KLF4转染对口腔鳞癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察KLF4转染对人口腔鳞癌细胞系SCC15侵袭能力的影响.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,构建pReceiver-Lv105/KLF4慢病毒表达载体,包装病毒颗粒,感染SCC15后,puromycin筛选KLF4稳定表达的细胞系.荧光显微镜和免疫荧光细胞化学鉴定病毒感染成功.然后通过划痕实验检测KLF4转导对细胞体外迁移能力的影响.Transwell细胞侵袭实验检测KLF4转导对细胞侵袭能力的影响.实时荧光定量PCR检测与细胞侵袭和迁移密切相关的因子MMP-9和Twist1的表达.结果 与对照载体转导组SCC15/Lv105细胞相比,SCC15/KLF4细胞中KLF4的表达明显增强.SCC15/KLF4细胞的相对迁移率显著高于SCC15/Lv105细胞(P＜0.01).SCC15/KLF4组的侵袭穿膜细胞数明显多于SCC15/Lv105组(P＜0.05).另外,SCC15/KLF4细胞中MMP-9和Twist1 RNA的表达也高于对照组SCC15/Lv105细胞,其中MMP-9 RNA的表达升高更为显著(P＜0.01).结论 KLF4转导SCC15细胞后,可能通过增强MMP-9和Twist1的表达促进细胞的迁移和侵袭能力.     

Garcinol对人口腔鳞癌细胞的抑制作用研究

目的 观察Garcinol对人口腔鳞癌细胞系SCC15增殖、细胞周期、凋亡和克隆形成能力的作用.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,采用不同浓度的Garcinol处理细胞后,通过MTT法检测对细胞增殖的影响,PI单染色法流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.结果 Garcinol能显著抑制SCC15细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度和时间依赖性.Garcinol能抑制SCC15细胞周期由G1期向S期转变(P＜0.01),并呈浓度依赖性.Garcinol还能够诱导SCC15细胞凋亡(P＜0.01),并呈浓度依赖性.同时,Garcinol能抑制SCC15细胞的克隆形成能力(P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论 Garcinol作为一种化学预防制剂,对人口腔鳞癌细胞SCC15具有显著的抑制作用,其机制主要包括抑制SCC15细胞增殖、细胞周期和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞系Nrf2通路的激活作用

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)对人口腔鳞癌细胞系SCC-15中氧化应激Nrf2通路的作用。方法通过体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-15,采用细胞免疫荧光法检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游基因Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)表达水平的影响,计数平均光密度值。同时采用蛋白免疫印迹方法定量检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1和醌氧化还原酶表达水平的影响。结果不同浓度的AS2O3对Nrf2、血红素氧合酶1和醌氧化还原酶均有一定的激活作用,并呈剂量依赖关系。结论 AS2O3可激活口腔鳞癌细胞系SCC-15的Nrf2信号通路,具有促进抗氧化基因表达的作用。     

热休克蛋白在人舌癌细胞株和癌前病变细胞株的差异表达

目的 检测热休克蛋白(HSPs)27、70、90α在舌癌细胞株及癌前细胞株的表达情况.方法 体外培养人舌癌细胞株SCC-15,SCC-6和癌前细胞株DOK.采用RT-PCR测定人舌癌细胞株SCC-15、SCC-6及癌前细胞株DOK中HSP27、HSP70、HSP90α的mRNA表达情况,并作对比分析.采用Western...     

过氧化氢对小鼠口腔癌发病影响的实验研究

目的检测氧化应激相关基因Nrf2、GST-π、HO1在4NQO小鼠舌癌标本中的表达水平,分析氧化损伤对4NQO诱导的小鼠口腔癌的促进作用。方法 190只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、6%、15%和30%过氧化氢处理组。阴性对照组不做任何处理,其余4组以0.005%4NQO诱癌16周后,分别用水(阳性对照组)和6%、15%、30%的过氧化氢涂抹小鼠舌部,每周3次,共8周。第24周末处死全部动物,取舌组织进行组织病理学分析及免疫组化染色。结果在粘膜从正常到异常增生、再到癌变的过程中,Nrf2、GST-π和HO1的表达持续升高,并且30%过氧化氢组中重度异常增生和癌变的组织中上述三者的积分光密度值显著高于阳性对照组(P0.01);6%和15%组中,GST-π的积分光密度值均显著高于阳性对照组(P0.05),Nrf2和HO1的积分光密度值与阳性对照组无统计学差异。结论过氧化氢造成的氧化损伤进一步促进了4NQO小鼠口腔癌的发展。     

双特异性抗体治疗恶性肿瘤的研究进展

双特异性抗体（BsAb)，一方面结合免疫效应细胞上的激活分子或偶联毒素，另一方面利用抗体的特异性与肿瘤相关抗原（TAA）结合。通过双结合，激活效应细胞如细胞毒性T细胞和NK细胞，或通过免疫毒素发挥靶向抗肿瘤效应，是一种很有潜力的恶性肿瘤免疫治疗方式。本文对双特异性抗体的构建方法、作用机制及其相关研究加以概述。     

生存素、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在口腔癌前病变及口腔癌中的表达

目的 探讨生存素(survivin)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)在口腔癌发生中的作用,以期为口腔癌的监测和治疗提供参考.方法 选取首都医科大学口腔医学院病理科存档石蜡标本45例,其中口腔白斑伴上皮轻-中度异常增生16例,口腔白斑伴上皮重度异常增生12例,口腔高-中分化鳞状细胞癌17例;正常口腔黏膜组织10例.采用免疫组化SP法对生存素、caspase-3的表达进行检测;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法对细胞凋亡指数进行检测.结果 生存素表达在正常黏膜、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔癌中逐渐增加,阳性细胞率分别为(1.05±1.21)%、(6.06 ±4.87)%、(12.49 ±8.41)%和(21.89±10.45)%;caspase-3的表达在3个病例组中逐渐下降,正常对照、白斑伴上皮轻-中度异常增生、白斑伴上皮重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组阳性细胞率分别为(12.37 ±5.48)%、(19.51 ±13.15)%、(9.76±7.83)%和(6.08 ±6.91)%;正常对照、白斑伴轻-中度异常增生、白斑伴重度异常增生及口腔鳞状细胞癌组凋亡指数分别为(0.89 ±0.46)%、(1.29 ±0.63)%、(0.65 ±0.40)%和(0.21 ±0.12)%,前3组与口腔鳞状细胞癌组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 生存素在口腔癌的发生过程中起重要作用,随着生存素表达的增加,caspase-3和凋亡指数呈下降趋势;生存索可能通过抑制caspase-3的表达,从而抑制细胞的凋亡,促进口腔癌的发生.     

三氧化二砷联合放疗对口腔癌移植瘤小鼠治疗作用的研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3)和低剂量放疗联合应用对口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型的治疗作用.方法 将人口腔鳞癌细胞株Tca8113接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型;随机分为4组:对照(A)组、As2O3(B)组、放疗(C)组和As2O3放疗联合治疗(D)组,每组6只.自肿瘤接种后6 d开始:B组和D组腹腔内注射As2O3;C组和D组接受放射治疗;A组腹腔注射生理盐水.停药一周后处死动物,测量瘤块体积,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组织化学法检测各组标本中增殖相关蛋白Ki-67、凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、血管内皮损伤标志物von Willebrand Factor(vWF)的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(microvessel density,MVD)并进行统计学分析.结果 C、D组的移植瘤体积显著低于A组(P<0.05),D组与B、C组相比亦有显著降低(P<0.05).B、C、D组移植瘤生长抑制率分别为20%、57%、82%.免疫组化结果显示:D组中Ki-67在的表达及MVD值明显低于其他三组,Cleaved Caspase-3的表达显著高于其他三组,统计学均有显著性差异(P<0.01);与A组相比,B、C、D组Ki-67、Cleaved Caspase-3的表达以及MVD值均有显著性差异(P<0.001).结论 As2O3能够提高放疗对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用,其抗肿瘤作用的可能机制为抑制肿瘤细胞增殖和血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡.     

抗体-白细胞介素2融合蛋白18382scFv-Interleukin2的表达及活性检测

目的在哺乳动物细胞内表达抗体细胞因子融合蛋白18382scFv-Interleukin2，为卵巢癌提供一种新的治疗方法。方法通过基因工程的方法将两段基因IL-2和18382scFv开放读框的编码序列克隆在一起，在CHO-K1细胞内人巨细胞病毒启动子的作用下表达可溶性融合蛋白，并检测其对肿瘤细胞的靶向性。结果采用哺乳动物细胞表达，系统表达的这种小分子融合蛋白，既保留了与卵巢癌OC18382抗原结合的特性，又保持了IL-2的生物学活性。融合蛋白在细胞培养上清中保持稳定，更重要的是融合蛋白将IL-2靶向表达OC18382抗原的卵巢癌细胞表面化的同时，又能刺激IL-2依赖细胞株的增殖，从而诱发局部有效的抗肿瘤反应。既提高了融合蛋白的穿透组织能力和肿瘤组织部位的浓聚，又避免了大剂量全身应用细胞因子引起的副作用。结论真核表达系统表达的融合蛋白具有很好的生物学活性。     

4NQO诱导小鼠舌癌前病变模型的研究

目的 使用4NQO诱导并建立C57BL/6J小鼠舌癌前病变模型.方法 46只6～8周龄C57BL/6J小鼠,随机取16只作为阴性对照,不做任何处理,分别于8、12、16周末处死.实验组30只饮用50μg/ml 4NQO水溶液,分别于8、12、16周末处死.处死前2小时腹腔注射BrdU (50mg/kg),肉眼及组织病...