荧光微量检测细胞内DNA与蛋白质含量

应用荧光试剂（３３２５８Ｈｏｅｃｈｓｔ）微量测定细胞内ＤＮＡ含量,应用荧光胺（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）微量测定细胞内蛋白质含量。结果：荧光试剂与ＤＮＡ的Ａ－Ｔ碱基形成复合物后,其激发波长（ＥＸ）由３２０ｎｍ移至３５０ｎｍ,发射波长（ＥＭ）由４８０ｎｍ移至４６０ｎｍ,且荧光强度大为增强。荧光胺与蛋白质反应生成强荧光化合物,在ＥＸ３９０ｎｍ,ＥＭ４７５ｎｍ条件下最低检测限为０．５μｇ／μｌ。该法操作简便,微量快速,重复性好。可用于荧光微量测定ＤＮＡ与蛋白质含量,还可用于观察细胞的增殖。     

PLP-组氨酸脱羧酶的纯化与晶体制备

本文成功地改进了依赖磷酸吡哆醛的组氨酸脱羧酶(PLP-Histidine Decarboxylase;PLP-HDCase)的纯化方法。通过采用离子交换层析,减少浓缩及透析次数,方法简便。同时,增加Aminohexyl-sepharose层析柱床体积,使一次获得纯化PLP-HDCase量增加10～15倍。在获得足够优质PLP-HDCase的基础上,找到了稳定结晶及晶体生长条件,首次获得大单晶。     

血清α-L-岩藻糖苷酶的微量比色法测定及其临床应用

在pH5.0条件下,血清a-L-岩藻糖苷酶的反应温度由37℃提高到47℃,其测定值比原法提高1倍。再将3ml反应液的常量法改为0.5 ml盼微量法,其Km为0.15 mmol/L,底物终末浓度由1.38mmol/L减少为0.68mmol/L。故微量法的血清用量仅需10μ1,底物用量可节省19倍。组内和组间CV分别为1.13％(n=12)和1.70％(n=5),用该法测定了129佣各种肿瘤患者的血清岩藻糖苷酶活性,呈现明显的阳性,并证明岩藻糖苷酶没有肿瘤特异性。     

用紫外与可见光分光分析仪测定PASMC增殖的MTT比色法

为使 MTT比色法得到更广泛的应用 ,对紫外与可见光分光分析仪测定细胞增殖 MTT比色法的实验条件进行了探索。结果发现 :以 5 mg/ m l MTT在 0 .1× 10 4～ 2 .4× 10 4细胞范围内进行检测 ,可获得较好的线性检测结果 (γ=0 .9872 )。与酶标仪直接测定比较 ,具有灵敏度高、数据准确、检测范围广 ,值得推广应用。     

DDPH对HECCM促PASMC增殖后的逆转效应研究

利用低氧内皮细胞条件培养基（HECCM）建立猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）的增殖模型；以四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、α平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin)为指标，用免疫细胞化学染色及透射电镜等方法观察不同浓度DDPH[1-(2,6-dimethylphenoxy)-2-(3,4-dimethoxy phenylethylamino)propane hydrochloride]对HECCM促PASMC增殖后的逆转效应。结果表明：HECCM促PASMC增殖后，PASMC的表型发生转化，由收缩表型转化为合成表型，PASMC胞质内的α-SM-actin含量下降；而DDPH能使HECCM促PASMC增殖后的表型逆转，即由合成表型逆转为具有执行正常收缩功能的收缩表型，PASMC胞质内的α-SM-actin含量回升；且DDPH的这种作用具有浓度相关性。透射电镜结果从形态学上也证明PASMC由合成表型逆转为收缩表型，由此推测，DDPH对HECCM促PASMC增殖具有逆转效应。     

多胺在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

在低氧条件下，猪肺动脉内皮细胞（PAEC）对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖调控，是研究低氧性肺动脉高压时肺动脉结构重组的重要内容。应用MTT比色法、DNA荧光测定法，观察了低氧PAEC条件培养基（HECCM）中多胺促PASMC增殖的作用。结果表明，在PAEC培养液中加入鸟氨酸脱梭酶抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO），可阻止HECCM促PASMC增殖的效应。故认为低氧刺激PAEC产生的多胺亦是HECCM中促PASMC增殖的一个重要因子。     

PDGF在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

为了探索低氧条件下猪肺动脉内皮细胞 (PAEC)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖调控关系 ,应用MTT比色法 ,DNA荧光测定法观察了外源性 PDGF促 PASMC增殖作用 ,以及 Suram in抑制 PDGF促增殖作用的效应 ,并在此基础上研究了猪肺动脉内皮细胞条件培养基 (HECCM)中 PDGF促 PASMC增殖的作用。结果表明 ,HECCM促 PASMC增殖作用的效应可被 Suramin部分抑制 ,由此证明 ,PDGF是低氧刺激 PAEC产生的一种促 PASMC增殖的重要因子。     

DDPH抑制HECCM促PASMC增殖时第二信使变化的研究

采用MTT比色、荧光技术和放免技术观察了猪肺动脉低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)和1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐(DDPH)对猪肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖、第二信使([Ca2+]1和cAMP)的影响。结果显示①HECCM促进PASMC增殖,而DDPH可抑制之,抑制率为77．46％。②HECCM升高PASMCs内[Ca2+]i,而DDPH可对抗此作用。③HECCM组PASMCs内cAMP含量明显低于对照组(NECCM组),而HECCM+DDPH组PASMCs内cAMP与NECCM组无显著性差异。     

血清酶组检法对原发性肝癌和肝血管瘤的鉴别诊断研究

本文对82例原发性肝癌(PHC),48例肝血管瘤(HH)和正常对照者的4种血清酶活性进行了测定,经微机统计分析,求得对PHC和HH的鉴别结果;单独检测的鉴别率:血清胆碱酯酸(SChE)为75.56％,血清α-L-岩藻糖苷醇(SαFU)为78.46％,血清β-葡萄糖醛酸苷酶(Sβ Ga)为65.75％。联合检测的鉴别率:SChE和SαFu为 80.00％;SβGa和SChE为 77.32％;SChE、SαFu和SβGa 3联检测为 84.04％。