未知功能基因JAZF1过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的 观察JAZF1基因(Juxtaposed with another zincfinger gene 1)过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢相关基因的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)法检测JAZF1 mRNA在健康C57BL/6J小鼠多种组织表达分布情况;构建JAZF1真核表达载体并瞬时转染3T3-L1细胞,RT-QPCR法检测JAZF1、糖脂代谢相关基因mRNA的表达;用Western印迹法测定各组细胞JAZF1蛋白水平;油红O染色比色法检测细胞内脂质积聚的变化.结果 转染48 h后,JAZF1转染组脂肪细胞中,JAZF1 mRNA及蛋白表达明显高于阴性对照和空载组,激素敏感脂肪酶(HSL)mRNA表达水平明显增加(P<0.05),脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA相对表达量明显降低(均P<0.01),脂肪细胞甘油三酯酶(ATGL)、葡萄糖转运子1(GLUT1)、GLUT4 mRNA表达并无明显改变;油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显降低(P<0.05).结论 JAZFl在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中起着一定作用.3T3-L1细胞过表达JAZF1可减少脂质合成、增加脂解,并可明显改善脂质积聚,可能是肥胖和糖尿病治疗的一个潜在靶点.     

NPM1基因突变调控THP-1细胞体外增殖和侵袭及其机制

目的探讨NPM1基因突变对THP．1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制。方法将THP．1细胞分为THP-1．mA组、空载体转染组和未处理组,THP-1．mA组使用携带人NPMl-mA的重组质粒pEGFPCI．NPMl．mA转染THP-1细胞,建立稳定表达NPM1．mA的白血病细胞系（THP-1-mA）;空载体转染组使用空载体质粒pEGFPCI转染THP-1细胞;未处理组不进行质粒转染。采用反转录PCR、免疫细胞化学检测3组细胞NPMl．mA基因和蛋白的表达;使用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布;细胞体外侵袭实验观察细胞体外侵袭能力;实时荧光定量PCR检测血管生成素1（Ang-1）、Ang．2mRNA的表达。结果成功构建了稳定表达NPMl．mA的白血病细胞株。与空载体转染组和未处理组比较,稳定表达NPMl。mA蛋白的THP-1．mA细胞体外增殖能力明显增强,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加（均P〈0．01）。与空载体转染组和未处理组比较,细胞体外侵袭实验显示THP．1-mA组细胞体外侵袭能力增强,实时荧光定量PCR显示THP．1．mA组细胞Ang．1mRNA表达增高（均P〈0．01）。结论NPMl突变基因的表达能够促进THP-1细胞体外增殖和侵袭,而Ang-1可能在其中发挥重要作用。     

T2DM患者空腹血浆视黄醛结合蛋白-4水平及对罗格列酮治疗的反应

目的：测定2型糖尿病（T2DM）患者空腹血浆视黄醛结合蛋白-4（RBP-4）浓度,并观察罗格列酮对血浆RBP-4的影响．方法：34例单用二甲双胍降糖治疗效果欠佳的T2DM患者（T2DM组）加用罗格列酮4mg／d治疗12wk．30例新近诊断未使用任何降糖药物的初发T2DM患者（nT2DM组）．检测nT2DM组及T2DM组治疗前后的体质量指数（BMI）、腰臀比（WHR）、血压、体脂含量（FA）（％）等．采用放免法测定血浆RBP-4水平和胰岛素水平;酶法检测血糖和血脂;高压液相法检测糖基化血红蛋白（HbAlc）,计算胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）和分泌指数（HOMA—IS）,评价各个代谢指标与血浆RBP-4的相关性．结果：T2DM组RBP-4水平高于nT2DM组[（20．40±0．99）vs（16．94±0．78）mg／L,P〈0．01]．罗格列酮治疗后,患者游离脂肪酸（FFA）、HbAlc、空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）、HOMA—IR（均P〈0．01）,空腹胰岛素（Fins）显著降低（P〈0．05）．但RBP-4水平变化差异无统计学意义．空腹血浆RBP-4水平与性别（r=0．292,P=0．019）、三酰甘油（TG）（r=0．287,P=0．021）和2 h Pins（r=0．329,P=0．008）显著相关．多元逐步回归分析结果表明,2 h Pins是影响血浆RBP-4水平的独立相关因素．结论：初发T2DM患者RBP-4水平明显低于血糖控制不佳的T2DM患者,罗格列酮治疗可以降低血糖控制不佳T2DM患者血糖,改善胰岛素敏感性,但未明显改变血浆RBP-4水平．     

高脂喂养apoE~(-/-)小鼠组织成纤维细胞生长因子21及其受体的改变

目的 探讨在环境和遗传因素共同诱导的胰岛素抵抗状态下组织成纤维细胞生长因子21(FGF-21)及其受体(FGFR)的变化.方法 雄性apoE~(-/-)小鼠,随机分为普通喂养组(NF组,n=20)和高脂喂养组(HF组,n=20),喂养16周.以3-[~3H]-葡萄糖为示踪剂的扩展胰岛素钳夹技术评价小鼠胰岛素敏感性和糖代谢变化.用实时荧光定量PCR法检测肝脏和脂肪组织FGF-21、FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4以及β-klotho mRNA表达,用Western印迹法测定血浆和组织FGF-21蛋白水平.结果 HF组小鼠空腹血糖、血浆胰岛素、甘油三酯、游离脂肪酸和胆固醇水平明显升高(均P<0.01).在钳夹稳态时,HF组血浆胰岛素水平明显高于NF组(P<0.01),HF组葡萄糖输注率(GIR)明显低于NF组(P<0.01).在钳夹结束时,HF组葡萄糖清除率(G_(Rd))明显低于NF组(P<0.01).钳夹稳态期,NF和HF组肝糖输出率(HGP)分别被抑制约70%和51%(均P<0.01).HF组肝和脂肪组织FGF-21和β-klotho mRNA水平均明显高于NF组(均P<0.01).HF组肝和脂肪组织FGFR1和FGFR3 mRNA的表达明显较NF组显著增高(P<0.01和P<0.05).FGFR4 mRNA水平在HF组肝组织中的表达明显高于NF组(P<0.05).HF组血浆FGF-21蛋白水平明显高于NF组(P<0.01),肝和脂肪组织FGF-21蛋白水平也显著升高(均P<0.05).结论 高脂喂养apoE~(-/-)小鼠FGF-21、β-Klotho及FGFR1和FGFR3水平显著升高,它们可能是FGF-21调节糖脂代谢的主要作用靶点.     

JAZF1基因过表达对鼠肝细胞糖脂代谢相关基因表达的影响

目的探讨JAZF1过表达对鼠肝细胞IAR-20及Hepa1-6糖脂代谢相关基因的影响。方法克隆鼠JAZF1编码区并构建pIRES2-EGFP-JAZF1表达载体,利用脂质体法将目的基因转染到鼠肝细胞IAR-20及Hepa1-6中,采用实时荧光定量PCR测定各处理组JAZF1 mRNA表达情况,以及糖脂代谢相关基因SREBP1、AOC、FAS、HSL、PPARa、ATGL、G1uT-1、G1uT-4和细胞因子FGF-21mRNA的变化情况。结果JAZFl基因在鼠肝细胞中过表达导致脂代谢基因SREBP1,ACC,FAS表达降低（P〈0．01）,PPARa和HSL表达增加（P〈0．01）,对AXG-L无影响（P〉0．05）,使糖转运相关基因GluT-1表达增加（P〈0．01）,GluT-4无显著变化（P〉0．05）,对FGF-21无影响（P〉0．05）。结论JAZF1过表达可以抑制肝细胞的脂肪生成,促进脂肪分解,并可能增加基础葡萄糖转运。     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

内脂素对改善胰岛素抵抗及相关基因的作用

目的 探讨内脂素(visfatin)基因过表达对高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感件及其信号系统的影响.方法 构建大鼠内脂素基因重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-visfatin.20只雄性SD大鼠分为3组.对照组(NC组,n=5):注射0.3mg空载体pcDNA3.1(+),普通饲料组(NT组,n=7)和高脂组(HT,n=8)大鼠注射0.3mg重组质粒pcDNA3.1(+)-visfatin.在实验前(基础值)、第1次钳夹后即刻、质粒处理后3d和第2次钳夹后即刻,分别自各组大鼠颈静脉取血,分离血浆,采用Western bloting测定血浆内脂素蛋白表达.在转染前和转染后3d采用两次高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术评价大鼠胰岛素敏感性的变化,并测定大鼠空腹血浆胰岛素(FIns)、血糖(BG)、血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋闩胆同醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆同醇(LDL-C)以及葡萄糖输注率(GIR)等指标.采用斑点印迹法检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸磷酸化,采用RT-PCR法测定过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)mRNA表达水平的变化.结果 内脂素质粒注射3d后及第2次钳夹术后,NT和HT组血浆内脂素水平较注射前均升高(P<0.01).质粒注射后3d,NT、HT组大鼠TC和HDL-C均较沣射前明显降低(P<0.05).钳夹术中,NT、和HT组大鼠GIR较沣射前明显升高(P<0.01).NT和HT组大鼠肝脏和肌肉组织中IRS-1酪氨酸磷酸化水平和肝脏中PPARγ mRNA水平也较NC组均明显升高(P<0.05和P<0.01).NT组脂肪组织中PPARγ mRNA水平较NC组明显增高(P<0.01).结论 内脂素可能通过上调PPARγ mRNA水平和IRS-1酪氨酸磷酸化水平使机体胰岛素敏感性增加.     

利拉鲁肽对低脂联素血症诱导的胰岛素抵抗小鼠成纤维细胞生长因子21及其受体的影响

探讨利拉鲁肽(liraglutide)对低脂联素血症载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠糖脂代谢和成纤维细胞生长因子21( FGF-21)及其受体(FGFR)的影响。低脂联素血症加重了ApoE-/-小鼠糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗,并导致了肝脏和脂肪组织FGF-21 mRNA和蛋白表达及血浆FGF-21水平明显升高,脂肪组织FGFR1和β-klotho表达降低,肝脏FGFR 1-3和β-klotho均降低。利拉鲁肽干预在改善小鼠糖脂代谢紊乱和胰岛素敏感性的同时部分逆转了FGF-21及其受体的改变。     

肺癌肿瘤抑制因子1基因过表达对肝细胞糖脂代谢相关基因表达的影响

探讨肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因表达上调对小鼠肝癌细胞Hepal-6糖脂代谢相关基因mRNA表达的影响.结果 显示,TSLC1基因过表达降低脂代谢基因脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达(P<0.05或P<0.01),增加脂肪组织甘油三酯水解酶(ATGL)的表达(P<0.05),对激素敏感脂肪酶(HSL)、葡萄糖转运蛋白(GLUT)1和GLUT4的表达无显著影响,提示TSLC1过表达可能抑制肝细胞的脂肪生成,促进脂肪分解.

Abstract：

The effects of tumor suppressor in lung cancer-1(TSLC1)upregulation on gene expressions involved in glucose and lipid metabolism in Hepa1-6 cells were investigated.The results showed that TSLC1 overexpression decreased fatty acid synthase and acetyl CoA carboxylase expressions(P<0.05 or P<0.01),increased adipose triglyceride lipase expression(P<0.05),and did not change hormone-sensitive lipase,glucose transporter (GLUT)1,and GLUT4 expressions.These results suggest that TSLC1 overexpression may promote lipolysis and inhibit adipogenesis in liver cells.     

高脂喂养对ApoE-/-小鼠脂肪细胞因子的影响

目的 探讨高脂诱导胰岛素抵抗(IR)对ApoE-/-小鼠内脂素(Visfatin)和脂联素的影响.方法 健康雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组(NF)和高脂喂养组(HF),共喂养16 w.采用以3-H3葡萄糖为示踪剂的高胰岛素-正糖钳夹评价糖代谢变化.用实时荧光定量PCR测定肝和脂肪组织细胞因子Visfatin和脂联素mRNA表达水平,采用Western印迹法测定肝、脂肪组织及血浆Visfatin蛋白水平.结果 HF组小鼠空腹血糖、血浆胰岛素、胆固醇、游离脂肪酸、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高(均P<0.01).胰岛素钳夹术中,HF组葡萄糖输注率(GIR)明显低于NF组,肝糖生成率(HGP)明显高于NF组(均P<0.01).HF组小鼠肝脏Visfatin和脂联素mRNA表达水平以及脂肪组织Visfatin mRNA表达水平明显低于NF组(P<0.01和P<0.05);HF组血浆、肝脏和脂肪组织Visfatin蛋白表达也显著降低均(均P<0.01).结论 高脂喂养的ApoE-/-小鼠具备明显的IR基本特征,可能与脂肪细胞因子的改变有关.