A method for mouse oocyte enucleation assisted with zona pellucida dilating

<正>Objective: To study the reliability of a new enucleation method, zona pellucida Dilating (ZPD) assisted enucleation method, for mouse oocyte enucleation. Methods: In ZPD enucleation method, the zona pellucida was dilating with the help of outside pression in enucleation needle after breakthrough by needle tip and the nucleus was aspirated by the needle entering the perivitelline space for enucleation. This method was employed and was compared with three other methods in this experiment. The efficiency of enucleation of mouse oocyte was examed. Result:ZPD assisted enucleation method is better than three others at the survival rate after enucleation and the simplicity of micromanipulation. The rate of forming pronucleus of reconstructed embryo from enucleated oocyte by ZPD methods is as high as 62. 8% and the reconstructed embryo at 4-cell stage was obtained. Conclusion: ZPD assisted method is a highly efficient and simple enucleation method with the advantage of saving manipulating time and it does less damage to the oocyte.     

小鼠卵母细胞透明带膨胀辅助去核方法的研究

目的　探讨新的小鼠卵母细胞透明带膨胀(ZPD)辅助去核法的可靠性。　方法　本实验用 ZPD辅助去核法与其他常用方法对小鼠卵母细胞进行去核操作,比较其去核操作效率。　结果　ZPD辅助去核方法显著提高去核操作后卵母细胞存活率,减少去核操作时间,经卵丘颗粒细胞核移植构建重构胚胎,激活后原核形成率达 62. 8%,经体外培养可发育至 4细胞期。　结论　ZPD辅助去核方法是一种适用于小鼠卵母细胞操作的快速、简单、实用的去核方法。     

胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的　探讨胰岛素对小鼠体内外来源早期胚胎体外发育的影响。　方法　用添加不同浓度胰岛素和胰岛素+葡萄糖的CZB培养液对小鼠体内外来源胚胎进行体外培养 ,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化。　结果　小鼠 2 细胞胚胎体外培养 10 2h后 ,0 .0 5 μg/ml胰岛素添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数均显著高于其他各浓度添加组。葡萄糖加入显著提高了这一效应。添加 0 .0 5 μg/ml胰岛素和葡萄糖的CZB培养液同样显著提高体外受精 (IVF)胚胎的孵化囊胚率和囊胚细胞数。　结论　添加胰岛素和葡萄糖培养液对体内或IVF小鼠胚胎发育具有相同的促进作用。     

胚胎干细胞嵌合体小鼠的制备及其影响因素

胚胎干细胞(ES cell)嵌合体制备在发育生物学,功能基因组学等研究领域发挥越来越重要的作用。其技术本身随着干细胞生物学,体细胞核移植技术进步而不断发展。但其制备过程受ES细胞,宿主囊胚遗传背景、生存状态及嵌合体制备程序等诸多因素影响,导致ES细胞嵌合体的制备程序颇为复杂。本文将对ES细胞嵌合体小鼠制备技术的最新进展作一综述。     

小鼠早胚体外培养成分确定培养基的实验研究

目的:建立小鼠早胚体外培养成分确定培养基,并与传统培养基对小鼠早胚发育的效果进行比较?方法:用添加不同浓度聚乙烯醇(polyvinyl alcoho,PVA)和不同浓度氨基酸的CZB培养基和添加输卵管细胞?胎牛血清(fetal cattle serum, FCS)或牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)培养基培养小鼠早胚,观察它们对囊胚发育的影响?结果:含0.05 mg/ml PVA?0.5×必需氨基酸(essential amino acids solution, EAA)和0.5×非必需氨基酸(non-essential amino acids solution, NEAA)的CZB培养基可有效防止胚胎粘连,其总囊胚和扩张囊胚发育率显著高于其余各氨基酸添加组和对照组?尽管该培养基的总体发育效果低于输卵管细胞添加组,但其总囊胚发育率与BSA添加组差异无统计学意义,而且明显高于胎牛血清添加组?其扩张囊胚发育率与胎牛血清添加组差异无统计学意义?结论:小鼠早胚在含0.05 mg/ml PVA和0.5×EAA及0.5×NEAA的成分确定的CZB培养基中具有与在BSA添加培养基中相同的囊胚发育能力,且具有与在血清添加培养基中相同的扩张囊胚发育能力?     

小鼠致密化前胚胎卵裂球体外培养体系的研究

目的探索改善小鼠致密化前胚胎卵裂球体外发育能力。方法用酶消化与机械法结合分离小鼠2-、4-、8-细胞胚胎卵裂球为单个卵裂球及2/4、4/8多卵裂球胚胎,并将其装入空透明带后于兽用人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后138 h,观察透明带包裹、胚胎密度及胰岛素(Ins)、葡萄糖(Glu)添加对各卵裂球、囊胚形成率及囊胚细胞数目的影响。结果透明带包裹提高了2-细胞胚胎卵裂球来源的单腔囊胚的发育率。25/50μl胚胎密度及培养基添加Ins、Glu能显著提高2-细胞胚胎卵裂球囊胚发育率和囊胚细胞数;且对4-和8-细胞胚胎卵裂球发育具有同样的促进作用。结论采用透明带包裹、卵裂球密集培养、培养基添加Ins、Glu的方法成功建立了一种维持致密化前胚胎卵裂球体外高效发育的培养体系。其中,透明带在卵裂球发育中具维持囊胚正常形态作用,避免了多腔囊胚的形成;卵裂球密集培养和培养基添加Ins、Glu均提高囊胚形成率和(或)囊胚细胞数目。该体系有效改善了致密化前胚胎卵裂球体外发育质量。     

胚胎干细胞向生殖细胞的分化研究进展

胚胎干细胞（Embryonic Stem cell，ES cell）是从囊胚内细胞团中获得的具多能性的细胞。最近有研究报道，小鼠ES细胞在体外可分化为卵母细胞和精子。这一进展不仅为生殖细胞发生机制的研究提供一个重要的体外模型系统；而且在医学上，可为众多的不孕不育症患者带来新的希望。     

表皮生长因子与胰岛素对小鼠早胚体外发育的影响(英文)

目的:探讨表皮生长因子(epiderm algrowth factor,EGF)与胰岛素对小鼠体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎植入前发育的影响。方法:小鼠IVF胚胎培养在添加不同浓度的EGF和/或胰岛素-葡萄糖的CZB培养基中,于hCG注射后138h检测囊胚发育率及每个囊胚的细胞数目。结果:培养基中添加0.1ng/mlEGF显著提高了小鼠扩张囊胚的形成率,而囊胚的细胞数目并未增加。EGF与胰岛素-葡萄糖共同添加对小鼠IVF囊胚发育率及囊胚细胞数目并未有显著提高。结论:EGF通过刺激细胞分化,而非细胞增殖方式促进小鼠IVF胚胎的早期发育。而各自最佳浓度的EGF与胰岛素共同添加对小鼠早胚并未有协同促进作用。     

整合素β3在小鼠植入期子宫内膜中的表达

整合素是一类糖蛋白．广泛存在于细胞表面,可介导细胞与细胞外基质及细胞与细胞之间的粘连．并参与细胞内外信息传递,胚胎植入是哺乳动物生殖过程的重要环节．在此期间,子宫内膜与胚胎彼此相容．发生一系列生化及形态改变。有关植入的分子机制目前仍不清楚。近年研究表明,雌孕激素、     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。