新西兰兔再生障碍性贫血模型的建立

目的 正交设计筛选苯和环磷酰胺联合使用建立新西兰兔再生障碍性贫血模型的适宜剂量.方法 新西兰兔,采用正交试验设计,应用L9(34)正交表对苯的剂量(A)、环磷酰胺的剂量(B)、苯的注射次数(C)、环磷酰胺的注射次数(D)四个因素及它们各自不同的3个水平在建立新西兰兔再生障碍性贫血模型,并最终从9个实验组中优选出建模的较优方案.给药方法为先背部皮下注射苯,隔日1次,再耳缘静脉注射环磷酰胺,每天注射,均按照规定次数注射.每6d检测1次血常规,于建模前、建模后36d取小段股骨进行骨髓组织学检查,观察变化.结果 将9组白细胞、红细胞、血小板计数进行对比分析,4~9组新西兰兔再障模型建立成功,第7、8、9组与其他组日均下降速率之差有统计学意义(P<0.05),其中第7组骨髓切片显示骨髓增生低下,造血组织减少,巨核细胞减少或消失,脂肪细胞增多.随访发现,第7组骨髓抑制一直存在,与该病临床特点相符合.结论 第7组采用苯1.5 mL/kg,8次/d,环磷酰胺10 mg/kg,4次/d,这一组合剂量建立的新西兰兔AA模型建模周期短、且模型稳定,是一种可广泛应用于动物实验的建模方法.     

低强度聚焦超声促进SD大鼠慢性骨骼肌损伤修复

目的：探讨低强度聚焦超声（low intensity focused ultrasound,LIFU）对大鼠慢性骨骼肌损伤的修复作用。方法：用重力打击器构建大鼠慢性骨骼肌损伤模型,构建成功后模型分为超声组和对照组,超声组采用LIFU每天1次,连续辐照患处14 d,对照组假治疗。2组分别于治疗第3、10、21天取损伤区域组织,采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色法观察组织变化,免疫组化定量生肌决定因子（Myf-5）和辅肌动蛋白（α-actinin）表达强度并使用图像分析软件进行平均光密度（average opti－cal density,AOD）分析,实时荧光定量多聚酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析肌分化因子（MyoD）mRNA表达水平,对组织修复情况进行评价。结果：HE染色图片提示超声组坏死肌纤维逐渐被新生排列整齐肌纤维取代;对照组纤维组织形成,炎症细胞浸润,肌纤维萎缩明显。治疗开始的第3、10、21天,超声组α-actinin（3 d=0.270±0.026,t=2.963,P=0.018;10 d=0.244±0.011,t=2.865,P=0.027;21 d=0.222±0.031,t=1.073,P=0.317）、Myf-5（3 d=0.291±0.050,t=2.691,P=0.027;10 d=0.246±0.015,t=2.726,P=0.032;21 d=0.166±0.021,t=0.369,P=0.722）、MyoD mRNA（3 d=5.613±0.379,t=4.679,P=0.002;10 d=3.276±0.261,t=2.377,P=0.048;21 d=1.810±0.200,t=0.634,P=0.546）的表达均高于对照组α-actinin（3 d=0.234±0.008;10 d=0.214±0.020;21 d=0.203±0.023）、Myf-5（3 d=0.225±0.023;10 d=0.211±0.025;21 d=0.161±0.016）、MyoD mRNA（3 d=4.465±0.397;10 d=2.807±0.356;21 d=1.712±0.280）,且在第3、10天差异有统计学意义（P<0.05）。结论：LIFU能促进大鼠慢性骨骼肌损伤再生修复,改善组织结构。     

不同声强低强度脉冲超声对SD大鼠骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨不同声强低强度脉冲超声(LIPUS)辐照对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外迁移的影响。方法将BMSCs分为空白对照组、30mW/cm~2组、60mW/cm~2组及90mW/cm~2组,对空白对照组仅行LIPUS假辐照操作,而对其余3组以相应声强进行辐照。以细胞划痕实验分析LIPUS对划痕愈合的促进作用,并通过MTT活性检测排除细胞增殖能力的干扰。采用transwell迁移实验评价各组BMSCs的迁移能力。通过FITC-鬼笔环肽染色检测F-肌动蛋白(Factin)表达结果 LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后24h及48h,30mW/cm~2组、60mW/cm~2组、90mW/cm~2组及空白对照组间划痕面积差异均有统计学意义(F=26.559、106.110,P均0.001),且空白对照组划痕面积[辐照后24h:(0.93±0.26)mm~2,辐照后48h:(0.70±0.11)mm~2]最大,30mW/cm~2组[辐照后24h:(0.47±0.21)mm~2,辐照后48h:(0.19±0.10)mm~2]最小;而辐照后即刻各组间划痕面积差异无统计学意义(F=2.921,P=0.063)。LIPUS辐照(空白对照组假辐照)后即刻、24h及48h各组间吸光度差异均无统计学意义(F=1.616、0.720、1.408,P=0.196、0.544、0.378)。各组间穿过transwell小室上室的BMSCs细胞计数差异有统计学意义(F=43.145,P0.001),且30 mW/cm~2组细胞计数[(212.53±35.32)个]最大,空白对照组[(89.53±19.27)个]最小。F-actin染色显示,LIPUS辐照后BMSCs微丝增粗变长,数量增多。各组间相对荧光强度差异有统计学意义(F=64.350,P0.001),且30 mW/cm~2组相对荧光强度(125.43±17.43)最大,空白对照组(51.94±12.76)最小。结论 LIPUS可促进BMSCs体外迁移,声强为30mW/cm~2时促进效应最明显。