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目的 筛选表达细胞间黏附因子1(ICAM-1)(Ⅰ区)模拟肽的特异噬菌体克隆,为研制抗脑型疟黏附肽类药物奠定基础。方法 以抗ICAM-1(Ⅰ区)的单抗15.2为靶,采用亲和筛选法对噬菌体随机十二肽库进行3轮筛选,通过ELISA及竞争抑制试验初步鉴定了获得的噬菌体短肽与单抗15.2之间的结合特性。结果 从第3轮洗脱液中挑选20个噬菌体克隆进行夹心法ELISA检测,其中18个克隆OD值超过阴性对照2.1倍以上,阳性率达90%。竞争性ELISA试验表明多数阳性噬菌体与ICAM-1能竞争性地与15.2单抗结合。结论 阳性噬菌体表达的短肽可能是15.2单抗所识别的模拟表位。Ⅰ 相似文献
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将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 ( HGFSP)与表达载体 p RSET重组并转化大肠杆菌BL2 1 ,工程菌经 IPTG诱导后 ,HGFSP得到高效表达。 SDS- PAGE结果显示表达产物以非融合、可溶性的形式表达 ,分子量为 2 3k Da,占总菌体蛋白的 2 3.65%。Dot- ELISA和 Western- blot分析表明表达产物具有免疫原性。 相似文献
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间日疟原虫多表位疫苗基因的表达、纯化与初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建和筛选间日疟原虫多表位疫苗基因高拷贝Pichia pastoris菌株,研究多表位疫苗基因在酵母菌中的表达,纯化目的产物,为进一步的多表位肽免疫原性研究奠定基础。方法根据文献报道筛选间日疟原虫有效保护性抗原表位,人工合成多表位基因PvDBW,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切构建酵母表达载体pPIC9K-PvDBW,转化大肠埃希菌ToP10;鉴定后转化P.pastoris GS115,构建酵母表达菌株;通过G418压力筛选筛出目的基因高拷贝克隆,用甲醇诱导多表位肽基因表达,分别以RT-PCR和Western blot进行鉴定,用50%饱和硫酸铵沉淀和分子筛凝胶层析分离、纯化目的产物。结果重组质粒用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后可得到786 bp DNA片段;经G418压力筛选筛出两个高拷贝菌株,以α-Factor和3′AOX1为引物、重组菌基因组DNA为模板,PCR扩增出约960 bp的目的片段;SDS-PAGE显示,在GS115细胞内多表位肽呈分泌性表达,表达量为80 mg/L;分离、纯化后,纯度达90%以上;Western blot检测显示表达的多表位肽可被间日疟病人血清识别。结论间日疟原虫多期多阶段多表位疫苗基因在酵母菌中表达成功。 相似文献
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人胰岛素样生长因子—1在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:1,他引:1
为获得大量的人胰岛素样生长因子-1(human Insulin-like Growth Factor-1,hIGF-1)产品,构建了hIGF-1原核表达系统。设计引物,引入Nde I和Hind Ⅲ酶切位点,以人工合成构建的pUCIGF质粒为模板,CR扩增hIGF-1基因。酶切后,克隆于原核表达载体pRSET B中,构建pRSET-IGF重组质粒,转化入肠杆菌BL21(DE3)进行表达。带有重组质粒pRSET-IGF的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明:可表达出相对分子质量78000的蛋白,重组蛋白以非融合、可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白量的10%~20%,Western印记表明重组蛋白具有hIGF-1的抗原活性。构建的pRSET-IGF重组质粒成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中高效可溶性表达,为获得大量基因工程产品奠定了基础。 相似文献
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目的 筛选恶性疟原虫感染的红细胞膜表面蛋白1(PfEMP?鄄1)的噬菌体表位模拟肽。 方法 细胞间粘附分子ICAM-1模拟12肽(KLYLIAEGSVAA)能模拟ICAM-1分子与疟原虫感染红细胞结合的功能,以展示该短肽的噬菌体为靶,采用差减筛选法(subtraction method)对噬菌体环7肽库进行3轮筛选,通过ELISA、竞争抑制试验鉴定获得的噬菌体短肽与ICAM-1之间的结合特性。对阳性克隆进行DNA及氨基酸序列分析并与PfEMP-1氨基酸序列进行同源性比较。 结果 ELISA筛选22个克隆有3个为阳性克隆,氨基酸序列分析显示2个克隆的展示的短肽序列为C-ITAVPVR-C,另1为C-DIMGGYN-C。同源性分析未发现2短肽序列与野生型MC株恶性疟原虫PfEMP-1的氨基酸序列有同源性。但竞争抑制试验显示3个阳性克隆均可与15.2单抗间互相竞争抑制与ICAM-1分子的结合。 结论 获得2种PfEMP-1噬菌体构象表位模拟肽,两短肽能与ICAM-1分子特异性结合。 相似文献
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人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %~ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量基因工程产品奠定了基础 相似文献
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目的:探讨人绒毛组织培养干细胞体外培养、分离及鉴定方法.方法:采集广东省人民医院门诊健康妇女孕6-8周新鲜人工流产绒毛组织,体外传代培养,通过镜下观察、细胞生长率以及CD29和CD44细胞周期研究细干细胞的分离与鉴定.结果:细胞生长良好,不同培养基生长率不同,细胞进入生长期,扩增无变化.结论:人绒毛组织培养干细胞方法简便可行. 相似文献
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一种恶性疟原虫多价重组疫苗的体液免疫反应研究 总被引:2,自引:0,他引:2
一种恶性疟原虫多价重组疫苗的体液免疫反应研究陈白虹,缪军,薛采芳,毕惠祥,李英杰(寄生虫学教研室西安710033第一军医大学疟疾免疫学研究室)关键词恶性疟原虫;重组疫苗;ELISA中图号R382.31自杂合肽SPf66在猴和人体内试验中取得了初步的成... 相似文献
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