能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化

目的研究不同程度的能量限制(CR)下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组:正常对照组、75%CR组(喂养食物为正常对照组的75%),55%CR组(喂养食物为正常对照组的55%)和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义(P<0.05),而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。     

姜黄素对TRP离子通道抑制作用的研究

目的验证瞬时受体电位（TRP）通道在胶质瘤MGR2细胞中的存在,研究姜黄素对TRP通道的电生理影响,探讨姜黄素抑制肿瘤细胞增殖的可能机制。方法体外培养人脑胶质瘤细胞MGR2;利用膜片钳技术检测胶质瘤细胞MGR2的电生理特性,验证并分离TRP离子通道。使用薄荷醇、无Mg2＋内液、酸以及非特异阻断剂2-氨基乙氧基苯硼酸（2-APB）及钆离子（Gd3＋）对TRP通道的敏感性进行检测。记录不同浓度的姜黄素对TRP通道电流幅度的影响。结果神经胶质瘤细胞MGR2是一种非可兴奋细胞,其细胞上表现出TRP离子通道的电生理特性。该通道对薄荷醇不敏感,对酸的反应不明显。对细胞内液低Mg2＋有（24.2±4.1）%的TRP电流增加（n=12,P〈0.05）,200μmol/L2-APB及10μmol/LGd3＋对TRP电流分别有（46.4±4.5）%及（73.2±3.6）%的增加（n=12,P〈0.05）。姜黄素对TRP通道的抑制作用具有浓度依赖性和可恢复性。结论 TRP通道在胶质瘤细胞MGR2中存在,姜黄素对TRP通道的作用具有浓度依赖性,为姜黄素抑制肿瘤增殖的可能机制提供了实验依据。     

H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应

目的研究H2O2诱导的PC12细胞(又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)氧化应激损伤中,热量限制(caloric restriction,CR)参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR+H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。     

能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化

目的研究不同程度的能量限制（CR）下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组：正常对照组、75%CR组（喂养食物为正常对照组的75%）,55%CR组（喂养食物为正常对照组的55%）和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义（P〈0.05）,而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。     

H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制

[目的]构建体外H2O2诱导PC12细胞模拟神经细胞凋亡模型[1],研究microRNA(miRNA或微小RNA)在凋亡中表达和bcl-W调控机制,从microRNA角度探讨颅脑损伤后(如缺血再灌注损伤、脑挫伤)凋亡的机制.[方法]体外H2O2诱导PC12细胞凋亡模型,用基因芯片技术筛选变化显著的microRNA,并对其实验验证后,根据现有microRNA数据库提供的靶标的预测分析结果,搜寻其相关的靶标,通过检测细胞凋亡、Western blot、实时荧光定量PCR技术来验证相关microRNA的作用靶点.[结果]成功构建了体外模拟体内神经细胞凋亡模型,通过基因芯片技术筛选出6个显著下调microRNA[2],其中mi-422a与bcl-w蛋白表达量呈负相关.[结论]通过miR-422a可以调控bcl-w蛋白的表达,且存在负性相关关系.通过调节mi-422a的表达可调控bcl-W蛋白的表达量,证实bcl-w上的基因位点有mi-422a的作用位点存在.     

H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应

目的研究H2O2诱导的PC12细胞（又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）氧化应激损伤中,热量限制（caloric restriction,CR）参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR＋H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。     

姜黄素对TRP离子通道抑制作用的研究

目的 验证瞬时受体电位(TRP)通道在胶质瘤MGR2细胞中的存在,研究姜黄素对TRP通道的电生理影响,探讨姜黄素抑制肿瘤细胞增殖的可能机制.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞MGR2;利用膜片钳技术检测胶质瘤细胞MGR2的电生理特性,验证并分离TRP离子通道.使用薄荷醇、无Mg2+内液、酸以及非特异阻断剂2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB)及钆离子(Gd3+)对TRP通道的敏感性进行检测.记录不同浓度的姜黄素对TRP通道电流幅度的影响.结果 神经胶质瘤细胞MGR2是一种非可兴奋细胞,其细胞上表现出TRP离子通道的电生理特性.该通道对薄荷醇不敏感,对酸的反应不明显.对细胞内液低Mg2+有(24.2±4.1)％的TRP电流增加(n=12,P＜0.05),200 μmol/L 2-APB及10 μmol/L Gd3+对TRP电流分别有(46.4±4.5)％及(73.2±3.6)％的增加(n=12,P＜0.05).姜黄素对TRP通道的抑制作用具有浓度依赖性和可恢复性.结论 TRP通道在胶质瘤细胞MGR2中存在,姜黄素对TRP通道的作用具有浓度依赖性,为姜黄素抑制肿瘤增殖的可能机制提供了实验依据.