜和流式细胞术分别观察感染前后JC-1在EA.hy926细胞线粒体内的聚集情况以检测Δψm的改变,通过比色法检测caspase-9的活性变化。结果：DENV-2感染EA.hy926细胞24 h、36 h及48 h后,细胞活性受到显著抑制,550 nm处的A值均低于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);JC-1染色显示,感染后各时点,代表正常线粒体的红色荧光均较未感染组减弱,而代表Δψm下降的绿色荧光较未感染组逐渐增强。流式细胞术检测Δψm平均荧光密度比未感染组减低,差异有统计学意义。DENV-2 感染后早期即可出现caspase-9活性的上升,与未感染组相比,各时点的活性差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：DENV-2感染EA.hy926细胞后可诱发Δψm下降,增强caspase-9活性,进而启动线粒体的凋亡途径。     

TRAIL及其受体系统、细胞凋亡与病毒感染

TRAIL是新的肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF)家族成员，对大多数的肿瘤细胞有很强的杀伤作用，它能介导病毒引起的凋亡，在一些自身免疫病中也起作用。本文对TRAIL的结构和功能以及它的较为复杂的受体系统、配体－受体系统介导的细胞凋亡、TRAIL在病毒引起的细胞凋亡中的作用方面做了较为详尽的综述。     

抗肝癌NMP单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备出具较高特异性抗肝癌核基质蛋白单克隆抗体,以用于肝癌的基础和临床的研究。首次免疫用肝癌细胞纯核,用高盐抽提法提取的肝癌细胞核基质蛋白加强免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,ＥＬＩＳＡ法同时测定培养上清对肝癌核基质蛋白及正常肝细胞核基质蛋白的免疫反应,ＬＳＡＢ法进行单抗的鉴定。结果：建立了一株能稳定分泌抗肝癌核基质蛋白单抗的杂交瘤细胞株２Ｇ８,染色体数目为８６－９２,Ｉ     

登革病毒2型诱导人血管内皮细胞株EAhy926自噬的研究

【目的】 探讨登革病毒2型(DV2)感染人静脉血管内皮细胞株EAhy926对细胞自噬的影响。【方法】 同一批EAhy926细胞分成对照组和感染组,感染组在DV2感染EAhy926细胞后12、24、36、48 h分别收集细胞,用流式细胞仪检测发生自噬的细胞百分率与酸性自噬泡的平均荧光密度,对照组相应时间点收集细胞做同样处理作为对照。实验重复5次,用方差分析和配对t检验进行统计分析。 【结果】 感染组4个时间点自噬的细胞百分率和酸性自噬泡的平均荧光密度较对照组相应时间点均有升高(P < 0.05)。48 h对照组和感染组自噬细胞的百分率和酸性自噬泡平均荧光密度差异最明显&#65377;对照组4个时间点自噬细胞百分率(%)分别为:70 ± 7,72 ± 6,71 ± 8和69 ± 10;感染组则为75 ± 3,78 ± 3,77 ± 5,80 ± 7。对照组4个时间点酸性自噬泡平均荧光密度分别为:36.4 ± 3.4,37.0 ± 3.3,35.8 ± 2.3,34.4 ± 3.2,感染组则为41.1 ± 2.3,45.0 ± 4.8,41.3 ± 3.3, 44.5 ± 7.5。 【结论】 DV2能诱导EAhy926细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。