SOX10在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病中的作用

目的 探讨SOX10、潘氏细胞发育及分泌防御素-5与先天性巨结肠相关性小肠结肠炎的关系.方法 收集50例先天性巨结肠病变肠管,根据术前是否发生小肠结肠炎分为HAFC组(n=14)和HD组(n=36),并以20例正常结肠标本作对照组.采用免疫组织化学方法观察结肠中防御素-5蛋白质表达、潘氏细胞发育情况以及SOX10蛋白质表达情况.采用实时荧光定量PCR技术检测防御素-5 mRNA及Sox 10 mRNA表达情况.结果 防御素-5在正常肠管中不表达,HAEC组和HD组在肠腺隐窝基底处呈不同程度阳性表达.但前者阳性区域平均光密度值明显增高(0.33±0.039比0.10±0.031,P＜0.05),HAEC组防御素-5mRNA亦呈显著增高趋势(2.72±0.80比0.78±0.21,P＜0.05).对结肠组织同层切片进行潘氏细胞特异性产物溶菌酶免疫组化染色发现,对照组肠管中除1例存在弱阳性外其他均无阳性表达.HD组和HAEC组结肠中同样在隐窝基底处存在溶菌酶阳性细胞,可鉴别为化生的潘氏细胞,但HAEC组在发生率(78.6%)和细胞个数(2.97±0.80)明显高于HD组(27.8%,0.43±0.85)(P＜0.05).SOX10免疫产物主要在结肠神经节细胞膜及胞浆中表达,对照组、HAEC组、HD组阳性区域的平均光密度值递减(0.75±0.041,0.61±0.048,0.35±0.025),差异具有统计学意义(P＜0.05),同时RT-PCR检测显示Sox10 mRNA在各组中的表达与蛋白质水平呈平行结果.结论 SOX10可能通过影响潘氏细胞发育及分泌防御素-5在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎的发生发展中起一定作用.

Abstract：

Objective To study the expression of SOX10 and Human α-defensins-5(HD-5 )in Hirschsprung's disease associated enterocolitis(HAEC) and expore the possible relationship between SOX10 and HAEC.Methods Fifty pathological colons of Hirschsprung's disease (HD) were divided into HAEC group (n = 14) and HD group(n = 36) according to the presence of preoperative enterocolitis,Twenty normal colons as control group.The protein and mRNA expression of HD-5 and SOX 10 were measured by immunohistochemical staining and real-time quantitative PCR Results Normal colons did not express HD-5 but positive expression of HD-5 was detected at the base of the crypts of Lieberkuhn in HAEC and HD groups in different degree.The mean optical density of HD-5 immunohistochemical staining (0.33 ± 0.039 vs 0.10 ± 0.031 )and HD-5 mRNA expression (2.72 ± 0.80 vs 0.78 ± 0.21 ) in HAEC group was apparently higher than those in HD group(P＜0.05).The expression of lysozyme,a specific product by Paneth Cell,on sequential sections was negative in control group except one sample.In HAEC group and HD group,positive expression of lysozyme can be seen in the crypts of Lieberkuhn,where the cells can be identified as Metaplastic Paneth cell,but the incidence (78.6% vs 27.8%) and the number of cells 2.97 ± 0.80 vs 0.43 ± 0.85) in HAEC group were obviously higher than those in HD group(2.97 ± 0.80 vs 0.43 ± 0.85) (P＜0.05).SOX10 was mainly located in the plasmalemma and cytoplasm of ganglion cell and its mean optical density in control group (0.75 ±0.041 ),HAEC group (0.61 ± 0.048)and HD group(0.35 ± 0.025) were decrement,the difference between three groups were statistically significant (P＜0.05).Meanwhile,Sox10mRNA detected by real-time quantitative PCR indicated the parallel result.Conclusions SOX10 may be an important factor in the pathogenesis and development of HAEC.     

基因干扰miR-105抑制非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭

目的 探究基因干扰miR-105对非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭的影响.方法 RT-PCR检测33例肺癌患者肺组织及癌旁组织中miR-105表达水平.转染miR-105 inhibitor至A549细胞,将细胞随机分为3组(Control、inhibitor-NC、miR-105 inhibitor组)进行后续实验.RT-PCR检测miR-105表达水平;成球实验检测细胞成球率、成球直径;Weslern blot检测SOX2、OCT4蛋白表达水平;流式分选检测CD133+细胞数;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;Weslern blot检测VEGF蛋白表达水平.结果 癌旁组织中miR-105表达水平低于癌组织.与Control组相比较,miR-105 inhibitor组miR-105表达水平降低(P<0.05),细胞成球率、成球直径降低(P<0.05),SOX2、OCT4蛋白水平降低(P<0.05),CD133+细胞数降低(P<0.05),克隆形成率降低(P<0.05),侵袭细胞数降低(P<0.05),VEGF蛋白水平降低(P<0.05).结论 基因干扰miR-105可抑制非小细胞肺癌细胞的干细胞样特性、恶性增殖和侵袭.     

表皮生长因子对小鼠肝外胆管上皮细胞原代培养的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠肝外胆管上皮细胞(murine extra-hepatic bile duct epithelial cells,MEBECs)体外培养的影响.方法 先采用胰酶和Dnase Ⅰ,再用Ⅳ型胶原酶消化、分离小鼠肝外胆管组织为单细胞悬液进行接种,接种的细胞分别用含或不含10 ng/mL EGF的DMEM/HamsF12(1:1)培养基进行原代培养.倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化,MTT法检测EGF对MEBECs增殖的影响.结果 添加EGF组较未添加EGF组MEBECs体外存活时间明显延长(21 d±1.3 d vs(12.1 d±2.1 d)(P<0.001),细胞活力优于未添加组(P<0.001).结论 培养基中添加EGF可以明显地促进小鼠肝外胆管上皮细胞的增殖,延长细胞体外培养的存活时间.     

c-kit在肠神经节细胞发育过程中的作用

目的 初步探讨c-kit在肠神经节细胞发育中的作用.方法 体外培养大鼠肠神经节细胞及骨髓间充质干细胞(BMSCs),并在GDNF与胎肠培养基(FGCM)培养的条件下诱导BMSCs分化为肠神经节细胞.免疫组织化学方法 鉴定原代培养的肠神经节细胞神经丝蛋白(neurofilament,NF)的表达,用血管活性肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)及NF鉴定BMSCs诱导分化的肠神经节细胞.RT-PCR分别检测原代肠神经节细胞、BMSCs以及诱导之肠神经节细胞的c-kit的表达.结果免疫组化结果显示纯化后的肠神经节细胞表达NF,流式细胞学检测第四代后的BMSCs高表达CD90,而不表达CD45,诱导后的肠神经节细胞可表达VIP及NF,而其余两组则不表达.RT-PCR结果示原代肠神经节细胞及BMSCs不表达c-kit,诱导后的肠神经节细胞可表达c-kit.结论 在体外能成功培养大鼠肠神经节细胞及BMSCs并纯化,BMSCs可被诱导为肠神经节细胞并表达肠神经递质.在肠神经系统的发育过程中,c-kit可能在某一阶段起到一定作用,在肠神经细胞逐渐发育成熟时接受到某些信号而关闭.     

整联蛋白α2β1和α4β1在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用

目的 检测肝外胆管上皮细胞整联蛋白的表达类型并探讨其在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用.方法 取Balb/c小鼠的肝外胆管进行肝外胆管上皮细胞培养至第3天,直接免疫荧光法检测整联蛋白α2、β1亚基,用间接免疫荧光法检测α4亚基.用透射电镜观察轮状病毒与肝外胆管上皮细胞的结合.然后加入相应的整联蛋白抗体,再加人轮状病毒,观察各组引起的细胞病变(cytopathic effect,CPE),并进行统计学分析.结果 用直接免疫荧光法检测到整联蛋白α2、β1亚基存在于肝外胆管上皮细胞膜表面,用间接免疫荧光法检测到α4亚基存在于肝外胆管上皮细胞膜表面.同时透射电镜观察到了轮状病毒与肝外胆管上皮细胞的结合.加入相应抗体阻断整联蛋白α2β1和α4β1后细胞病变率和对照组相比(6 h:16.58±3.61和31.49±8.15 vs.56.87±2.98;24 h:88.10±5.78和92.56±2.23 vs.95.84±2.75,均为P<0.01),细胞病变明显减轻,而且细胞病变在阻断α2β1组较阻断α4β1组减轻更为明显(6 h:16.58±3.61 vs.1.49±8.15;24 h:88.10±5.78 vs.92.56±2.23,均为P<0.01).结论 肝外胆管上皮细胞表面表达整联蛋白α2、β1和α4亚基并且整联蛋白α2亚基的含量可能大于α4亚基的含量,整联蛋白α2β1和α4β1可以介导轮状病毒感染肝外胆管上皮细胞从而引起细胞损伤.     

病毒感染致胆道闭锁的机制与研究进展

胆道闭锁(biliary atresia,BA)是一种波及肝内外胆管的进行性硬化性病变并常伴有肝纤维化,是引起新生儿黄疸的重要原因[1,2].该病好发于东方人群,女性多见.     

NSP4与整联蛋白α2β1在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用

目的 探讨NSP4与整联蛋白α2β1在轮状病毒致肝外胆管上皮细胞损伤中的作用.方法 取Balb/c小鼠的肝外胆管进行肝外胆管上皮细胞培养至第三天,用激光共聚焦方法检测整联蛋白α2、β1亚基及轮状病毒NSP4.用siRNA干扰技术沉默培养至第三天的肝外胆管上皮细胞的整联蛋白α2后加入轮状病毒,用Real Time RT-PCR方法检测α2亚基及轮状病毒NSP4的mRNA),并进行统计学分析.结果 用激光共聚焦方法检测到了整联蛋白α2、β1亚基存在于肝外胆管上皮细胞膜表面；轮状病毒NSP4从感染细胞向紧邻的非感染细胞进行扩散；siRNA干扰技术表明沉默整联蛋白α2后轮状病毒NSP4mRNA含量1±0.01较对照组0.56±0.09减低(P＜0.05).结论 肝外胆管上皮细胞表面表达整联蛋白α2、β1且整联蛋白α2β1与轮状病毒NSP4相互作用并进一步导致肝外胆管上皮细胞损伤.     

肺腺癌组织中GSK3β的表达及其临床意义

目的 观察肺腺癌组织中糖原合成酶激酶(glycogen synthesis kinase,GSK) 3βm RNA和蛋白的表达情况,并探讨其在肺腺癌发生发展中的意义。方法 随机选取55例肺腺癌患者的癌组织标本作为实验组,相对应的癌旁正常组织标本作为对照组。用RT-PCR法检测两组中GSK3βm RNA相对表达量;用Western blot法检测两组中GSK3β蛋白的相对表达量。结果 实验组GSK3βm RNA及GSK3β蛋白的相对表达量分别为(0. 366±0. 138)和(0. 460±0. 242),对照组分别为(0. 485±0. 137)和(0. 689±0. 183)。实验组GSK3βm RNA及GSK3β蛋白表达量均低于对照组(P 0. 01)。肺腺癌Ⅰ～Ⅱ期患者GSK3βm RNA及蛋白相对表达量明显高于Ⅲ期患者(P 0. 01)。结论 相比癌旁正常组织,GSK3β在肺腺癌组织中表达下调,伴随临床分期上升,GSK3β表达下降。提示GSK3β对肺腺癌的发生发展有抑制作用,提高GSK3β的表达可能使肺腺癌的治疗获益。     

长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响

目的：探讨长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响情况。方法：qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中H19的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后肺癌细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测沉默H19后肺癌细胞迁移能力的变化;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-107的相互作用;qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中miR-107的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后miR-107对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测沉默H19后miR-107肺癌细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤检测沉默H19后miR-107对肺癌成瘤大小以及体积的影响。Western blot检测沉默H19后Notch通路蛋白的表达情况。结果：与癌旁组织相比,肺癌组织中H19表达明显增高;肺癌细胞A549中H19表达水平最高;沉默H19可以抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力;H19能与miR-107的3′UTR特异性结合;与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-107表达明显降低;沉默H19后,抑制miR-107可以促进肺癌细胞侵袭和迁移能力;与H19-siRNA组相比,H19-siRNA+miR-107-inhibitor组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显增大。沉默H19后Notch通路蛋白表达情况相应下调。结论：H19在肺癌发生发展过程中起重要作用,H19可以靶向调节miR-107通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移能力。     

胸腔镜手术与传统开胸术对中老年非小细胞肺癌患者肺功能及血糖水平的影响

目的探讨胸腔镜手术和传统开胸手术对中老年非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺功能及血糖水平的影响。方法选取每组确诊并手术治疗的410例中老年肺癌患者为研究对象,采取随机数字表法分为试验组和对照组,每组205例。试验组进行胸腔镜下手术治疗,对照组采取传统开胸手术治疗,记录并对比两组患者的手术时间和手术出血量;于术前及术后1 d、3 d、7 d测量并对比对两组患者血糖水平;于术前及术后7 d检测并对比两组患者肺功能;观察两组患者手术过程中及术后并发症发生情况。结果试验组手术出血量明显较对照组降低(P0.05),两组手术时间比较差异无统计学意义(P0.05);两组术前肺功能指标对比差异无统计学意义(P0.05),术后7 d实验组第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)、用力肺活量(FVC)、每分钟通气量(MV)及肺一氧化碳弥散量(DLCO)均高于对照组(均P0.05)。术后1 d、3 d、7 d试验组血糖水平明显低于对照组(P0.05);试验组术后并发症发生率低于对照组(P0.05)。结论相比于传统开胸手术,胸腔镜手术对中老年NSCLC患者的手术损伤和肺功能影响较小,对血糖水平影响不大,且术后并发症较少。