端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL—Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。     

雌激素对骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-4mRNA表达影响的实验研究(摘要)

在新骨形成过程中,骨形态发生蛋白(BMP)诱导间充质细胞分化成为成骨类细胞,并能刺激成骨类细胞的功能.BMP是间充质细胞合成分泌的多肽,在体内具有多种功能,在骨折愈合过程中能促进骨和软骨的形成.目前关于BMP基因的表达规律还不十分清楚.笔者采用原位杂交技术,在大鼠胫骨骨折愈合过程中探讨了雌激素对BMP-4基因表达的影响,以了解骨质疏松性骨折的愈合机理.     

雌激素对骨折愈合过程中骨形态发生蛋白—4 mRNA表达影响的实验研究（摘要）

在新骨形成过程中 ,骨形态发生蛋白 (BMP)诱导间充质细胞分化成为成骨类细胞 ,并能刺激成骨类细胞的功能 .BMP是间充质细胞合成分泌的多肽 ,在体内具有多种功能 ,在骨折愈合过程中能促进骨和软骨的形成 .目前关于BMP基因的表达规律还不十分清楚 .笔者采用原位杂交技术 ,在大鼠胫骨骨折愈合过程中探讨了雌激素对BMP - 4基因表达的影响 ,以了解骨质疏松性骨折的愈合机理 .方法 :实验将 180只SD大鼠随机分成 4组 .OVXE1组为卵巢切除后 1d开始雌激素替代治疗 ;OVXE2 组为骨折后雌激素替代组 ;OVX组为雌激素缺乏组 ;SO组为正常对照组 …     

端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。     

hTERT启动子介导自杀基因在肿瘤细胞中的靶向表达

肿瘤的基因治疗中,如何保证自杀基因只在特异性组织或细胞中表达而不在人正常组织细胞中表达是一个亟待解决的问题。与特异性组织来源的启动子如CEA启动子、AFP启动子、Tyr启动子等启动子相比,运用hTERT启动子能够驱动自杀基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中靶向表达,更具广谱性,因此在肿瘤治疗中成为一个有广阔前景的新方法。