院内不同生化检测系统检测结果一致性研究

目的对医院内不同实验室或同一实验室不同生化检测系统检测结果进行比对分析和偏差评估．实现医院内不同生化检测系统检测结果一致性。方法参考美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的EP15-A文件，以Roch Mod Ular P800检测系统（S）为目标检测系统，Roch COBAS 400检测系统（1、21、CL8000检测系统（3）为实验检测系统，检测患者血清TBIL、ALT、AST含量，进行比对研究和统计学分析，计算偏倚（SE％），实验检测系统比对项目取偏倚最高者与1／4CLIA88允许误差进行比较．偏倚（SE％）小于等于1／4CLIA88允许总误差（TBIL、ALT、AST1／4CLIA’88允许总误差均为5％），达到该项目院内检测结果一致性目的。结果①用原校准品校准各检测系统进行比对分析。TBIL、ALT、AST偏倚（SE％）分别为5．6％、19．2％、5.3％②采用目标检测系统定值的新鲜患者混合血清作为临时校准物校准各实验检测系统，第一次比对结果TBIL、ALT、AST偏倚（SE％）分别为5.3％、7．5％、4．7％；第二次比对结果TBIL、ALT、AST偏倚（SE％）分别为4．0％、4．1％、3．6％，实验检测系统比对项目SE％均小于5％，检测结果达院内一致性要求。结论采用目标检测系统定值的患者新鲜混合血清作为临时校准物．校准各实验检测系统的比对分析是实现医院内不同生化检测系统检测结果一致性的有效途径。     

应用流式细胞仪检测结核分枝杆菌对左氧氟沙星的敏感性

目的利用流式细胞仪检测结核分枝杆菌对左氧氟沙星的敏感性。方法利用结核分枝杆菌水解FDA的特点,用FDA标记经过左氧氟沙星作用后的标准菌株H37RV和临床分离菌株,利用流式细胞仪检测标记了FDA的菌株的荧光强度,并与比例法结果进行比较。结果 40株结核分枝杆菌的流式细胞仪所得药敏试验结果与比例法基本一致(p>0.05)。结论流式细胞仪检测结核分枝杆菌药敏实验的方法极大地缩短了获得药敏结果的时间,可以考虑作为常规项目开展。     

60株快速生长分枝杆菌对11种抗结核化疗药物的敏感性分析

目的了解脓肿、龟、偶发3种快速生长分枝杆菌对11种抗结核化疗药物的敏感性。方法应用绝对浓度法对脓肿、龟、偶发分枝杆菌进行药物敏感性测定，测定药物及其浓度（ug／mL）分别为：异烟肼（1、10）、利福平（50、250）、链霉素（10、100）、乙胺丁醇（5、50）、阿米卡星（10、100）、力克肺疾（1、10）、卷曲霉素（100、1000）、环丙沙星（1、10）、莫西沙星（1、10）、左氧氟沙星（1、10）和克拉霉素（10、100）。结果共检测31株脓肿、20株龟和9株偶发分枝杆菌菌株。敏感性高于10％的有：脓肿分枝杆菌对克拉霉素87．1％、脓肿分枝杆菌对阿米卡星22．6％、龟分枝杆菌对克拉霉素75．0％、龟分枝杆菌对阿米卡星55．0％、偶发分枝杆菌对克拉霉素77.8％、偶发分枝杆菌对阿米卡星33.3％。另外，3种分枝杆菌虽对乙胺丁醇、链霉素、环丙沙星低浓度敏感性低．但对其高浓度则表现相当程度的敏感性。结论脓肿、龟、偶发3种快速生长杆菌对克拉霉素具有较高的敏感性。     

一种BACTEC TB-460系统PANTA试剂替代用品的配制与效果观察

一种ＢＡＣＴＥＣＴＢ－４６０系统ＰＡＮＴＡ试剂替代用品的配制与效果观察广州市结核病肺部肿瘤防治所５１０１８０刘志辉，黄业伦，邓世桢，曹翌明，罗少珍ＢＡＣＴＥＣＴＢ－４６０系统应用于分支杆菌的检测快速、简便且易于实验室标准化，但其试剂全部依赖进口且价格...     

广州地区临床分离非结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药结果分析

目的 分析广州地区临床分离的非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定结果及耐药情况.方法 用改良罗氏培养基培养法分离680例疑似结核病患者痰液,对确诊为NTM的38例,用传统生化反应进行菌种鉴定,采用以罗氏培养基为基础的绝对浓度法做NTM药物敏感试验.结果 38株NTM按Runyon分类法,检出感染菌种分布为Ⅰ群1株(2.6...     

结核分枝杆菌和4种缓慢生长非结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白分析

目的 了解结核分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌液体培养早期的蛋白质代谢与分泌活动,以进一步加深对它们致病性的理解,并初步分析由此途径寻找准确、快速鉴定这些菌种的新型标志物的可能性.方法 采用Middlebrook 7H9液体培养基对目的细菌临床分离株进行培养,应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对7天培养滤液和Middlebrook 7H9液体培养基蛋白质组进行检测,描述性分析其蛋白质组.结果 在Middlebrook 7H9液体培养基与结核分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌7天培养滤液中分别检测到106、164、118、124、109、210种蛋白质/多肽,依据质荷比（m/z）其相对分子量范围分别为1045～3938、982 ～ 9329、1035～4579、1052 ～ 9109、1035 ～ 3940、998 ～ 9329,其表达丰度分别为86 ～ 7838、7～ 210、63 ～ 5730、58 ～ 5559、74～6866、6～190;与Middlebrook 7H9液体培养基蛋白相比,结核分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌7天培养滤液中分别存在157、106、114、99、205种差异蛋白质.结论 结核分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、瘰疠分枝杆菌在繁殖生长早期即存在活跃的蛋白质代谢与分泌活动,而且此5种不同分枝杆菌早期培养滤液中蛋白质种类与表达丰度差异明显.     

异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析

目的寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较,描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽,其相对分子量(依质荷比m/z而得)范围分别为982⁹ 328、9979 328、997⁹ 327、1 0509 327、1 050⁸ 903、9 968 903、9 96⁹ 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为179 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为17² 100、212 100、21¹ 943、601 943、60⁵ 355、415 355、41³ 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 0833 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 083⁸ 812、1 0128 812、1 012⁹ 327之间,表达丰度在769 327之间,表达丰度在76¹ 811、251 811、25³ 010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异,但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。     

60株快速生长分枝杆菌对11种抗结核化疗药物的敏感性分析

目的了解脓肿、龟、偶发3种快速生长分枝杆菌对11种抗结核化疗药物的敏感性。方法应用绝对浓度法对脓肿、龟、偶发分枝杆菌进行药物敏感性测定，测定药物及其浓度（ug／mL）分别为：异烟肼（1、10）、利福平（50、250）、链霉素（10、100）、乙胺丁醇（5、50）、阿米卡星（10、100）、力克肺疾（1、10）、卷曲霉素（100、1000）、环丙沙星（1、10）、莫西沙星（1、10）、左氧氟沙星（1、10）和克拉霉素（10、100）。结果共检测31株脓肿、20株龟和9株偶发分枝杆菌菌株。敏感性高于10％的有：脓肿分枝杆菌对克拉霉素87．1％、脓肿分枝杆菌对阿米卡星22．6％、龟分枝杆菌对克拉霉素75．0％、龟分枝杆菌对阿米卡星55．0％、偶发分枝杆菌对克拉霉素77.8％、偶发分枝杆菌对阿米卡星33.3％。另外，3种分枝杆菌虽对乙胺丁醇、链霉素、环丙沙星低浓度敏感性低．但对其高浓度则表现相当程度的敏感性。结论脓肿、龟、偶发3种快速生长杆菌对克拉霉素具有较高的敏感性。     

不同结核病患者群血清蛋白质谱分析与比较

目的:比较分析菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者的血清蛋白质谱,从蛋白质组学层面了解不同结核病患者群血清蛋白质谱的特征,为结核病诊断标志物的筛选提供指导。方法:应用表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片系统,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)对54例菌阳肺结核、45例菌阴肺结核、18例肺外结核患者的血清蛋白质进行检测;应用ClinProTools分析软件依据各蛋白质的质谱峰面积计算相对强度表示该血清蛋白质的丰度,采用t检验(对Anderson-Darling检验P>0.05的正态分布者)或Wilcoxon检验(对Anderson-Darling检验P<0.05的非正态分布者)分析比较菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者各血清蛋白质的平均丰度。结果:(1)在3种不同结核病患者人群中均捕获到102种相对分子质量在1011.41～9435.07的不同血清蛋白质,经Anderson-Darling检验,在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核患者人群中分别有31、23和29种血清蛋白质呈正态分布。(2)正态分布的血清蛋白质在不同结核病患者人群间其水平未见显著差异。(3)非正态分布的血清蛋白质:在菌阳肺结核与菌阴肺结核患者人群间其水平未见显著差异;在肺结核与肺外结核患者人群间发现1个差异血清蛋白质(P=0.0251),其相对分子质量为5753.76,在肺结核与肺外结核患者人群血清中的平均丰度分别为15.42±4.86和28.29±14.08。结论:不同结核病患者群的血清蛋白质谱具有同质性,为普遍适用性结核病血清学诊断标志物的筛选提供了科学依据。     

临床分离结核分枝杆菌耐药性质与rpoB、rpsL基因变异的研究

目的:对从疑似结核病患者痰液中分离的结核分枝杆菌的rpoB和rpsL基因突变情况进行研究,分别探讨其与耐利福平(RFP)和耐链霉素(SM)之间的关系.方法:采用PCR和DNA测序法对结核分枝杆菌临床分离株和1株卡介苗株(BCG)的rpoB和rpsL基因进行序列分析.结果:分离得到耐利福平27株,耐链霉素25株,经测序分析,所有利福平、链霉素敏感株rpoB、rpsL基因均未发生氨基酸突变;RFP和SM耐药株rpoB和rpsL基因的突变率各为81.5％(22/27)和76％(19/25);耐利福平以Ser531Leu突变最为常见,突变频率为55.6％(15/27),耐链霉素以Lys43Arg位突变最为常见,突变频率为72.0％(18/25).结论:rpoB和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌RFP和SM耐药性产生的主要分子机制,PCR-DNA测序法可快速检测结核分枝杆菌RFP和SM耐药性.