冠心病患者心外膜脂肪组织和血浆中脂联素相关miR-371b-5p表达及其对脂肪细胞因子分泌的影响

目的：探讨冠心病（CAD）患者心外膜脂肪组织（EAT）和血浆中脂联素（APN,又称ADIPOQ）相关差异表达miR-371b-5p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4（KLF4）、白细胞介素6（IL-6）和单核细胞因子趋化蛋白1（MCP-1）分泌的影响,阐明miR-371b-5p在CAD中的作用机制。方法：收集CAD （CAD组,n=34）和非CAD （non-CAD组,n=16）患者的EAT和血液标本,采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测2组患者EAT和血浆中miR-371b-5p的表达水平。将诱导成功的3T3-L1前体脂肪细胞分为空白对照组（不做任何处理）、miR-371b-5p过表达组（转染miR-371b-5p模拟物）和miR-371b-5p抑制剂组（转染miR-371b-5p抑制剂）。qRT-PCR法检测转染24 h后各组3T3-L1前脂肪细胞中APN、KLF4、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平,并对miR-371b-5p进行生物信息学分析。结果：与non-CAD组比较,CAD组患者EAT和血浆中miR-371b-5p表达水平均升高（P<0.01）。与空白对照组比较,miR-371b-5p过表达组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4 mRNA表达水平降低（P=0.043,P=0.045）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平升高（P=0.037,P=0.041）;miR-371b-5p抑制剂组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4mRNA表达水平升高（P=0.025,P=0.027）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平降低（P=0.039,P=0.041）。miR-371b-5p预测靶基因富集于多个生物学功能及过程,KEGG通路主要富集于脂肪细胞因子等信号通路;蛋白互作,miR-371b-5p预测靶基因APN、瘦素（LEP）和AKT1编码蛋白位于互作网络中核心位置。结论：CAD患者EAT中过表达miR-371b-5p转染成熟的3T3-L1脂肪细胞后可使细胞的抗炎因子表达水平降低,炎性因子表达水平升高,miR-371b-5p有望成为CAD治疗的新靶点。     

冠心病伴心外膜脂肪增厚大鼠模型的制备

目的：建立冠心病（CAD）伴心外膜脂肪（EAT）增厚的SD大鼠模型,为研究EAT在CAD中的作用奠定基础。方法：50只雄性SD大鼠随机分为对照组（15只）和模型组（35只）。模型组大鼠高脂饲料喂养,从第0天开始,前3个月每月按20万U·kg^-1腹腔注射维生素D3 1次;对照组大鼠喂养基本饲料,同步注射等量生理盐水,共造模210d。通过大鼠一般情况、体质量变化、血脂水平、EAT厚度和心肌组织病理表现等对模型大鼠进行评估。结果：与对照组比较,模型组大鼠皮毛黯淡,活动量少,喂饲90~180 d时大鼠体质量增加速度减慢,180~210 d时大鼠体质量逐渐降低,血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL-c）水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平明显降低（P<0.05）,动脉粥样硬化指数（AI）值明显升高（P<0.01）,EAT明显增厚（P<0.05）。心肌组织病理形态表现,对照组大鼠冠状动脉内膜、中膜未见增厚,血管壁完整,未见血管狭窄,心肌间小血管未发现粥样斑块,内膜完整且未增厚;模型组大鼠冠状动脉出现内膜及中膜增厚,内皮破坏,大量粥样斑块形成,甚至钙化,冠脉狭窄85%以上,心肌间小血管内膜下可见大量泡沫细胞且内膜明显增厚。结论：成功复制SD大鼠CAD伴EAT增厚模型,该模型可用于EAT在CAD中病理生理及分子生物学等方面作用的研究。