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目的:构建肌肉特异性激酶(MuSK)与红色荧光蛋白(mCherry)的重组融合蛋白(MuSK-mCherry),并作为抗原用于重症肌无力( MG)患者血清中的MuSK抗体( MuSKAb)的检测。方法:应用PCR技术,从含有mCherry 基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,经T载体(pGEM-T Easy Vector)克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His( MuSK)上,构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞,表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原,应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果:成功地构建了MuSK-mCherry融合蛋白基因,并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实,构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论:以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原,可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。 相似文献
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[目的]建立人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型.[方法]用电鳐电器官分离纯化的乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠,以肌肉收缩力判定病情,以放射免疫测定法测定动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度及动物全身肌肉乙酰胆碱受体浓度.[结果]实验动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度为6~296nmol,全身肌肉乙酰胆碱受体损失率最高达65%,部分动物出现肌肉收缩无力表现.[结论]成功地建立了人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型. 相似文献
3.
[目的]观察卡那霉素在体外对棘阿米巴A.healyi的杀伤作用.[方法]用1.0,10.0,100.0g/L卡那霉素和0.2,2.0g/L甲硝唑在体外培养棘阿米巴3,8,24,48h,观察用药前及不同培养时间的生长情况.[结果]1.0g/L卡那霉素对棘阿米巴无抑制作用,10.0g/L卡那霉素在培养48h时及100.0g/L卡那霉素培养24h时抑制棘阿米巴生长,100.0g/L卡那霉素在培养48h时杀伤棘阿米巴.2.0g/L甲硝唑作用48h时仍无明显的杀伤作用.[结论]在体外卡那霉素质量浓度为10.0g/L时对棘阿米巴有抑制作用,100.0g/L时具有杀伤作用. 相似文献
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[目的]探讨重症肌无力(MG)患者血清中乙酰胆碱受体抗体(AchRAb)以及肌肉特异性激酶抗体(MuSKAb)与临床特点的关系.[方法]应用酶联免疫吸附试验(ELISA),对40例MG患者血浆进行AchRAb和MuSKAb检测,并与患者临床特点进行比较分析.[结果]40例MG患者中AchRAb阳性为13例(33%),MuSKAb阳性为7例(18%),AchRAb与MuSKAb双阴性为22例(55%),AchRAb与MuSKAb双阳性为2例(5%).[结论]MG患者中AchRAb阳性者的病情普遍较轻,可受胸腺影响;MuSKAb阳性患者女性多见,全身症状严重. 相似文献
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[目的]探讨突触受体相关蛋白(rapsyn)基因启动子区单核苷酸多态性(SNPs)与重症肌无力(MG)患病的相关性.[方法]从63例MG患者及63例正常对照组人群外周血标本中提取DNA,用PCR扩增rapsyn基因的启动子基因片段,直接测定序列.与野生型rapsyn基因相比较,分析MG病例组与正常对照组所有个体的rapsyn基因启动子区,尤其是5个多态位点,即-189C>T,-116C>A,-101C>T,-72C>T,-52A>T是否发生突变.[结果]MG病例组和正常对照组rapsyn基因启动子区的5个多态位点均未发现突变,启动子区其他区域也未发现突变.[结论]63例MG患者rapsyn基因启动子区不存在多态位点,rapsyn基因启动子区SNPs与MG无相关性. 相似文献
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[目的]探讨重组质粒pEGFP-N1-白细胞介素(IL)-24基因对黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤的抑制作用及其机制.[方法]构建黑色素瘤B16细胞小鼠模型,随机分为3个组,分别向各组小鼠瘤体内注射给予脂质体包裹的基因重组质粒pEGFP-N1-IL-24(实验组),pEGFP-N1(阳性对照组)和PBS缓冲液(阴性对照组).应用HE染色对肿瘤组织形态进行观察,RT-PCR法测定移植瘤中Bax,Bcl-2,VEGF的表达,Western Blot方法研究肿瘤细胞凋亡情况.[结果]HE染色观察结果显示,实验组肿瘤组织细胞变大、胞质疏松、核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂.RT-PCR实验扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测结果示,实验组Bax基因及Bax蛋白的表达均较其他两组明显升高(P<0.05),而实验组Bcl-2和VEGF基因及Bcl-2和VEGF蛋白的表达均较其他两组明显降低(P<0.05).[结论]IL-24对小鼠体内的黑色素瘤B16细胞的生长有抑制作用. 相似文献
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人免疫球蛋白转基因小鼠自身免疫性重症肌无力模型的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是由乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR)抗体介导的自身免疫病。AchR抗体与神经肌肉接头处的AchR结合,通过抗原调变、激活补体导致突触后膜裂解而使AchR数量减少,结果出现肌肉收缩无力等症状。MG的动物模型——实验性自身免疫性MG(experimental autoimmune MG,EAMG)可经主动免疫动物富含AchR的电鳐(Torpedo)电器官制备的AchR(tAchR)诱导出。 相似文献
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目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因.方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因.经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性.突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对.结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力.测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列.结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因. 相似文献