活性调节细胞骨架蛋白与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系

目的 检测活性调节细胞骨架蛋白(Arc)在模型大鼠海马组织中的表达,探讨Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆的关系.方法 成年SD大鼠随机分为模型组、假手术组和空白对照组.应用避暗试验检测各组大鼠学习记忆功能.采用免疫组化、Western blot检测不同时间点Arc蛋白在海马组织中表达水平,运用RT-PGR检测其基因表达水平.结果 慢性电点燃成功后第1天(即点燃0周),点燃组、假手术组及空白对照组学习记忆能力差异无统计学意义(P＞0.05).点燃2周:潜伏期(LT)(48.87±3.42)s,穿梭次数(EN)(2.75±0.99)次.点燃3周:LT为(48.71±2.77)s,EN为(2.75±1.15)次.点燃2周、3周与0周相比学习记忆功能增强(P＜0.05).点燃4周与0周组比学习记忆功能明显下降(P＜0.05).Arc在各组内蛋白及基因的表达均在1 h开始增加,6 h达到高峰,12 h恢复到基线水平.组间对比,2-3周内峰值最高,上升幅度明显(P＜0.01),4周峰值及幅度明显下降(P＜0.05),假手术组、空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 岛叶电点燃大鼠学习记忆功能及Arc在海马中表达变化趋势一致.Arc与岛叶点燃大鼠学习记忆功能密切相关.

Abstract：

Objective To research the expression of activity- regulated cytoskeletal protein in Insula Chronic Electricity igniting epilepsy rat's hippocampus,and to study the relation between Arc and electricity igniting epilepsy rat's learning and memory.Methods Adult SD rats were divided into model groups,sham operation groups,blank control groups.The model of rat insula chronic electricity igniting was built,and rats learning and memory ability were examined by way of passive avoidance test.The expression level of Arc in hippocampus was test by both immunohistochemistry and western blot,and the expression of Arc gene was test by RT- PCR.ResultThere was no significant difference of learning- remembering ability of rats between igniting group,control group and sham groups (P ＞ 0.05) in the first week after insular chronic ignition when passive avoidance test was examined.The increased learning- remembering ability appeared in the 2nd week (LT:48.87 ± 3.42 s; EN:2.75 ± 0.99) ,3rd week(LT:48.71 ± 2.77 s;EN:2.75 ± 1.15) after the ignition(P ＜0.05).After 4 weeks,there was obvious decline of learn and memory (P<0.05 ).When testing the molecular biology of Arc,there was an enhancement in expression of protein and gene for Arc in subgroup time point from 1 h,to the submit when 6 h,and to primary level when 12 h.The general tendency was to rise when one week(w),to rise fast when 2w-3w,to rise obviously slowly when 4w(P ＜0.05).There was no sense for false operation sets and blank comparison sets.Conclusion The general tendency of the expression of Arc in rat hippocampus after the chronic insular electricity ignition is consistent with the learning- remembering ability of epilepsy rats.Arc is closely associated with the learning- remember ability for epilepsy rats.     

神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用

目的： 探讨神经胶质瘤细胞（A172/U251）与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell, HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法：建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响。结果：VEGF(50 ng/ml) 组和共培养组（HBMEC分别和A172,U251细胞共培养） HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50 ng/ml)组、共培养组及（共培养+AZD1480）组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。IL-6(50 ng/ml)组,共培养组及（共培养+AZD1480）组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论：神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关。     

细胞外基质蛋白调控多发性硬化症髓鞘再生的研究进展

细胞外基质（extracellular matrix,ECM）形成神经细胞生长的微环境,其重塑对脱髓鞘的损伤组织髓鞘再生有重要意义。多发性硬化症（multiple sclerosis,MS）是一种免疫系统介导的慢性中枢神经系统（central nervous system,CNS）疾病,主要病理特征为脱髓鞘和髓鞘再生失败。MS病灶中形成大量纤粘连蛋白聚集体（fibronectin aggregates,aFn）会抑制髓鞘再生;基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）、腱生蛋白C(tenascin C,Tn-C)、透明质酸（hyaluronan,Ha）、硫酸软骨素蛋白多糖（chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs）等细胞外基质蛋白均可参与调控髓鞘再生。     

大鼠中脑水管周围灰质各分区向下丘脑orexin阳性神经元分布区的投射及其联系

目的:观察大鼠中脑水管周围灰质(PAG)不同分区神经元发出的投射纤维与下丘脑orexin阳性神经元之间的联系,阐明PAG不同分区神经元支配下丘脑orexin阳性神经元的形态学基础。方法:首先将逆行示踪剂霍乱毒素B(CTb)注射到下丘脑orexin阳性神经元胞体分布区域,免疫组织化学显色观察PAG内CTb逆行标记神经元的分布特点;再将顺行示踪剂生物素化葡聚糖胺(BDA)注射到PAG不同分区,采用免疫组织化学双标记的方法,在下丘脑内观察BDA标记神经纤维及其终末与orexin阳性神经元的重叠分布特点和它们之间的联系。结果:将CTb注射到单侧下丘脑穹窿上区或外侧区后,在注射点同侧PAG的外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)及背内侧区(dmPAG)仅见少量标记神经元。注射点对侧PAG区域也可观察到少量CTb标记神经元。将BDA分别注射到单侧dlPAG、lPAG和vlPAG后,在下丘脑双侧均可观察到BDA顺标纤维及其终末,但注射点同侧BDA标记纤维和终末的数量明显多于对侧。源自lPAG和vlPAG的BDA标记纤维及其终末与orexin神经元胞体在穹窿上区形成明确的重叠分布和密切接触,而源自dlPAG的纤维少见与orexin神经元接触。结论:lPAG及vlPAG来源的纤维及其终末与下丘脑内的orexin阳性神经元的分布区域重叠并形成密切接触,可能直接影响orexin神经元的功能。     

恶性神经胶质瘤的树突细胞免疫疗法

中枢神经系统存在血脑屏障且缺乏淋巴组织和树突细胞,加之肿瘤周围建立的免疫抑制微环境,都使神经系统恶性胶质瘤的免疫治疗面临许多特殊的困难.以树突细胞为基础的免疫治疗是指树突细胞肿瘤疫苗的接种治疗,它可以部分或全部改善胶质瘤患者神经系统的免疫状况,因此可以成为有效的治疗方法.随着分子生物学和基因工程技术的发展,树突细胞肿瘤疫苗的制备、优化和应用技术得到了很大提高,为其未来临床应用奠定了良好的基础.     

皮肤黑素瘤细胞与血管内皮细胞间VEGF-IL-6-STAT3信号交互作用机制

【摘要】 目的 研究皮肤黑素瘤细胞与血管内皮细胞间VEGF-IL-6-STAT3信号交互作用机制。 方法 将血管内皮细胞EC-304分成3组：对照组,常规培养;血管内皮生长因子（VEGF）组,在含VEGF165（50 μg/L）的内皮细胞培养基中培养;A375共培养组,与黑素瘤细胞A375共培养。24 h、48 h、72 h后收集培养液,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素6（IL-6）的分泌量。将A375细胞分为4组：对照组,常规培养;A375 + EC-304组,与EC-304共培养;A375 + EC-304 + IL-6组：与EC-304细胞在含STAT3通路激动剂IL-6（50 μg/L）的DMEM中共培养;A375 + EC-304 + JSI-124组：与EC-304在含STAT3通路抑制剂JSI-124（1 μmol/L）的DMEM中共培养。分别在24 h、48 h、72 h后收集细胞,用Western印迹、CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞增殖活性及侵袭活性。采用双因素方差分析及t检验统计分析数据。结果 与对照组比较,VEGF组、A375共培养组EC-304培养基中IL-6分泌量均升高（FVEGF = 29.63,P < 0.001;FA375 = 11.09,P = 0.020）。与对照组比较,A375 + EC-304组A375细胞p-STAT3蛋白表达升高（P < 0.001）,细胞活性增强（P < 0.001）,侵袭细胞数从（86.13 ± 7.24）个增加到（152.66 ± 16.04）个（t = 4.43,P < 0.001）;与A375 + EC-304组比较,A375 + EC-304 + IL-6组细胞p-STAT3蛋白表达升高（P < 0.001）,细胞活性增强（P < 0.001）,侵袭细胞数量增加至（187.34 ± 14.38）个（t = 2.17,P < 0.001）;与A375 + EC-304组比较,A375 + EC-304 + JSI-124组细胞的p-STAT3蛋白表达降低（P < 0.001）,细胞活性减弱（P < 0.001）,侵袭细胞数减少至（124.92 ± 8.72）个（t = -1.86,P < 0.001）。结论 皮肤黑素瘤A375细胞与血管内皮细胞之间存在VEGF-IL-6-STAT3信号交互作用机制,这种机制可促进A375细胞的增殖和侵袭。     

阻断STAT3磷酸化对人脑胶质瘤体外增殖抑制的实验研究

目的 研究磷酸化STAT3抑制剂Cucurbitacin Ⅰ阻断STAT3信号转导通路对人脑胶质瘤细胞系A172增殖和凋亡的影响并探讨机制.方法 使用Cucurbitacin Ⅰ处理人脑胶质瘤细胞系A172,CCK-8方法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3磷酸化水平,RT-PCR检测STAT3下游基因C-myc、Survivin和Mcl-1的mRNA水平的改变.结果 Cucurbitacin Ⅰ作用于A172后,细胞增殖速度明显下降(P＜0.05);细胞凋亡比率显著升高;Western blot结果显示A172细胞中磷酸化STAT3(p705-STAT3)蛋白水平明显降低;C-myc、Survivin和Mcl-1在mRNA水平明显下降(P＜0.05).结论 阻断STAT3信号转导通路可抑制脑胶质瘤细胞增殖,促进其凋亡;靶向STAT3信号转导通路的治疗策略可以作为胶质瘤治疗的一种新方法.     

丙戊酸钠﹑拉莫三嗪对癫痫大鼠动情周期和卵巢形态的影响

目的探讨丙戊酸钠(VPA)及拉莫三嗪(LTG)对海人酸(KA)点燃癫痫大鼠动情周期及卵巢形态的影响。方法将健康雌性SD大鼠28只分为4组,即正常对照组、盐水组(NS组)、丙戊酸钠组(VPA组)、拉莫三嗪组(LTG组)。NS组、VPA组、LTG组用海人酸点燃,致痫后灌胃法分别予以生理盐水、VPA、LTG干预1个月后,4组大鼠于动情间期摘取右侧卵巢组织,卵巢称重,并进行形态学分析。结果 NS组和VPA组大鼠失去规律动情周期变化,而后者动情周期紊乱加重,主要表现为持续性动情期;NS组、VPA组窦前卵泡、闭锁卵泡、卵泡总数、卵泡膜厚度与对照组比较增多(P<0.05),卵巢发生多囊性改变;其中2组间窦前卵泡、闭锁卵泡、卵泡膜厚度差异有统计学意义(P<0.05),VPA增高更明显。结论癫痫状态可影响大鼠成熟卵泡形成及排卵功能,导致大鼠发生卵巢多囊性改变,而VPA干预可以加重癫痫大鼠卵巢多囊性改变。     

大鼠中脑导水管周围灰质向下丘脑orexin神经元的纤维投射

目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记细胞的分布特点;接着采用顺行示踪技术和免疫组化相结合的方法,将生物素化葡聚糖胺(BDA)作为顺行示踪剂注射到PAG,观察下丘脑内BDA标记的神经纤维与orexin神经元的重叠分布特点;最后运用免疫电镜技术观察BDA标记轴突终末与orexin神经元之间的突触联系。结果:CTb注射到单侧下丘脑orexin神经元区域后,在PAG观察到大量CTb标记神经元,注射点同侧标记细胞数明显占优,其中PAG外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)和背内侧区(dm PAG)可见少量标记神经元;注射点对侧lPAG及vlPAG区域也观察到少量CTb标记神经元。BDA注射到单侧lPAG后,下丘脑内双侧均可观察到BDA标记的神经纤维,但注射点同侧标记神经纤维数量明显占优。BDA标记纤维与orexin神经元胞体在穹窿背侧接近不定带(ZI)的区域(本文中将此区域称作"穹窿上区")形成显著的重叠分布。透射电镜下观察到BDA标记的轴突终末与orexin神经元之间形成突触联系,且多为非对称性类型。结论:lPAG投射到下丘脑的神经纤维在穹窿上区与orexin神经元形成优势重叠分布、并与orexin神经元的胞体或树突形成以非对称性为主的突触联系,提示orexin神经元可能在lPAG的直接支配下发挥其调节觉醒状态、摄食行为等功能。