冷冻保存时长对卵裂期胚胎组蛋白表观遗传修饰的影响

【目的】研究不同的冷冻保存时长对人类卵裂期胚胎的组蛋白表观遗传修饰的影响。【方法】采用经患者知情同意捐献用于科研的慢速冷冻的卵裂期胚胎,根据冷冻时长分为6、9和12年组,以新鲜胚胎为对照组,每组6枚捐献胚胎。采用细胞免疫荧光技术观察去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3、H3K9me3）的表达量在各组胚胎中的差异,并以单细胞RT-qPCR技术检测去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶（SUV39H1、SET?DB1）、去甲基化酶KDM5A对应mRNA的表达量。【结果】4组胚胎的去乙酰化酶HDAC1、组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无统计学意义的差异（P>0.05）。同时去乙酰化酶HDAC1、甲基化酶SUV39H1对应mRNA的表达量也无统计学意义的差异（P>0.05）。随着胚胎冷冻时长的增加,甲基化酶SETDB1对应mRNA的表达量有递增趋势,然而差异无统计学意义（P>0.05）。去甲基化酶KDM5A对应的mRNA的表达量也随冷冻时长的增加而增强,差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】慢速冷冻保存时长对卵裂期胚胎的组蛋白（H3K9ac、H3K4me3和H3K9me3）的蛋白表达量无显著影响,甲基化酶（SUV39H1、SETDB1）对应的mRNA表达量没有明显影响;但随着冷冻保存时长增加,胚胎去甲基化酶KDM5A对应的mRNA表达量增加,有可能导致胚胎转录抑制程度增强。     

周围型肝内胆管细胞癌MDCT征象分析

目的 分析周围型肝内胆管细胞癌的直接和间接CT征象.方法 回顾性分析92例经手术病理证实的周围型肝内胆管细胞癌的CT平扫及增强资料,分析病变分型,病灶部位、大小、增强强化时间-密度曲线、局部胆管扩张、肝包膜局限性凹陷以及是否伴有胆道结石,结合病理进行对照分析和统计.结果 92例肝内胆管细胞癌位于肝左叶57例,肝右叶35例.病灶大小为2.5～ 12cm,平均为6.5cm.CT平扫病灶均为低密度,CT值平均为41 Hu.增强扫描动脉期和门脉期呈不规则轻度晕圈状强化,境界不清,延迟期内部可见线样及条网状强化,平均CT值分别为63 Hu、74Hu和79Hu.延迟5分钟扫描病灶均呈进一步强化,平均CT值为82 Hu,时间-密度曲线呈＂缓慢上升-平台＂型.89例为单发病灶,3例为多发病灶融合,肝内胆管扩张35例,肝内胆管结石31例,肝叶变形萎缩33例,局部肝包膜凹陷29例.结论 周围型肝内胆管细胞癌的直接CT征象是延迟强化的肝内肿块,缓慢上升-平台型时间-曲线是其特征强化规律,病灶周围胆管扩张和包膜凹陷是其重要的间接征象.     

男性HBV感染及不同标志物模式对常规精液参数和精浆生化指标的影响

目的 探讨男性乙型肝炎病毒(HBV)感染及不同标志物模式对常规精液参数和精浆生化指标的影响。方法 选取2019年1月至2021年6月在广州市番禺区妇幼保健院生殖医学科接受第一次宫腔内人工授精(IUI)治疗的男性患者557例,根据患者血清HBsAg是否阳性分为HBV感染组(n=105)和未感染组(n=452)。比较两组间的精液常规参数和精浆生化指标的差异。再根据乙肝五项检测分为12个标志物模式组,乙肝五项均为阴性或仅HBsAb阳性设为对照组,比较病例数大于10例的7个模式组与对照组间上述指标的差异。结果 HBV感染组与未感染组间的精液量、精子浓度、前向运动精子百分率、前向运动精子总数和正常精子形态百分率比较差异均无统计学意义(P>0.05);HBV感染组的顶体酶活性和精浆锌含量明显低于未感染组,差异均有统计学意义(P<0.05),而两组间的中性α-葡糖苷酶含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同标志物模式分析中,模式6和9组的精子浓度高于对照组,模式2和9组的前向运动精子总数高于对照组,模式7组的精子正常形态百分率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05...     

一种高效的β地中海贫血CD17（A>T）点突变293T细胞系的建立

目的 建立一种高效构建β-地中海贫血CD17（A>T）点突变基因型HEK293T细胞系的方法。 方法 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑技术,即无痕基因组编辑（consecutive re-Guide or re-Cas steps to erase CRISPR/Cas-blocked targets, CORRECT）,通过电转染CRISPR/Cas9质粒诱导HEK293T细胞HBB基因切割,同时以引入有CD17（A>T）点突变和同义突变碱基（G>T）的单链寡核苷酸（single-stranded oligo DNA nucleotides, ssODNs）作为同源模板进行重组,经单克隆筛选、测序验证获得β-珠蛋白基因（HBB）点突变CD17（A>T）基因型HEK293T细胞系。 结果 利用“CORRECT”技术成功获得一株β-地贫CD17（A>T）基因型点突变的HEK293T细胞系,同义突变的引入减少Cas9蛋白对靶点不准确的再编辑,提高单碱基突变效率。 结论 通过“CORRECT”技术可以高效获得点突变的293T细胞系,对单碱基突变疾病模型的细胞系及动物模型的建立具有重要意义。     

建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系

【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测（PGT）胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层（XF-HFF）与成分确定的培养基（CDM）构建的无动物源性培养体系进行了评估。在该培养体系中,利用染色体平衡易位患者PGT来源的废弃胚胎建立一个新的人胚干细胞（hESC）细胞系。【结果】新建立的人胚胎干细胞系在无动物源性培养系统中可长期培养传代（>45个代次）。核型分析显示,在传代45代次后,新建立的人胚胎干细胞仍保持一致的核型。XF-HFF/CDM中的hESC仍保持多能性。通过荧光免疫染色检测到SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1、TRA-1-60、TRA-1-81等多能标志物的表达;RT-PCR分析显示,在XF-HFF/CDM培养体系上生长的hESC中存在干细胞标记。小鼠体内实验也证实了hESC在体内维持其多能性。【结论】本研究建立了PGT来源的人胚胎干细胞系,为进一步建立携带遗传疾病基因的hESC系并为临床研究和治疗提供疾病模型打下了基础。     

Nestin-GFP转基因小鼠睾丸中P75NTR表达的研究

目的:观察小鼠睾丸中的p75神经营养因子受体(P75NTR)的表达规律,并探讨其与巢蛋白(nestin)之间的关系。方法:通过免疫荧光技术观察出生后第5天Nestin-GFP转基因小鼠睾丸组织中的P75NTR和巢蛋白的表达位置,并采用实时荧光定量PCR和流式细胞分选方法检测P75NTR在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达量;对分选得到的P75NTR阳性细胞在神经干细胞的培养液中进行培养,通过定向分化技术观察其神经分化能力。结果:免疫荧光染色结果显示P75NTR和巢蛋白定位表达于睾丸间质细胞。实时荧光定量PCR和流式细胞分选结果显示,P75NTR在出生第14天小鼠睾丸组织中出现表达高峰。出生后第5、14、30天小鼠睾丸中P75NTR阳性百分率分别为(2.88±0.52)%、(9.54±1.81)%、(2.63±0.43)%,分选得到的P75NTR阳性细胞也共定位表达巢蛋白和P75NTR,并且具有神经分化能力。结论:睾丸组织中P75NTR和巢蛋白共定位表达于睾丸间质细胞,该类P75NTR阳性细胞具有神经分化能力,推测其起源于神经脊。     

单胚胎移植临床结局分析

【目的】探讨辅助生殖领域单胚胎移植（SET）的应用前景。【方法】回顾性分析我院生殖中心近两年进行SET的5130例新鲜与冷冻移植周期资料。对新鲜、冷冻周期分别进行比较,并分成选择性和被迫性SET亚组,对比患者的不同胚胎类型、不同年龄段在新鲜与冷冻周期情况下的临床妊娠结局。【结果】在非植入前遗传学检测（PGT）选择性SET周期中,35岁前移植第3天胚胎（D3）和第6天胚胎（D6）的临床妊娠率高达30%,第5天胚胎（D5）的临床妊娠率可高达50%;在PGT周期,小于42岁的患者临床妊娠率可达45%,特别是D5种植率在小于40岁的患者中各年龄段均可接近60%。随着年龄增加,SET妊娠率降低。在非PGT周期,D3胚胎在选择性、被迫性新鲜及冷冻周期各组间的临床妊娠率差异有统计学意义（P<0.001）,整体为选择性移植比被迫性移植临床妊娠率高。在D5、D6冷冻移植周期,选择性和被迫性组的临床妊娠率差异无统计学意义（P=0.074和P=0.596）;PGT周期中,D5胚胎选择性移植组较被迫性移植组临床妊娠率高,差异有统计学意义（P=0.011）。而D6胚胎选择性与被迫性移植组的临床妊娠率比较差异无统计学意义（P=0.979）。非PGT周期各类型的胚胎移植在不同年龄段的临床妊娠率差异均有统计学意义（P<0.001）,总体上被迫性D3和D6移植组的临床妊娠率最低。PGT周期在小于40岁患者的各年龄段中,选择性D5胚胎移植组的临床妊娠率均高于D6组,每组间比较差异均有统计学意义（P<0.001）。【结论】临床上SET的临床妊娠情况良好。为避免由多胎引起的围产期并发症,临床医生及患者可以积极推进并选择SET。     

对单个卵子不同授精方式的妊娠结局分析

目的探讨常规体外受精（IVF）和单精子卵胞浆内显微注射（ICSI）两种不同授精方式对仅获得单个卵子周期的临床结局分析。方法回顾性分析接受治疗并仅获得单个卵子的525对不孕夫妇的777个周期的病例资料。根据精液质量分为3组：IVF组（563个周期）,严重男性因素SMF-ICSI组（151个周期）,非严重男性因素NSMF-ICSI组（63个周期）。比较各组间正常受精率、可利用胚胎率、优质胚胎率、每周期临床妊娠率。结果IVF组、SMF-ICSI组和NSMF-ICSI组的正常受精率分别为70.3%、81.4%和80.7%,差异有统计学意义（P<0.05）;可利用胚胎率分别为81.6%、84.8%和87.0%;优质胚胎率分别为42.2%、53.3%和34.8%;每周期临床妊娠率分别为19.8%、12.5%和11.1%;可利用胚胎率、优质胚胎率和每周期临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对每周期只获得单个卵子的患者应严格根据男方精液质量及过往病因选择授精方式。     

老年人脑出血的临床特点与CT42例分析

老年人脑出血的临床特点与ＣＴ４２例分析张文生蔡炳福建省霞浦县医院（３５５１００）我院自１９９５年５月～１９９７年５月共收治经ＣＴ扫描证实脑出血７３例，其中６０岁以上４２例（老年组），５９岁以下３１例（非老年组），现报告如下：１临床资料１．１一般资料老...     

人卵泡壁层颗粒细胞源性非整合诱导多能干细胞的制备

目的探索将卵泡液中壁层颗粒细胞诱导为非整合的诱导多能干细胞(iPS细胞),并检测其颗粒细胞方向的分化能力。方法在取卵的操作过程中,收集废弃的壁层颗粒细胞,在颗粒细胞培养至第4天时,加入iPS仙台病毒,经过20余天的维持,挑取iPS细胞克隆,并扩增培养。对其多能基因表达情况、外源基因整合情况、自然分化能力、颗粒细胞定向分化能力进行鉴定,并与皮肤细胞来源的iPSC系进行平行分化能力比较。结果成功建立了壁层颗粒细胞来源的iPS细胞系,其通过了类似胚胎干细胞的多能性检测及体外三胚层的分化能力检测,尤其在定向分化为颗粒细胞时,分化出了大量FOXL2、CYP19A1和FSHR阳性的细胞,经ELISA试剂盒检测,发现该分化细胞可以分泌AMH并且能够将雄激素转化成雌激素;且颗粒细胞源iPS系较皮肤细胞源的iPS系在颗粒细胞方向的分化效率更高。结论提供了一种从人颗粒细胞建立iPSC的方法,并验证了其颗粒细胞方向分化的优势。该系统不仅可以用于建立生殖不孕疾病的iPSC库,还为颗粒细胞功能障碍不孕的患者提供了一种细胞治疗的新思路。