奇迹束丝放线菌合成安丝菌素过程中支链氨基酸的添加效果分析

安丝菌素是一类重要的聚酮抗生素,由AP 1,AP 2,AP 3,AP 3′和 AP 4 5个组分组成,其中AP 3的活性最强,通常作为发酵的目标产物。奇迹束丝放线菌合成安丝菌素的摇瓶实验发现,添加支链氨基酸（BCAAs）可明显影响安丝菌素的产量以及组分。为了进一步验证支链氨基酸对安丝菌素生物合成的作用,选用合成培养基并在不同时段添加支链氨基酸进行发酵实验,实验结果显示,发酵48 h后加入0.5 g/L缬氨酸（Val）能使AP 3增产1倍左右;而在同一时刻添加等量的亮氨酸（Leu）和异亮氨酸（Ile）对AP 3的抑制作用较明显,产量分别下降了58.8%和83.3%,且添加Leu和Ile分别使得AP 4与AP 2组分增加。此外,添加Ile可使琥珀酸与乙酸的积累量都明显上升,而添加Val使得细胞分泌琥珀酸和乙酸明显变少,这意味着奇迹束丝放线菌代谢支链氨基酸不仅影响对聚酮途径以及侧链合成,对细胞的代谢状态也有一定影响。     

解脂耶氏酵母异源合成番茄红素的初步研究

为了探究番茄红素在解脂耶氏酵母中的生物合成,利用两个解脂耶氏酵母整合表达质粒（单拷贝质粒pINA1269和多拷贝质粒pINA1312）,将成团泛菌来源的番茄红素生物合成基因（crtE、crtB、crtI）克隆到解脂耶氏酵母营养缺陷型宿主菌Po1f中实现多基因共表达,并成功构建了异源合成番茄红素的解脂耶氏酵母工程菌株。在hp4d启动子和XPR2终止子的控制下,本实验共构建了8个能产番茄红素的解脂耶氏酵母工程菌株;同时筛选了其中5个代表性菌株（Po1f 1269IBE 1312、Po1f 1312E 1269IB、Po1f 1312B 1269IE、Po1f 1312I 1269EB、Po1f 1312IBE 1269）基于摇瓶培养进一步研究其生长特性和产物合成情况。结果表明,工程菌Po1f 1312E 1269IB的培养可以获得最高番茄红素产量,相对于细菌干重其产量约为0.9 mg/g。