富含半胱氨酸蛋白61对慢性肾脏病小鼠骨骼肌萎缩的影响

目的探讨富含半胱氨酸蛋白61（CCN1）对慢性肾脏病（CKD）小鼠骨骼肌萎缩的影响。方法构建骨骼肌条件性敲除CCN1小鼠品系，将得到的29只SPF级雄性野生型小鼠和敲除型小鼠随机分为野生型假手术组（WOS组）6只、野生型造模组（WOC组）9只、敲除型假手术组（COS组）8只、敲除型造模组（COC组）6只。WOC组、COC组小鼠经5/6肾切除术建立CKD模型，WOS组、COS组小鼠进行假手术。饲养21个月后处死小鼠，检测各组小鼠血清CCN1、肌酐、尿素氮、尿白蛋白肌酐比值及体重、胫骨前肌重量、腓肠肌重量；HE染色观察肾脏病理学改变，laminin免疫荧光观察胫骨前肌肌纤维横截面积；real-timePCR检测腓肠肌CCN1、肌肉特异性环指蛋白1（MuRF1）、肌肉萎缩盒F基因（MAFbx）mRNA表达水平；Westernblot法检测腓肠肌CCN1、p53蛋白表达水平。结果WOC组较WOS组、COC组较COS组小鼠血清CCN1、肌酐、尿素氮、尿白蛋白肌酐比值均升高（均P＜0.05），胫骨前肌体重比值、腓肠肌体重比值和胫骨前肌肌纤维横截面积均下降（均P＜0.05）；腓肠肌组织CCN1、MuRF1、MAFbxmRNA表达水平均升高（均P＜0.05），CCN1表达水平升高（P＜0.05）。而COC组较WOC组小鼠胫骨前肌肌纤维横截面积、胫骨前肌体重比值、腓肠肌体重比值均升高（均P＜0.05），腓肠肌CCN1、MuRF1、MAFbxmRNA表达水平均下降（均P＜0.05），CCN1、p53蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。结论CCN1可能通过p53途径促进CKD小鼠骨骼肌衰老和蛋白降解途径参与骨骼肌萎缩的发生。     

高剂量葡萄糖对小鼠肌管细胞自噬表达的影响

目的：探讨高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达的影响。方法：使用分化培养基诱导小鼠成肌细胞分化成肌管细胞,分正常剂量（5.5 mmol/L）和高剂量（17 mmol/L和30 mmol/L）葡萄糖浓度的3组培养基培养肌管细胞,于6、12、24、36、48、60、72 h后分别收集细胞,检测自噬相关蛋白和mRNA表达量,并用串联荧光标记LC3（mRFP-GFP-LC3）慢病毒转染小鼠成肌细胞,动态监测自噬流。结果：高剂量葡萄糖条件下肌管细胞自噬表达存在2个阶段,30 mmol/L组培养24 h自噬表达下降,LC3和Beclin-1蛋白表达水平比5.5 mmol/L组低（P＜0.05）;而在30 mmol/L葡萄糖条件下培养48、60和72 h后自噬水平增强,LC3和Beclin-1的基因表达均明显升高（P＜0.05）。肌管细胞GFP和RFP荧光斑点的定位与数量分析也证明30 mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养48、60和72 h后可显著增加自噬体和自噬溶酶体的合成。结论：高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达有重要影响,不同时间自噬表达存在差异,长期高血糖状态可诱导自噬过度活化。