IL—1β诱导体外培养的猪甲状腺细胞凋亡的实验研究

本文研究白细胞介素-1β(IL-1β)诱导体外培养的猪甲状腺细胞凋亡的实验，旨在探讨细胞因子对甲状腺细胞凋亡的作用。实验运用了甲状腺细胞原代培养技术和吖橙橙染色从形态学上测定细胞凋亡的发生，结果表明经IL—1β诱导后体外培养的猪甲状腺细胞有明显的凋亡特征—凋亡小体。     

高碘对大鼠甲状腺过氧化物酶和钠碘转运体基因mRNA表达的影响

目的 观察长期碘过量对大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)和钠碘转运体(NIS)mRNA表达的影响.方法 将SD大鼠按体质量随机分为对照(CI)组、高碘Ⅰ(HI Ⅰ)组、高碘Ⅱ(HIⅡ)组,分别饮用含碘5、5000、10000μg/L的自来水.6个月时取大鼠甲状腺,在光、电镜下观察甲状腺形态结构的变化;采用放射免疫法测定血清甲状腺激素水平;RT-PCR法检测甲状腺TPO、NIS mRNA的表达.结果 高碘组与CI组相比.部分甲状腺滤泡明显增大,滤泡腔内充满浓染胶质;血清TT4 、TT3水平,HI Ⅰ组[(73.82±16.48)、(1.34±0.31)nmol/L]和HIⅡ组[(70.65±11.43)、(1.15±0.39)nmol/L]与对照组[(75.68±13.99)、(1.45±0.49)nmol/L]相比呈逐渐下降趋势,但组间差异无统计学意义(F值分别为0.371、1.163,P＞0.05);TPO、NIS mRNA表达水平,组间比较差异有统计学意义(F值分别为30.863、62.675,P＜0.05).HI Ⅰ组(1.28±0.10、0.56±0.17)和HIⅡ组(1.14±0.04、0.39±0.06)均比对照组(1.39±0.08、0.71±0.13)明显降低(P＜0.05).结论 长期碘过量可造成甲状腺组织形态学改变,并且抑制甲状腺TPO、NIS mRNA表达.     

甲低功大鼠肝、肺、肾线粒体中α-磷酸甘油脱氢酶活性的变化

目的:观察甲状腺功能低下(甲低功)时大鼠肝、肺、肾线粒体中α-磷酸甘油脱氢酶(-αGPD)活性变化。方法:用0.5%N aC lO4饮水复制实验大鼠甲低功模型,分实验组(N aC lO4)和对照组(自来水)。肝、肺、肾线粒体制备按本室改进的Schne ider氏法,α-GPD测定采用L ee法。结果:实验组肝、肺、肾-αGPD活性明显低于对照组(P<0.01),甲状腺含碘量及血清T4含量明显低于对照组(P<0.01),TSH高于对照组。结论:实验组肝、肺、肾α-GPD酶活性明显下降,提示研究实验动物甲低功的同时应注意到靶器官的功能变化。     

氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞毒性效应的实验研究

目的观察NaF对原代培养猪甲状腺细胞的毒性效应，并探讨其作用机制。方法采用40mg／L，80mg／L和160mg／L NaF对原代培养猪甲状腺细胞进行染毒，48h后光镜下观察猪甲状腺细胞形态结构的变化，并采用吖啶橙染色法，在荧光显微镜下观察细胞核形态结构的变化；采用M1T法测定细胞存活率。结果中、高剂量氟组甲状腺细胞滤泡结构渐消失，细胞变小、变圆，亮度增加。甲状腺细胞核内可见致密浓染的黄绿色染色，呈圆形、月牙形，可见发泡现象及凋亡小体，且细胞的存活率显著低于对照组（P〈0.01）。结论NaF对原代培养猪甲状腺细胞具有毒性效应，并呈现一定的剂量效应关系。     

原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性与氟化钠的影响

目的:流行病学调查结果显示,地方性氟中毒与甲状腺肿的流行有很大的重叠性。探讨氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性的影响。方法:实验于2006-10/2007-05在辽宁医学院科学实验室中心完成。①实验方法:在猪死亡1h内取其甲状腺组织,去除甲状腺组织包膜及外层活性差的组织,选取中央活性高的部位,剪成1mm3组织块,用胰蛋白酶、胶原酶Ⅳ消化分离,得到含猪甲状腺细胞的消化液,沉淀悬于含体积分数为0.15的胎牛血清、1U/L牛促甲状腺素、80万U/L庆大霉素的F12培养基中,过滤,调整细胞浓度至5×105L-1,接种培养,每3d更换培养液。常规培养48h的猪甲状腺细胞接种于96孔培养板,按氟化钠终浓度不同分为0,40,80,160mg/L组。②实验评估:染毒48h后,采用噻唑蓝法测定细胞存活量,采用改良愈创木酚法测定甲状腺过氧化物酶活性。结果:①氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞存活量的影响:与0mg/L氟化钠比较,40mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量基本相似;80,160mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量均明显下降(P<0.01)。②氟化钠对甲状腺过氧化物酶活性的影响:与0mg/L氟化钠比较,40,80,160mg/L氟化钠染毒后的甲状腺过氧化物酶活性均明显下降(P<0.01),呈剂量-效应关系。结论:氟化钠对原代培养的猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性均具有抑制作用。     

猪甲状腺过氧化物酶最适pH与底物浓度的关系

目的：研究部分纯化的pTPO的最适PH及其对底物浓度的依赖性关系。方法：用差速离心、胰酶增溶，盐析及三步柱层析法得到部分纯化的pTPO。在不同[H2O2]和[KI]条件下，采用碘氧化法测定pTPO最适PH。在不同[H2O2]条件下，采用愈创木酚氧化法测定pTPO最适PH。结果：pTPO催化碘氧化的最适PH对[I^-]和[H2O2]有依赖性，当[I^-]一定，随[H2O2]升高，最适PH降低，当[H2O2]一定，随[I^-]升高，最适PH升高，而pTPO催化愈创木酚氧化的最适PH与[H2O2]无关，结论：TPO催化的碘和愈创木酚的氧化反应是经过不同电子传递途径进行的。     

大鼠脑单胺氧化酶对甲状腺激素反应的实验观察

目的 探讨甲状腺激素对甲状腺功能低下（甲低）鼠脑单胺氧化酶（MAO）活性的影响和保护作用。方法 用1%NaClO4诱发大鼠甲状腺功能低下,实验组大鼠分别注射T3、T4,观察脑MAO活性变化,同时观察生后不同时期甲低仔鼠MAO活性。结果 甲低大鼠脑MAO活性增强,20日龄仔鼠MAO活性增加的百分比高于成熟鼠。注射T4脑MAO活性恢复,脑MAO活性与血清T4呈负相关。结论 大鼠甲低时脑MAO活性变化反映了MAO在维持大脑发育和功能上起重要作用,T4对脑MAO活性有保持作用。     

甲状腺激素对仔鼠大脑皮质中NO/cGMP信号转导通路的作用

目的研究甲状腺激素对大鼠仔鼠大脑皮质中一氧化氮(NO)水平、一氧化氮合酶(NOS)活性和环鸟苷酸(cGMP)水平的影响,为探讨甲状腺激素对神经系统发育的作用机制提供实验资料。方法取怀孕3d的SD大鼠10只,随机分为实验组与对照组。实验组饮含1%高氯酸钠的自来水,对照组饮自来水,直至仔鼠产下15d(其产下的仔鼠分别为甲状腺功能低下仔鼠及正常仔鼠)。采用放射免疫法测定仔鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)和仔鼠大脑皮质cGMP水平,采用硝酸还原酶法测仔鼠大脑皮质中NO水平,采用分光光度计法测NOS活性。结果实验组仔鼠血清FT3、FT4明显低于对照组(P<0.01)。实验组仔鼠大脑皮质中NO水平、NOS活性及cGMP水平也较对照组显著降低(P<0.01)。相关分析表明:血清FT3与大脑皮质中NO、cGMP水平呈显著正相关,r值分别为0.91、0.97,P<0.01;血清FT4与大脑皮质中NO、cGMP水平也呈显著正相关,r值分别为0.90、0.96,P<0.01;大脑皮质中NO与cGMP水平呈显著正相关,r值为0.90,P<0.01。结论甲状腺激素的缺乏可降低仔鼠大脑皮质中NO、cGMP水平,NO/cGMP信号转导系统在甲状腺功能低下导致脑发育障碍中发挥重要作用。     

TBB通过WNT/β-catenin通路抑制甲状腺滤泡状癌细胞FTC133的增殖与迁移

目的 观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺滤泡状癌细胞系FTC133的CK2α、β-catemn和SURVIVIN的mRNA和蛋白表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制.方法 体外培养FTC133细胞,分对照组(DMSO组)和TBB组(终浓度为12.5、25和50 μmol/L),MTT法测定细胞增殖抑制率;划痕实验测定细胞迁移;RT-PCR和Western blot法分别检测FTC133细胞CK2α、β-catenin和SURVIVIN的mRNA和蛋白表达.结果 与对照组比较,TBB呈剂量依赖性抑制FTC133细胞的增殖和迁移.各TBB处理组CK2α mRNA表达水平明显降低(P ＜0.01);TBB组随着浓度的逐渐加大,CK2α、β-catenin和SURVIVIN蛋白表达下降(P＜0.01).结论 TBB在一定浓度范围内抑制甲状腺滤泡状癌细胞系FTC133的增殖和迁移,其机制可能与TBB下调CK2α表达进而抑制WNT/β-catemn信号通路有关.     

沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移

目的 观察沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响.方法 体外培养DU145细胞,实验分Scramble siRNA组和SIRT1siRNA组;利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞,Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能;划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响;Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达.结果 与Scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低,明显抑制DU 145细胞的迁移,降低MMP2和MMP9蛋白.结论 下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移,其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关.