双阻滞位点特异性PCR鉴别铁皮石斛及其近缘物种

建立一种快速、准确鉴别铁皮石斛加工制品的方法。该研究通过对Gen Bank数据库收录的铁皮石斛及其同属近缘物种的ITS序列进行对比分析,根据变异位点设计双阻滞位点特异性鉴别引物,并优化PCR条件,对铁皮石斛及其69种近缘种共362个样品进行扩增和检测。结果显示,在退火温度为60℃的同一PCR反应中,铁皮石斛均扩增出397 bp条带,而其他69种近缘物种均无条带,且该方法灵敏度高,检出限可达0.03 mg·L~(-1)。该文所建立的位点特异性PCR方法可实现铁皮石斛的准确鉴别,具有操作简便、稳定可靠、应用范围广的优点。     

滇皖产区铁皮石斛居群SSR分子身份证的构建

目的:建立滇皖产区铁皮石斛SSR指纹图谱,并构建不同居群的SSR分子身份证。方法:使用生物信息学方法分析铁皮石斛(Dendrobium officinale)全基因组SSR(Simple sequence repeat)序列,获得SSR位点,使用Primer Premier 5.0软件设计引物并进行PCR扩增,选择高多态性引物进行遗传多样性分析并建立SSR指纹图谱代码,使用二维码生成器表述铁皮石斛居群的分子身份证。结果:共获得91 653个SSR位点,平均分布距离为15.44 kb。据此开发了75对SSR引物,筛选出32对多态性丰富、带型清晰的引物,对11个滇、皖产区的铁皮石斛居群进行遗传多样性分析,共得到117个多态信息位点,平均每个SSR引物多态信息含量(PIC)为0.62,变化范围为0.22~0.80;铁皮石斛不同居群进行亲缘关系聚类表明11个铁皮石斛居群可分为三支,与种质来源分布相一致。筛选出4对多态性高、带型清晰易于统计的引物组合,建立不同居群铁皮石斛的SSR指纹图谱库和不同居群的分子身份证。结论:SSR分子身份证可为今后铁皮石斛的品种鉴别提供准确、可靠的方法和溯源信息平台。     

基于“形态+分子”方法对疑似灵芝属样品的基原探究

目的:为疑似"灵芝"属样品基原探究提供性状和分子鉴定证据。方法:在基于传统形态特征初步鉴定基础上,对疑似灵芝属两样品ZZ和SS的rDNA-ITS区序列进行PCR扩增,经克隆测序后,与GenBank数据库中序列进行BlastN比对,样品及最相似物种ITS序列对齐后使用MEGA 6.0软件构建系统发育树。结果:测序得到样品ZZ和SS的rDNA-ITS区序列分别为752、753个碱基,与已发表极硬红皮孔菌(Pyrrhoderma adamantinum)rDNAITS区序列相似度达99.0%,并在系统发育树中与极硬红皮孔菌聚为一支,而与紫芝、树舌灵芝遗传距离较远。结合样品ZZ和SS的子实体形态和扫描电镜观察鉴定结果判断其为极硬红皮孔菌。结论:基于rDNA-ITS区序列分析和系统发育树构建药用真菌分子鉴定方法,为疑似样品基原鉴定提供理论依据和技术支持。     

可降解非病毒基因载体PEG-b-(PG-g-PEI)的合成与表征

目的结合重组低分子量PEI 和PEG结构修饰两种手段合成出新型可生物降解的非病毒基因载体聚乙二醇-b-(聚谷氨
酸-g-聚乙烯亚胺)。方法用相对分子质量600 的聚乙烯亚胺氨解嵌段聚合物PEG-b-PBLG,合成非病毒基因载体聚乙二
醇-b-(聚谷氨酸-g-聚乙烯亚胺);利用核磁共振氢谱、凝胶渗透色谱、激光粒度分析仪、zeta电位仪和凝胶电泳对载体及其与DNA
复合物进行了表征,并通过体外细胞实验考察了载体的细胞毒性与转染效率。结果我们成功合成出窄分布的非病毒基因载体
聚乙二醇-b-(聚谷氨酸-g-聚乙烯亚胺);凝胶电泳测定结果表明当N/P比大于5时载体能很好地包裹DNA;载体与DNA形成的
复合物粒径为120 nm,zeta电位25 mV;通过MTT实验和体外质粒转染实验显示出载体在测量范围内具有极低的细胞毒性和
很高的转染效率。结论聚合物聚乙二醇-b-(聚谷氨酸-g-聚乙烯亚胺)有望作为非病毒基因传递载体。