宋氏I相/福氏~(1b)痢疾双价抗原菌株的构建(简报)

1980年Kopecko等人证明了凡是强毒宋内氏痢疾杆菌都含有一个非诱动性的120Md大质粒,它编码宋氏Ⅰ相抗原并与该菌侵入上皮细胞的关系非常密切。用转座子插在大质粒上使其获得抗药性遗传标记,再通过诱动系统诱动,可将此大质粒转移给适当的受体菌株。     

宋氏I相/福氏1b痢疾双价抗原菌株的构建

以菌体内重组方法将脱失了部分毒力基因片段的宋氏痢菌Ⅰ相抗原质粒诱动到已脱失140Md毒力质粒的福氏痢菌1b中,构建成兼具福氏及宋氏“O”抗原的二价菌株。该菌株不含编码卡那霉素抗性基因的Tn5;连续传25代仍对宋氏及福氏1b痢菌O抗血清呈凝集反应;质粒电泳图显示该二价菌株拥有供体菌赋予的75Md的质粒带。     

肠球菌庆大霉素高耐性传递

目的 对临床分离的肠球菌进行药敏分析,研究其庆大霉素高耐性的遗传学基础。方法 通过电击转化和质粒丢失试验确定庆大霉素高耐性质粒,PCR扩增和末端双脱氧法测序分析庆大霉素高耐基因。结果 确定一庆大霉素高耐性质粒（pG301)及其重组质粒（pG401),PCR扩增出－1.6kb扩增片段,测序结果与6‘-O-氨基糖苷乙酰转移酶－2“－N－氨基糖苷酸转移酶[aac(6‘)-aph(2“)]双功能酶基因基本一致。结论 在所分离的肠球菌中,耐药性相当普遍。庆大霉素高耐基因可位于不可自主接合转移的较小质粒上,在电击转化过程中可发生重组,在此质粒中介导庆大霉素高耐性的基因是aac(6‘)-aph(2“)双功能酶基因。     

628株大肠杆菌R质粒的检测

本文检测来源于新生儿及健康猪的628株大肠杆菌的耐药谱及R质粒。这些菌株对四环素的耐药率最高,人源菌株对氨(?)青霉素和庆大霉素的耐药率高达67.82％和51.49％。R质粒的检出率在60％以上。多重耐药菌株中R质粒检出率特别高。三耐以上菌株的耐药谱型多以四环素、磺胺抗性为基础,对比过去的资料;耐药类型由四耐已发展到以五耐以上居优势;应引起医务界及社会上的重视。     

针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后的影响

目的研究针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后的影响。方法选取该院2017年6月-2019年6月的80例行Ahmed青光眼引流阀植入术的糖尿病新生血管性青光眼患者进行研究观察,随机将其分为实验组及对照组各40例,对照组进行常规护理,实验组在对照组基础上进行针对性护理,治疗结束后比较两组患者患眼眼压情况及出现术后并发症情况。结果治疗结束后实验组患者出现术后并发症为4例,发生率为10.00%;对照组患者术后并发症为18例,发生率为45.00%;实验组患者眼压控制水平在8~14 mmHg为18例,眼压控制水平在15~21 mmHg为19例,眼压控制水平在21 mmHg以上为3例,对照组患者眼压控制水平在8~14 mmHg为12例,控制水平在15~21 mmHg为10例,控制水平大于21 mmHg为18例,设定眼压水平在8~21 mmHg为控制眼压水平合格,实验组达标率为92.50%,对照组达标率为55.00%。以上数据比较两组均差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后效果明显,有利于控制患者眼压降低术后潜在并发症发生,值得临床推广。     

宋氏Ⅰ相抗原质粒的分子克隆及与Ⅰ相抗原突变株的互补检测

用“鸟枪”法克隆宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原质粒 pFEG 001,获得13株重组子。将其分别导入宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变株 BW 201～204进行互补检测,发现重组质粒 pBL 108可反式互补于Ⅰ相抗原突变质粒 paW 204,恢复Ⅰ相抗原的表达;该重组质粒中的插入片段分子量为1.0kb。互补结果提示该片段内至少含有1个与Ⅰ相抗原表达有关的基因,据此推测宋氏Ⅰ相抗原的表达受多基因控制。     

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

目的　克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的粘附素基因papG并作序列分析。 方法　根据Ⅰ型papG(papGJ96 )和Ⅱ型 papG(papGIA2 )基因序列设计 3条引物 ,PG2和PG3分别为下游 3’端引物 ,PG1为两型papG上游 5’端共用引物 ,并在各引物 5’端加入限制性内切酶位点。以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增 ,将扩增产物克隆入质粒载体 ,筛选阳性重组质粒作序列分析。结果　UPEC132株以Ⅰ型 papG引物扩增时为阴性结果 ,以Ⅱ型 papG引物扩增时可获得约 110 0bp的DNA片段。扩增产物经克隆获得阳性重组质粒 pGC39和pGC10 3,对其序列分析显示 papG132编码337个氨基酸 ,与 papGJ96的同源性仅为 4 5 % ,而与 papGIA2的同源性为 98.6 %。与papGIA2比较 ,papG132核苷酸序列 +3位缺失 1个三联体密码 ,并在特异性受体结合域 +49位、+16 0位和PapD蛋白亚单位作用区 +2 72位、+314位存在错义突变 ,此外还存在 7处同义突变。结论UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPECJ96株 ,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合 ,后者为F13型 papA与Ⅰ型papG组合。Ⅱ型PapG粘附力较强 ,具有重要的临床意义。     

宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变菌株的构建和鉴定

宋氏Ⅰ相抗原是由宋氏痢疾杆菌的毒力质粒决定的。应用转座子Tn3和Tn5分别对宋氏Ⅰ相抗原质粒进行转座试验,获得16株Ⅰ相抗原突变菌株,用内切酶对Tn3插入突变质粒进行分析,发现宋氏Ⅰ相抗原质粒pFEG 0011被Tn3插入后,其Sal Ⅰ第1及第2片段均发生插入突变而不能表达Ⅰ相抗原,表明该2个片段均系与Ⅰ相抗原表达有关的DNA序列,由此推测Ⅰ相抗原表达的有关基因可能是分散的或分布较大的范围。     

致肾盂肾炎大肠杆菌P菌毛粘附素基因的型别鉴定

目的 从基因水平鉴定致肾盂肾炎大肠杆菌P菌毛粘附素的类型。方法 根据P菌毛I型（PapGJ96)、Ⅱ型（PapGIA2)和Ⅲ型（PrsGJ96)粘附素的基因序列，选择非同源区设计合成三对引物。以全菌DNA样品为模板，应用普通PCR和复合PCR技术获得三型papG的扩增。结果 UPEC J96分别产生461bp和258bp的DNA片段；UPEC132和UPEC136均产生190bp的DNA片段。无P菌毛对照株为阴性扩增。复合PCR结果与普通PCR完全一致。PapG132扩增产物的序列分析表明其与PapGIA2之间具有97．9％的同源性，但存在4处点突变。结论 UPEC132株P菌毛粘附素为Ⅱ型PapG，但与国外同型PapG比较，存在基因变异。复合PCR技术用于papG基因分型具有很高的敏感性和特异性。