携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的ＥＢＶ潜伏膜蛋白2A（latent membrane protein 2A,LMP2A）序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞（实验组）,同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1- LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。     

探讨腹泻儿童粪便标本中病原微生物检验价值

目的 探讨腹泻儿童粪便标本中病原微生物检验价值。方法 回顾性研究选取 2018 年 5 月至 2019 年 9 月我方医院收治的 46 例腹泻患儿并收集其粪便标本。 对所有标本进行病毒及细菌检测。 结果 46 例粪便样本中检测出 43 株病原菌,阳性检出率为 93.48% ,其中志贺菌检出 22 株,检出率为 51.16% ,明显高于其他种类,差异显著( P<0.05 )。志贺菌 22 株对头孢哌酮的耐药菌株检出例数为 11 ,耐药率为 50.00% ( 11/22 ),志贺菌 22 株对头孢噻肟的耐药菌株检出例数为 10 ,耐药率为 45.45% ( 10/22 )。 其中志贺菌 22 株对阿莫西林的耐药菌株检出例数为 3 ,耐药率为 13.64% ( 3/22 ),耐药率相对较低。 孤菌属 13 株对氨苄西林的耐药菌株检出例数为 7 ,耐药率为 53.85% ,同样较高。 结论 腹泻儿童粪便标本中检测出病原菌、耐药性可为临床提供治疗依据,其中志贺菌是导致儿童腹泻的重要种类,孤菌属是发生率其次的病原菌,并且志贺菌对头孢哌酮、头孢噻肟等头孢类药物耐药率较高,值得临床关注。