Clec14a基因调控斑马鱼胚胎血管发育*

目的：探索Clec14a在斑马鱼胚胎期的表达及其在血管发育过程中的功能,探讨该基因调控血管发育机制。方法：通过胚胎整体原位杂交技术,观察Clec14a基因在斑马鱼胚胎期的表达情况;在转基因斑马鱼系Tg（kdrl:mCherry）和Tg（fli1a:nGFP）中,显微注射吗啉修饰的反义寡核苷酸（morpholinoantisense oligos）下调Clec14a基因表达,同时在转基因斑马鱼系Tg（kdrl:mCherry）中注射Clec14a-mRNA调控Clec14a基因表达,利用激光共聚焦显微镜观察分析斑马鱼节间血管（intersegment vessel,ISV）表型,统计分析内皮细胞迁移速度和数目的变化,并应用qRT-PCR技术检测下调后该基因mRNA表达情况。结果：在受精后24 h、48 h和72 h,Clec14a基因在斑马鱼脑、心脏、血管系统中有表达;Clec14a基因表达下调导致ISV发育缺陷,内皮细胞数目减少,抑制其迁移速度。结论：下调Clec14a基因表达能够通过抑制内皮细胞增殖和内皮细胞迁移调控斑马鱼胚胎血管发育。     

20kHz超声辐照SonoVue联合DDP、MMC、5-FU对裸鼠肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的了解20 k Hz超声辐照Sono Vue微泡联合化疗药顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对裸鼠肝癌移植瘤细胞增殖和凋亡的作用。方法肝癌Hepa G2细胞株注射48只裸鼠皮下,两周后成瘤,平均分成4组:对照组、超声组、化疗组、超声联合化疗组。对照组不采取任何处理。超声组裸鼠尾静脉注射声诺维微泡0.2 ml,低频超声(20k Hz,2 W/cm~2,占空比40%,每次1 min,隔天,共2周)辐照肿瘤。化疗组裸鼠尾静脉每次注射DDP(1 mg/kg)、MMC(0.5 mg/kg)及5-FU(5 mg/kg),隔天,共2周。超声联合化疗组,先进行2周超声辐照,后进行2周化疗。治疗结束,每组随机处死6只裸鼠,取标本。TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组化检测Ki-67蛋白表达,电镜观察微血管结构。其余每组6只裸鼠继续饲养,记录最终生存时间。结果四组肿瘤细胞凋亡率分别为:0.08±0.05、0.43±0.11、0.47±0.11及0.79±0.11。超声+化疗组与对照组比较,t=13.41,P0.0001;与超声组比较,t=5.81,P=0.0021;与化疗组比较,t=3.63,P=0.0151。四组肿瘤组织Ki-67积分分别为:3.67±0.52、3.17±0.75、3±0.89、1.67±1.03。超声+化疗组与对照组比较,t=3.46,P=0.018;与超声组比较,t=2.7,P=0.0429;与化疗组比较,t=2.67,P=0.045。电镜显示:超声组、超声联合化疗组肿瘤微血管破裂,红细胞漏出组织间隙。对照组、化疗组肿瘤微血管壁清晰,无缺损。超声联合化疗组裸鼠生存期较长(χ~2=29.37,P0.0001)。结论低频超声辐照微泡联合化疗药物,可促进裸鼠肝癌组织细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。