金丝桃苷对离体缺氧/缺糖再灌注脑损伤的保护作用

 目的研究金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤的保护作用。方法小鼠离体脑片缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的模型上,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物formazan定量测定脑片活性,同时计数单位面积脑片皮层和纹状体区的存活神经元。新生大鼠原代培养神经元OGD/RP损伤后测定乳酸脱氢酶(LDH)释放和噻唑蓝(MTT)液比色吸光度,评价神经元活性。观察不同浓度的金丝桃苷对于离体脑损伤的保护作用。结果金丝桃苷可有效减轻OGD/RP对脑片的缺血性损伤,并对于OGD/RP原代神经元具有显著的保护作用。结论金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤具有明显的保护作用,此作用可能与其抗自由基生成、抑制Ca²⁺内流及脂质过氧化物形成有关。     

黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的在离体水平,探讨黄芩苷对缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的脑片及神经元损伤的保护作用及机制。方法小鼠离体脑片OGD/RP模型中,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物白评价脑片活性;原代培养大鼠皮层神经元OGD/RP模型中,以噻唑蓝(MTT)还原和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定神经元活性变化,用2,7-二氯荧光素二乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内自由基水平。观察不同时间给予黄芩苷对损伤的保护作用。结果在脑片,全程给药和OGD时给予黄芩苷0.01～1μmol·L^-1,再灌注时给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1,可显著减轻损伤。在神经元,全程给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1可减轻神经元损伤,并降低神经元内自由基水平升高。结论黄芩苷对OGD/RP损伤有浓度依赖性保护作用,再灌注时给药亦有效,其作用至少部分与抗自由基有关。     

组胺对N-甲基-D-天门冬氨酸诱发的神经元损伤的改善作用

目的:在细胞水平探讨组胺对N-甲基-D-天门冬氨酸 (NMDA) 诱发的神经元损伤的改善作用及初步机制.方法:采用原代新生大鼠皮层培养的方法,以形态学和二苯基四氮唑溴盐染色为指标观察神经元的损伤和药物的改善作用.结果:组胺在10-4、10-6、10-7、10-8 mol/L浓度时能显著改善NMDA 50 μmol/L作用3 h引起的神经元死亡,并在10-4和10-7 mol/L浓度时分别呈现保护双峰.组胺10-7 mol/L的改善作用只被组胺H2受体西米替丁逆转,而组胺10-4 mol/L的改善作用只被H1受体吡拉明逆转.结论:组胺能减弱NMDA诱发的神经元兴奋性死亡,其保护作用在低浓度时可能与H2受体有关,在高浓度时可能与H1受体有关.     

依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的内环境影响因素

目的：观察内环境因素（pH和甘氨酸及离子浓度）对依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的影响。方法：大鼠原代培养皮质神经元，在不同的实验溶液（模拟缺血后脑内环境的变化）以缺氧缺糖（oxygen-glucosed eprivation，OGD）3h和再灌12h诱导皮质神经元损伤，以噻唑蓝（MTT）还原反应和乳酸脱氢酶（LDH）释放观察损伤变化。观察不同实验溶液对抗脑缺血药物依达拉奉抗缺血性损伤作用的影响。结果：在弱碱性（pH7．8）或含甘氨酸（10μmol／L）的实验溶液中，OGD损伤加重；在弱酸性（pH6．5）或高Mg^2＋（1．8mmol／L）条件下，OGD损伤减轻。依达拉奉（1μmol／L）能逆转在pH6．1、7．4、7．8或含甘氨酸溶液中OGD损伤；而对pH6．5、高Mg^2＋或低Ca^2＋溶液中的OGD损伤未显示保护作用。结论：内环境因素改变可影响缺血性损伤程度和依达拉奉抗损伤作用。     

HPLC测定己酮可可碱氯化钠注射液中主药及有关物质

目的　建立己酮可可碱氯化钠注射液中己酮可可碱的测定方法。方法　色谱柱用HypersilBDSC18柱 (15 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ;流动相为甲醇 -水 (5 5∶4 5 ) ;检测波长 2 74nm ;流速 1.0ml·min-1;进样量 2 0 μl。结果　己酮可可碱在浓度 1.0～ 6 0μg .ml-1范围内线性关系良好 (r=0 .9999) ,平均回收率为 99.8% ,RSD =0 .4 % ,有关物质限量在 0 .75 %～ 2 .5 %内 ,自身对照主成分峰面积与浓度呈良好的线性关系。结论　所用方法专属性强 ,且简便、灵敏、准确。     

乙酰半胱氨酸对四氯化碳诱导的原代培养大鼠肝细胞损伤的保护作用

目的观察乙酰半胱氨酸（NAC）对四氯化碳（CCl4）诱导的原代培养大鼠肝细胞损伤的作用。方法在24孔细胞培养板上,用CCl4诱导原代培养肝细胞损伤,分别加入不同浓度的NAC,培养20 h后,测定上清液谷草转移酶（AST）活性,并MTT法检测细胞活力。结果 NAC在100μmol.L-1内,对正常培养的大鼠肝细胞没有影响;在4～100μmol.L-1内,NAC能剂量依赖性地抑制CCl4诱导的肝细胞活性的降低,EC50约为20μmol.L-1;当浓度为100μmol.L-1时,可以逆转CCl4诱导的肝损伤,使肝细胞释放AST降到接近正常水平,并明显改善肝细胞形态学变化。结论 NAC对CCl4诱导的肝损伤具有保护作用。     

神经保护药和抗炎药对小鼠脑片缺氧缺糖/再灌损伤的作用

 目的 在离体脑片缺血性损伤模型上，建立筛选与评价神经保护药和抗炎药的方法。方法 小鼠离体脑片缺氧缺糖／再灌诱导（OGD/RP）的模型上，以2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）产物formazan定量测定评价脑片活性，观察不同药物离体给药或整体预给药7 d对脑片损伤的保护作用。结果 抗氧化剂依达拉奉、钙拮抗剂尼莫地平及神经生长因子可显著减轻脑片的缺血性损伤；半胱氨酰白三烯受体拮抗剂ONO-1078和孟鲁司特、糖皮质激素地塞米松及中枢抗炎药米诺环素无明显作用。整体给予地塞米松（0.2，2,5 mg·kg^-1）能减轻脑片对缺血损伤的程度；孟鲁司特仅大剂量给药（15 mg·kg^-1）有增强作用。结论 离体小鼠脑片TTC产物formazan定量分析评价药物抗缺血性损伤作用的方法，可用于初筛具有直接神经保护作用药物。     

评价小鼠脑片缺血性损伤及药物保护作用定量方法的改进

目的：通过改进和完善脑片孵育装置、脑片缺血性损伤的定量指标，建立一种简单、准确评价小鼠脑片缺血性损伤及药物神经保护作用的新方法。方法：设计和制作脑片孵育装置，并验证其适用性。以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品，并作分离、纯化和鉴定。以缺氧缺糖(OGD)方法诱导小鼠脑片损伤，用分光光度法在490nm处测量皮质和纹状体formazan量，并观察依达拉奉和ONO—1078的保护作用。结果：脑片孵育装置具有良好的平行性和可操作性。获得了纯度为99．3％的formazan对照品，在0．05～1mg／ml间与490nm的吸收度有良好的线性关系(r=0．9997)。随OGD时间延长，脑片皮质和纹状体formazan量逐渐减少；依达拉奉对此有显著保护作用，而ONO—1078无效。结论：脑片孵育新装置及formazan定量方法效率高、定量准确、简单易行，可用于缺血性脑损伤保护药物的筛选。     

小鼠脑片Formazan定量测量方法评价缺血性损伤及神经保护作用

目的　建立一种定量测量 2 ,3,5 三苯基四氮唑(TTC)红色还原产物formazan的方法 ,用于评估离体脑片缺血性损伤以及依达拉奉和ONO 10 78的神经保护作用。方法　以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品 ,并进行分离、纯化和鉴定。小鼠脑片以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导损伤 ,用分光光度法在 4 90nm处测量皮质和纹状体formazan合成量。依达拉奉和ONO 10 78加入培养液 ,观察其神经保护作用。结果　合成并纯化了formazan标准品 ,其纯度为 0 993,线性测量范围在 0 0 5～ 1g·L-1。OGD减少formazan合成 ,与处理时间有依赖性。依达拉奉 (0 0 1～ 1μmol·L-1)抑制OGD诱导的formazan合成减少 ,而ONO 10 78无作用。结论　定量测量formazan是一种评价离体脑片损伤及药物神经保护作用的有用方法。