ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化

目的：研究细胞外信号调节激酶5（extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5）信号通路在骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法：用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Western blot检测磷酸化ERK5（phosphorylation ERK5,p-ERK5）和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测p-ERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子（myocyte enhancer factor,MEF）2C、GATA结合蛋白4（GATA binding protein 4,GATA4）表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白４３（connexin 43,CX43）、心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）表达。结果：AdGFP与AdBMP9的转染效率达50%左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高（P＜0.01）,免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15 ?滋mol/L BIX02189可完全抑制p-ERK5的表达（P＜0.01）,且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达（P=0.000）。结论：BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。     

P38 MAPK信号通路参与BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化

 目的 探讨P38MAPK对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化的影响。方法 实验4个部分分组如下：1.BMP-13腺病毒（Ad-BMP-13）对P38MAPK的作用：Ad-BMP-13转染组、Ad-GFP转染组和C3H10空白组。Western blot检测磷酸化P38MAPK（p-P38MAPK）和总P38MAPK（t-P38MAPK）的表达变化,免疫荧光技术定位p-P38MAPK;2.P38MAPK干扰腺病毒（Ad-si-P38）对P38MAPK的作用：si-P38干扰组、si-NC干扰对照组和C3H10空白组。Western blot检测t-P38MAPK的表达;3.Ad-si-P38阻断P38MAPK后对BMP-13诱导分化的影响：si-P38+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-GFP转染组和C3H10空白组。Western blot检测cTnT和Cx43的表达,荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达;4.SB203580阻断P38MAPK后对BMP-13诱导分化的影响： DMSO+Ad-BMP-13转染组、SB203580(2、5和10μmol/L)+Ad-BMP-13转染组 。荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达。结果 BMP-13促进P38MAPK的磷酸化。Ad-si-P38可以有效降低P38MAPK表达水平。Ad-si-P38阻断P38MAPK后BMP-13诱导组cTnT、Cx43表达有明显降低（P<0.05）,GATA-4和MEF-2C的表达也有显著降低（P<0.05）。随P38MAPK特异性抑制剂SB203580浓度增加,BMP-13诱导组GATA-4和MEF-2C的表达降低（P<0.05）。结论 Ad-BMP-13可以通过激活P38MAPK信号通路来调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。     

ERK5和JNK参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化

目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,Western blot法检测加入BMP9及不同浓度ERK5特异性抑制剂BIX02189或JNK特异性抑制剂SP600125后ERK5和JNK的激活情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测BMP9诱导1周后心肌特异性基因肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA结合蛋白4(GATA4)表达;Western blot法检测经BMP9诱导3周后心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达和免疫荧光技术检测CX43、cTnT在细胞内的表达。结果在转染效率达50%左右的情况下,BMP9可过度激活ERK5和JNK,使其磷酸化水平显著增高(P0.05);BIX02189抑制ERK5激活后,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的心肌分化标志物MEF2C、GATA4、CX43、cTnT均受到显著抑制(P0.05),JNK特异性抑制剂SP600125也可抑制MEF2C、GATA4、CX43、cTnT表达,但对MEF2C及GATA4的抑制不如BIX02189显著(P0.05)。结论 ERK5和JNK的过度激活参与了BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化。     

儿科学课程思政教学改革的探索

全面推进课程思政建设,是新时期高校改革的要求,是全面提高人才培养质量的重要途径,是影响甚至决定着国家长治久安、民族复兴和国家崛起的重要举措。课程思政是在专业课程中发掘思政要素,巧妙地将思政元素与专业课程相结合,发挥专业课程的德育功能,实现思想政治教育与知识体系教育的统一。儿科学是临床医学教育的主干学科,是培养合格医生的必修课,因此,在儿科学课程中进行思政教学改革有重要意义。文章对儿科学课程思政教学改革进行探索,从更新思政教学理念、提高教师育德能力、完善教学体系、深入挖掘思政元素、优化教学设计、改进教学方法、建设儿科学课程思政案例库等方面进行研究,并对儿科学思政教学案例库进行具体举例阐述,为儿科学课程思政建设提供新思路,不断推进高校思政教学改革。     

Wnt3a联合BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化

目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达;流式细胞术检测细胞转染效率;Westernblot法、免疫荧光技术及实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测缝隙连接蛋白43(Cx43)、肌钙蛋白T(cTnT)、GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)的表达。结果经HEK293细胞扩增可得到高滴度的重组腺病毒;转染C3H10T1/2细胞3周后,Wnt3a组Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C的表达量与空白组比较无明显差异;Wnt3a联合BMP9组的Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C基因的表达量显著高于空白组、GFP组和Wnt3a组,与单独BMP9组相比无显著性差异。结论Wnt3a不能单独诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化;Wnt3a联合BMP9可诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。