氟诱导成骨细胞程序性坏死的实验研究

目的:探讨程序性坏死通路受体相互作用蛋白1-受体相互作用蛋白3-混合系列蛋白激酶样结构域（RIP1-RIP3-MLKL）是否参与氟诱导的成骨细胞死亡。方法:体外培养人成骨肉瘤细胞株（Saos-2细胞）,按如下分组分别处理24、48 h：对照组,氟化钠（NaF）组（5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L NaF）...     

程序性坏死在氟致人成骨细胞氧化性损伤中的作用

目的 探究程序性坏死与氟诱导的人成骨细胞氧化损伤的关系.方法 选择人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)体外培养,并用不同浓度的氟化钠(0、5、10、20、40 mg/L)干预以建立氟致成骨细胞损伤模型;利用分光光度法测定细胞中T-SOD、GSH、MDA的含量.结果 实验组中T-SOD的活力及GSH的含量均低于相同染氟条件下...     

氟对成骨细胞骨钙素和Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞骨钙素基因(OCN)和Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1)表达的影响。方法采用人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)建立体外染氟模型,即经体外细胞培养后分别以不同浓度梯度氟化钠(0.0 mg/L,5.0 mg/L,10.0 mg/L,20.0 mg/L和40.0 mg/L NaF)处理;在实验组中加入坏死凋亡抑制剂(Necrostatin-1,Nec-1)抑制细胞的程序性坏死,提取细胞的总mRNA,通过实时荧光定量RT-PCR方法,分析染氟对Saos-2细胞骨钙素基因和Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响。结果与对照组相比,经5.0 mg/L,10.0 mg/L,20.0 mg/L和40.0 mg/L NaF处理后,OCN和COL1的表达域上调,其中以(5.0~10.0 mg/L)增强的最明显。低浓度氟化钠(5.0~10.0 mg/L)可以促进OCN和COL1的基因表达,高浓度(>20.0 mg/L)氟化钠对OCN和COL1基因的相对表达量上调程度较低;加入Nec-1的组OCN和COL1基因表达域较对照组上调明显。结论在基因水平上,低浓度氟化钠(5.0~10.0 mg/L)上调人成骨细胞中OCN和COL1基因的表达;高浓度氟化钠(>20.0 mg/L)对OCN、COL1基因的相对表达量的上调程度较低。Nec-1对两基因的表达均为上调。氟诱导的程序性坏死能够影响成骨相关基因OCN和COL1的表达。     

老年糖尿病患者的临床护理干预

目的探讨老年糖尿病患者的临床护理干预应用效果。方法选取135例患者的临床资料进行回顾分析。结果观察组患者在生理上及心理上的需求得到满足,且各项指标显著优于对照组,有统计学意义（P〈0.05）;观察组老年糖尿病患者发病率及并发症发病率明显低于对照组患者,有统计学意义（P〈0.05）。结论对老年糖尿病患者进行临床护理干预可以有效地控制患者病情,降低患者并发症发生率,提高患者正常生活质量,这种临床护理干预在糖尿病临床治疗上值得推广应用。     

MicroRNA-212-3p与靶基因转化生长因子-β2基因3'UTR的关系研究*

目的?构建转化生长因子-β2（TGF-β2）基因3''UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p（miR-212-3p）与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系。方法?将TGF-β2 3''UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞（人成骨肉瘤细胞）,通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量。结果?miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最高（P?<0.05）。miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。结论?该实验成功构建了TGF-β2基因3''UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3''UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因。     

PARP-1和氟诱导成骨细胞凋亡的相关性研究

目的 探究染氟成骨细胞凋亡与多聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶-1(PARP-1)蛋白的相关性;预先探索PARP-1在成骨凋亡过程中的作用,以期在氟骨症治疗中寻找新的靶点.方法 采用人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)建立体外染氟模型,即经体外细胞培养后分别加入如下浓度梯度氟化钠(NaF,0.0,2.5,5.0,10.0,20.0和40.0 mg/L)处理;在实验组中加入适量Nec-1抑制细胞程序性坏死,再以细胞毒性试验(CCK-8法)观察染氟成骨细胞在各时间点和实验组的细胞存活率;同时利用免疫印记法(Western blot)检测各组 PARP-l[poly(ADP-ribose)polymerase-1],Bax(Bcl2-associated X protein)和Bcl-2(B-cell lymphoma-2)的蛋白含量.结果 PARP-89 kD与氟浓度呈明显正相关趋势(r24h=0.924,r48h=0.927,P＜0.01),PARP-113kD与氟浓度呈明显负相关趋势(r24h=-0.677,r48h=-0.785,P＜0.01),PARP-89 kD的转化率和氟浓度呈正相关(r=0.772,P＜0.01).氟浓度高于10 mg/L时,随氟浓度的增加Bax/Bcl-2也持续增长(r24h=0.808,r48h=0.948,PP＜0.01);氟浓度在5mg/L以下时,加入NaF组的细胞存活率始终高于空白对照组,细胞存活率与氟浓度呈明显正相关(P＜0.01);当氟浓度超过5 mg/L时,细胞存活率与氟浓度呈明显负相关(P＜0.01).结论 提示PARP-1与染氟成骨细胞的凋亡密切相关.     

脓毒症的免疫治疗进展

严重脓毒症和脓毒症休克是临床重症监护室患者的主要死亡原因之一。对于晚期脓毒症患者机体所处免疫应答状态目前有两种不同观点:一种观点认为,患者固有免疫和适应性免疫进入免疫抑制状态,患者主要死于初次感染清除障碍及继发感染;另一种观点认为,晚期患者固有免疫持续激活,患者主要死于炎症造成的器官损伤。临床用药应根据患者不同的发病阶段及病症选择最佳治疗方案。近年来针对脓毒症导致的机体免疫抑制而研发的药物(如抗PD1抗体、人重组IL-7、GM-CSF等)及针对炎症细胞因子MIF、HMGB1和C5a为靶点而研发的制剂,在动物实验及临床试验中均取得了一定的疗效,为脓毒症的靶向治疗带来了新希望。