脱细胞基质面神经修复材料的制备

目的 制备具有天然神经组织结构的支架,构建组织工程化面神经用于修复面神经损伤。方法 取家兔面神经,改良化学萃取法制备脱细胞神经基质,HE染色形态学观察去细胞及脱髓鞘情况,荧光分光光度计测定支架内细胞经Quant-iT PicoGreen工作液染色后的DNA含量。MTT法检测细胞在支架上的相对生长率从而检测支架的细胞毒性。结果 支架移植体呈圆柱形,弹性与正常神经基本一致,组织观察显示细胞结构未见残余完整细胞及细胞碎片残留,未见神经髓鞘及轴突结构,细胞外基质形成纵向排列结构,结构之间可见空隙。兔脱细胞面神经基质支架内残留的DNA含量较正常兔面神经明显下降(P<0.01)。神经基质供体无细胞毒性。结论 改良化学萃取法可有效去除面神经细胞,天然结构保存完好,细胞毒性低,可作为组织工程化面神经的支架。     

电泳法测定大鼠血浆中骨特异性碱性磷酸酶活性

目的 建立一种简便灵敏准确的测定大鼠血浆中骨特异性碱性磷酸酶(BALP)活性的方法。方法 采用聚丙烯酰胺凝胶(PA)电泳法检测BALP活性。以纯化的BALP作为标准品,进行回收率测定和精密度测定。结果 此方法测定大鼠血浆中BALP可得到满意的结果:(1)以标准BALP加入量对实际测定吸光度值回归统计,可见有良好的线性关系(r=0.9986,P<0.05)。(2)标准回收率范围为93.83％-100.34％。(3)对同一样品进行10次测定,其变异系数为4.4％。(4)实际样品测定中缺锌组BALP显著低于对喂组和对照组,而缺锌组与对照组和对喂组的总ALP也有差别。结论 建立的电泳方法检测大鼠血浆中的BALP,经实验证实,该方法操作简便,具有良好的准确性和精密度。     

稳定内皮和周细胞微管改善脊髓损伤中微循环障碍的作用及其机制

目的 探讨稳定内皮细胞和周细胞微管改善脊髓损伤（SCI）中微循环障碍的作用及其机制。 方法 培养大鼠脑微血管内皮细胞和周细胞,建立糖氧剥夺（OGD）模型,采用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫荧光和Western blotting分别检测α-微管蛋白（α-tubulin）表达;建立脊髓横断损伤模型(n=36),采用免疫荧光检测大鼠内皮细胞抗原1（RECA-1）及血小板衍生生长因子受体β（PDGFRβ）表达,采用Western blotting检测血管内皮生长因子A（VEGFA）、VEGF受体 2（VEGFR2）、血小板衍生生长因子B（PDGFB）、PDGFRβ、血管生成素1（Ang-1）、 特异性酪氨酸激酶受体2（Tie-2）等蛋白表达。 结果 OGD组细胞活性显著低于对照组,且具有时间依赖性;埃博霉素B（Epo B）组细胞活性显著高于OGD组;OGD致微管断裂,且随时间延长断裂愈加明显;Epo B组微管比OGD组趋于稳定,断裂减轻。SCI组RECA-1和PDGFRβ表达水平明显低于假手术组,Epo B治疗组RECA-1和PDGFRβ表达水平显著高于SCI组,VEGFA、VEGFR2、PDGFB、PDGFRβ、Ang-1表达水平明显高于SCI组。 结论 脊髓损伤可导致血管和周细胞减少及微循环障碍,这与细胞微管破坏相关;稳定微管治疗可保护周细胞和微血管,促进微循环重建,建立有利于脊髓损伤修复的微环境。