多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中8内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K—B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测口内酰胺类耐药基因。结果47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和0XA51的阳性率分别为91．5％（43株）、93．6％（44株）、93．6％（44株）和95．7％（45株）。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对8内酰胺类抗生素耐药可能与8内酰胺类耐药基因的表达相关。     

肿瘤饥饿环境对肺癌细胞中HMGB1表达的调控及其HMGB1在肺癌筛查中的应用价值

目的探讨Hank′s平衡盐溶液(Hank′s balanced salt solution,HBSS)诱导的饥饿环境对肺癌细胞凋亡相关分子高迁移率组蛋白B1(HMGB1)表达的调控作用,并分析肺癌患者血清HMGB1水平在肺癌筛查中的应用价值。方法设置HBSS处理组(使用HBSS更换完全培养基后继续培养)与对照组(使用完全培养基进行培养)。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞12 h后,采用分光光度法检测肺癌细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)活性。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞0.5 h后,采用流式细胞术检测饥饿条件下肺癌细胞中氧化应激效应分子——活性氧(ROS)的表达水平。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞0、4、8和12 h后,使用western blot检测细胞内HMGB1蛋白的表达水平。采用ELISA法检测肺癌患者(n=50)血清中HMGB1的表达水平,并分析其与血清肿瘤标志物水平间的相关性。结果与对照组(0.14±0.01 U/L)相比,HBSS刺激12 h后,Lewis肺癌细胞中Caspase-3活性(0.24±0.01 U/L)明显升高(P0.01)。流式细胞术检测结果表明,与对照组(MFI:63.00±4.58)相比,HBSS刺激0.5 h后,Lewis肺癌细胞中ROS水平(MFI:293.00±9.54)上调(P0.01)。western blot结果显示,HBSS刺激0、4、8和12 h后,Lewis肺癌细胞中HMGB1蛋白的表达水平明显升高(P均0.01)。ELISA法结果显示,与健康人对照(3.36±0.20 ng/mL)相比,肺癌患者血清中HMGB1的水平(12.76±0.74 ng/mL)明显升高(P0.05),且与血清CEA水平呈正相关(r=0.44,P0.01)。结论肿瘤饥饿环境能够促进肺癌细胞中凋亡相关分子HMGB1的表达,肺癌患者血清HMGB1水平与肺癌发展密切相关。     

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用KB纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮一舒巴坦有较高的敏感率（33．3％）,对其他抗菌药物的敏感率均较低（20．0％）。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac（3）-I、aac（6’）Ib、aph（3’）-I和16SrRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72．2％（26株）、72．2％（26株）、80．6％（29株）和80．6％（29株）。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。     

人HMGB1 B box蛋白的表达、鉴定及其单克隆抗体的制备

目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础。方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGB1 B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性)。结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2。2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1 D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085。结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础。     

IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原表达的作用研究

目的:探讨IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原蛋白表达的影响及其分子机制。方法:从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用100 ng/mL IL-17刺激0、24、48、72 h,PCR检测其表面IL-17受体、免疫荧光检测I/III型胶原表达水平,Western blot法检测PKCβ、Erk1/2、NF-κB磷酸化水平。结果:心肌成纤维细胞表面有IL-17RA/C的表达;IL-17刺激心肌成纤维细胞24 h后Ⅰ/Ⅲ型胶原表达明显增加,Western blot显示IL-17刺激心肌成纤维细胞后分别在30、45、45 min导致PKCβ、Erk1/2、NF-κB的磷酸化。结论:IL-17可以诱导心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ型胶原的表达,其分子机制可能是PKCβ-ERK1/2-NF-кB依赖性的。     

麦粒灸治疗妇科手术后尿潴留临床观察

目的：探讨麦粒灸治疗妇科术后尿潴留的临床疗效。方法：对58例患者随机分成对照组20例（夹闭尿管,锻炼膀胱功能方法）和治疗组38例（穴位麦粒灸方法）。结果：治疗组和对照组治愈率和总有效率分别进行统计学比较,均有差异性意义（P﹤0.05）。结论：麦粒灸对改善妇科手术后尿潴留有明显疗效和独特优势。     

LPS诱导心肌成纤维细胞HMGB1的释放与Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白分泌的相关性研究

目的:探讨小鼠心肌成纤维细胞(CFs)在LPS刺激下高迁移率族蛋白(HMGB1)释放与Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的相关性。方法:从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用LPS(500 ng/mL)刺激0,6,12,24,36,48 h后收取细胞及其上清。采用RT-PCR检测HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,通过Western blot检测细胞及其培养上清中HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;采用免疫荧光分析HMGB1在细胞内的定位。结果:LPS刺激CFs 6 h时HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平无明显变化,12、24、36、48 h后HMGB1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量均增加。Western blot检测发现,LPS刺激CFs 24 h后细胞上清可检测到HMGB1蛋白,且细胞中HMGB1的表达呈现先增加后降低的现象。免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着从细胞核到细胞质的转位过程。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的Western blot结果均呈现增加趋势。结论:LPS刺激CFs后HMGB1由细胞核转移到细胞质并可主动分泌到胞外,其作用呈现一定的时间依赖性。与心肌纤维化密切相关的Ⅰ、Ⅲ型胶原在LPS刺激后表达量明显增加,提示内源性HMGB1的定位及分泌可能与脓毒症引起的心功能紊乱后期的心肌纤维化可能有一定的关系。     

优质护理对白血病患者化疗负面情绪和治疗依从性的积极作用分析

目的:分析优质护理对白血病患者化疗负面情绪和治疗依从性的积极作用。方法:选择2016年1~12月期间我院收治的100例白血病患者为研究对象,所有的患者均接受放化疗治疗,随机将其分为观察组和对照组,两组各50人,对照组采用常规的护理方式,观察组采用除了常规护理以外的优质护理,比较两组患者的负面情绪改善状况以及治疗依从性。结果:在治疗依从性方面,观察组的症状自评表各项数据都低于对照组(P0.05)。结论:在白血病患者放化疗治疗过程中,采用优质护理可以明显改善患者的焦虑、抑郁等负面情绪,帮助患者在治疗过程中克服其心理障碍,对于提高治疗的依从性,保证放化疗的顺利进行有着积极的意义。     

青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用

目的合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用。方法以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况。MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响。用终浓度为(0、1、2、5、10)μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24 h,再加终浓度为1μg/kg的LPS刺激6 h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平。结果成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达。结论青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的。