肝癌患者血清乙肝病毒e抗原与肝细胞HBV cccDNA水平的相关性

目的 探讨肝细胞癌（HCC）感染乙型肝炎病毒（HBV）患者乙肝病毒e抗原（HBeAg）与患者癌及癌旁组织内HBV DNA、cccDNA水平的关系。方法 收集2012～2015年解放军第105医院96例接受肝癌切除术HBV相关HCC患者血清及其癌和癌旁组织,用荧光探针法检测HBV DNA和cccDNA水平,化学发光法检测血清HBeAg水平,比较不同感染阶段HCC患者血清及组织HBV DNA水平及cccDNA的差异,分析HBeAg与肝细胞HBV DNA及cccDNA的关系,并使用血清学指标构建HBV DNA及cccDNA回归模型。结果 HBeAg（+）/HBeAb（-）组血清HBV DNA、癌旁组织HBV DNA及cccDNA水平高于HBeAg（-）/HBeAb（+）组,差异均有统计学意义（P<0.05）。肝癌患者HBeAg与癌旁组织HBV DNA（r=0.476,P<0.05）和cccDNA（r=0.549,P<0.05）存在相关性。不同TNM分期HCC患者HBeAg与癌旁组织内HBV DNA及cccDNA均相关（P<0.05）。使用血清学指标构建的回归模型预测癌旁组织HBV DNA及cccDNA的变化R²值分别为0.549及0.542（P<0.05）。结论 肝癌患者血清HBeAg与癌旁组织中HBV DNA及cccDNA存在相关性,且不受分期影响,血清学指标回归模型可用于肝癌患者组织HBV DNA及cccDNA的辅助监测。     

人源性促甲状腺激素受体单链抗体Fc 融合蛋白的制备及鉴定

目的:构建含有促甲状腺激素受体抗体(TRAb)单链抗体的重组载体pFastBac~(TM)1-ScFv-IgG1Fc,通过Bac-to-Bac表达系统实现单链抗体融合蛋白的高效表达,并检测目的蛋白表达和免疫学活性。方法:TRAb抗体的重链可变区(HV)和轻链可变区(LV)的序列以linker(G4S)连接,构建ScFv;Genbank检索人IgG1Fc序列,SnapGene软件分析上述序列和载体pFastBac~(TM)1,以基因合成方式构建重组质粒pFastBac~(TM)1-ScFv-IgG1Fc;pFastBac~(TM)1-ScFv-IgG1Fc转化感受态大肠杆菌DH10Bac生成重组杆粒,pUC/M13正向和反向引物进行PCR分析确认目的基因的序列;重组杆粒采用Cellfectin?Ⅱ试剂转染昆虫细胞Sf9生成P1病毒储液,继续感染Sf9生成高滴度的P2和P3病毒储液;P3病毒储液感染High Five~(TM)细胞,收集上清通过SPA-Sepharose CL-4B亲和层析纯化获得较纯的单链抗体融合蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白;化学发光和免疫组化检测目的蛋白抗原结合力。结果:PCR扩增得到约3 747 bp的基因序列,重组杆粒中目的基因正确插入;目的蛋白位于55 kDa附近且无杂带,纯度较高;目的蛋白浓度为248 U/L,单链抗体融合蛋白的结合力较好。结论:Bac-to-Bac表达系统成功构建并表达了TRAb单链抗体融合蛋白,抗原亲和力良好。     

428株铜绿假单胞菌的临床分布与耐药性分析

目的分析临床分离铜绿假单胞菌的感染部位分布及耐药率,为减少和控制院内感染及临床合理选择抗菌剂提供依据。方法采用法国生物梅里埃公司ATB Expression微生物分析仪进行细菌鉴定,K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果分离获得1 165株细菌,其中铜绿假单胞菌428株,检出率为36.74%;82.00%的铜绿假单胞菌分离自痰与咽拭子,41.44%分离自干部病区。铜绿假单胞菌菌株对多黏菌素B敏感率最高(100.00%),其次为美罗培南(59.80%)、哌拉西林/他唑巴坦(59.70%)和亚胺培南(57.10%)。结论铜绿假单胞菌临床检出率较高,主要分布在老干部病区。易感因素为患者病情严重、住院时间较长、免疫功能低下、大量使用抗菌剂等。铜绿假单胞菌表现为高度和多药耐药,建议临床应根据药敏试验结果进行抗感染治疗。     

血清AFP对慢性乙型肝炎肝纤维化程度的预测价值

目的探讨血清AFP与乙型肝炎肝纤维化等级的关系,评估血清AFP对乙型肝炎肝纤维化的预测价值。方法收集2015年5月-2017年5月安徽医科大学第二附属医院已确诊的慢性乙型肝炎(CHB)住院患者286例,另选取2016年3月-2017年6月本院门诊体检中心体检合格健康成人150例作为健康对照组。CHB患者行肝穿刺活组织检查,血液学指标检测PLT、ALT、AST、TBil、Alb、Glo、ALP、GGT、AFP、HBV DNA、HBs Ag等。符合正态分布的计量资料2组间比较采用独立样本t检验,非正态分布的计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验;AFP与临床指标的相关性分析采用Spearman秩和分析;血清AFP水平预测肝纤维化的敏感性和特异性分析采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估。结果 286例CHB患者中肝纤维化分级S0 19例、S1 156例、S2 52例、S3 39例、S4 20例,经Spearman相关性分析发现血清AFP水平与肝纤维化分级呈正相关(r=0.373,P0.000 1);CHB患者血清AFP水平为2.89(1.87~5.59)ng/ml,健康对照组AFP水平为2.11(1.21~3.10)ng/ml,差异有统计学意义(P=0.0027)。CHB非显著纤维化患者血清AFP水平为2.51(1.70~3.81)ng/ml,显著纤维化患者AFP水平为4.17(2.42~14.06)ng/ml,差异有统计学意义(P=0.006 9);CHB患者血清AFP水平与ALT、AST等肝功能指标呈正相关(r值分别为0.393、0.419,P值均0.000 1),且与HBV DNA呈正相关(r=0.231,P0.05)。此外,AFP水平与HBs Ag无明显相关性(r=0.154,P0.05);相关性分析发现CHB患者血清AFP水平与APRI评分呈正相关(r=0.342,P0.000 1);ROC曲线评估CHB患者血清AFP水平预测肝纤维化临床价值,截断值为3.8 ng/ml时,特异性和敏感性分别为84.92%和37.41%,95%可信区间2.03~8.00 ng/ml,其ROC曲线下面积为0.674(P0.000 1)。结论 CHB患者血清AFP水平随着肝纤维化等级升高而逐渐增高,具有评估肝脏显著性纤维化的临床应用价值。     

急性脑梗死患者血浆3项指标联合检测的临床意义

目的检测急性脑梗死患者发病急性期与恢复期血浆D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原降解产物(FDP)及C反应蛋白(CRP)的水平,探讨3项指标对于急性脑梗死的辅助诊疗价值。方法分别检测36例脑梗死患者发病急性期与恢复期以及50例健康体检者的血浆D-D、FDP及CRP水平。结果脑梗死急性期患者血浆D-D、FDP及CRP水平与恢复期患者及对照组血浆D-D、FDP及CRP水平存在显著差异;并且脑梗死患者急性期血浆D-D检测阳性率显著高于血浆FDP检测阳性率。结论血浆D-D、FDP与CRP的实验室联合检测对判断急性脑梗死的发生、严重程度及疗效观察有一定临床意义,值得基层医院推广应用。     

HBV感染者DNA载量分层与血小板相关参数关系

目的 通过对性别、年龄、乙型肝炎病毒( HBV) DNA载量等因素与血小板( PLT)参数的相关性进行分析,探讨PLT参数变化在临床治疗中的意义.方法 对确诊为HBV感染的无症状乙肝患者的HBV DNA载量及PLT参数进行检测和统计学分析.结果 不同年龄、不同HBV DNA载量对PLT和PCT计数有显著影响.其中与相同年龄组的健康组相比,HBV感染者PLT和血小板比容( PCT)计数显著降低,并以高龄组( ＞45 岁)变化最为显著. PLT和PCT伴随HBV DNA载量的的升高呈现显著降低趋势.同时,相关性分析表明 HBV 感染者高龄组的 PLT 和 PCT 计数与 HBV DNA 载量呈显著负相关.结论 PLT和PCT在高于45 岁的HBV感染者中随着HBV DNA载量的升高而降低,其变化幅度对判断HBV的复制具有重要的临床参考意义.     

血清γ-谷氨酰转肽酶与乙型肝炎相关肝细胞癌患者预后的关系

目的 研究血清γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平与乙型肝炎相关肝细胞癌(HBV-HCC)患者手术预后的关系及其在肝细胞癌(HCC)诊断中的价值.方法 收集330例HBV-HCC患者、90例乙型肝炎相关肝硬化患者(HBV-LC)及90例慢性乙型肝炎(CHB)患者病例资料,回顾性分析GGT及甲胎蛋白(AFP)水平,比较不同组间相关指标差异,使用ROC曲线分析GGT对HCC诊断的价值,使用Kaplan-Meier生存曲线及Cox风险比例模型分析GGT与HCC患者预后的关系.结果 HBV-HCC患者血清GGT(94.2 U· L-1)显著高于HBV-LC(78.3 U· L-1)和CHB对照组(34.7 U· L-1)(P<0.001).血清GGT联合AFP诊断肝癌阳性率高达76.2%;分别以HBV-LC及CHB为对照组,血清GGT诊断肝癌的AUC分别为0.579,0.764.Kaplan-Meier生存曲线表明高GGT水平HBV-HCC患者组具有更高的肿瘤复发率(P<0.001).Cox风险比例模型分析显示:肿瘤转移、肿瘤大小>3 cm、血管栓塞、GGT≥60 U· L-1、PLT<100×109L-1是HBV-HCC患者术后肿瘤复发的危险因素(P<0.05).结论 血清GGT检测可以提高HBV-HCC患者的检出率,高GGT是术后肿瘤复发的独立危险因素之一,应加强重视.     

肝癌患者血清乙肝病毒e抗原与肝细胞HBV cccDNA水平的相关性

目的 探讨肝细胞癌(HCC)感染乙型肝炎病毒(HBV)患者乙肝病毒e抗原(HBeAg)与患者癌及癌旁组织内HBV DNA、cccDNA水平的关系.方法 收集2012~2015年解放军第105医院96例接受肝癌切除术HBV相关HCC患者血清及其癌和癌旁组织,用荧光探针法检测HBV DNA和cccDNA水平,化学发光法检测血清HBeAg水平,比较不同感染阶段HCC患者[HBeAg(+)/HBeAb(-)组、HBeAg(﹢)/HBeAb(﹢)组及HBeAg(-)/HBeAb(﹢)组]血清及组织HBV DNA水平及cccDNA的差异,分析HBeAg与肝细胞HBV DNA及cccDNA的关系,并使用血清学指标构建HBV DNA及cccDNA回归模型.结果 HBeAg(+)/HBeAb(-)组血清HBV DNA[(5.5 ±1.1)log10U/mL]、癌旁组织HBV DNA[(7.0 ±1.5)log10U/106cells]及cccDNA[(5.4 ±1.3)log10U/106cells]水平高于HBeAg(-)/HBeAb(+)组[(4.5 ±1.0)log10U/mL、(5.7 ±1.0)log10U/106cells、(4.2 ±0.9)log10U/106cells],差异均有统计学意义(P<0.05).肝癌患者HBeAg与癌旁组织HBV DNA(r=0.476,P<0.05)和cccDNA(r=0.549,P<0.05)存在相关性.不同TNM分期HCC患者HBeAg与癌旁组织内HBV DNA及cccDNA均相关(P<0.05).使用血清学指标构建的回归模型预测癌旁组织HBV DNA及cccDNA的变化R2值分别为0.549及0.542(P<0.05).结论 肝癌患者血清HBeAg与癌旁组织中HBV DNA及cccDNA存在相关性,且不受分期影响,血清学指标回归模型可用于肝癌患者组织HBV DNA及cccDNA的辅助监测.     

血清肿瘤标志物的联合检测在原发性肝癌中的诊断价值

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、CA199的联合检测在原发性肝癌(PHC)中的诊断价值。方法选取2013年7月至2014年6月收治的67例PHC患者(PHC组)、83例良性肝病患者(良性肝病组),另选取同期125例体检健康者(对照组),采用化学发光法分别检测所有研究对象的血清AFP、CEA、CA125、CA199水平并进行统计学分析。结果 PHC组血清AFP、CEA、CA125和CA199阳性率分别为71.6%、40.3%、53.7%、58.2%,均高于良性肝病组与对照组,比较差异均有统计学意义(P0.05);4项肿瘤标志物联合检测在PHC组的阳性率为91.0%,高于各肿瘤标志物单项检测的阳性率,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 AFP、CEA、CA125、CA199联合检测能够明显提高PHC的诊断阳性率,有助于PHC的早期诊断。     

HBV-DNA检测试剂的性能评估与室内质控数据评价

参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)文件,对临床检验使用的实时荧光定量PCR扩增检测试剂盒定量结果的精密度、正确度、定量限、线性范围及抗污染性进行评价.同时用乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)试剂盒检测2016年3月~8月两个批号的质控血清HBV-DNA,并计算质控结果、标准曲线斜率、截距和相关系数的均值()、标准差(SD)和变异系数(CV).其中批内、批间精密度CV分别为1.08%~4.41%、2.17%~2.74%,达到核酸检测试剂盒的国家标准及《医学实验室质量和能力认可准则》中基因扩增检验项目分析性能标准(CV≤5%).参加2016年卫生部室间质评结果总体平均偏倚为2.03%,准确度符合卫生部质评要求.相关系数r=0.999 9,>0.98,线性关系符合要求.定量限结果符合±0.5个对数数量级的要求(评价中至少22次为阳性).本室2016年3月~8月测定的室内质控物结果对数的累积均值(±2s)为4.34(4.20~4.44),符合参考范围要求.经验证,实时荧光定量PCR HBV-DNA检测试剂盒的各项性能指标以及室内质控结果满足《医学实验室质量和能力认可准则》要求,可以为临床提供快速、准确的报告.