半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质 caspase-9、脑红蛋白表达和过氧化损伤的影响*

目的：探讨不同浓度半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）对大鼠损伤大脑皮质组织caspase-9 和脑红蛋白（NGB） 的表达、氧化损伤和脑组织形态学的影响。方法：大鼠按照随机数字表分为假手术组（Sham 组）、缺血再灌注组 （I/R 组）、CysC 低、中、高浓度组。线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血2h 再灌注24 h 后行H-E 染色,观察脑组织形态学变化;免疫组织化学法检测caspase-9 的阳性细胞数;免疫组织荧光法检测皮质神经元 NGB阳性细胞数;免疫印迹检测脑皮质组织中caspase-9 蛋白的表达。羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力, 化学比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）含量。结果：与 I/R 组相比,CysC 低、CysC 中浓度组caspase-9 表达较I/R 组明显减少;而CysC 高浓度组caspase-9 的表达明显升 高,与I/R 无明显差别。CysC 低、CysC 中浓度组caspase-9 阳性细胞数较I/R 组明显减少,NGB阳性细胞数较I/R 组显著增多,SOD和GSH-PX活力升高,MDA含量下降;而CysC 高浓度组caspase-9 阳性细胞数增多,NGB阳 性细胞数减少,SOD和GSH-PX活力降低,MDA含量升高;CysC 高浓度组与I/R 组相比,差异无统计学意义。结论： CysC 低、中浓度可能通过上调NGB的表达,下调caspase-9 的表达,减轻脑缺血再灌注后的自由基损伤。而浓度 过高则作用相反。     

Cystatin C对脑缺血再灌注损伤大鼠LC3的影响

中风是引起人类死亡和致残的主要原因之一,其中缺血性中风即脑梗死,主要由脑血管闭塞引起.而所有脑血管中,若大脑中动脉闭塞常会导致脑血流量大幅度减少,从而造成谷氨酸兴奋、氧化应激和炎症反应等一系列神经中毒的事件,最终导致神经细胞死亡,如细胞凋亡、坏死和自噬[1-3].自噬不仅参与神经细胞死亡的过程,还有研究发现自噬可以起到神经保护的作用[4].本研究应用Cystatin C干预脑缺血再灌注损伤大鼠,观察自噬相关蛋白LC3的变化,研究Cys C对缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响.     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响

目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。