人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响

目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.     

噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体

本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.     

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa Fab噬菌体抗体库的构建

目的:构建人源性Fab噬菌体抗体库,为进一步从抗体库中筛选人源性抗GPIIb/IIIaFab抗体奠定基础。方法:利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术,直接从血小板膜糖蛋白抗体(抗-GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次将PCR产物插入噬粒载体pComb3H相应位点,电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建成人源性Fab噬菌体抗体库。结果:成功地构建库容量达6.2×106的抗血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIaFab噬菌体抗体库。结论:构建了人源性Fab抗体库,并达到建库标准,可进一步从中筛选人源性Fab抗体。     

人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库的筛选与鉴定

目的从已构建的人源性抗血小板膜糖蛋白（glycoprotein,GP）Ⅱb/ⅢaFab噬菌体抗体库中筛选人源性抗血小板膜GPⅡb/ⅢaFab抗体,并对特异性阳性克隆进行鉴定。方法以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞包板,对人源性抗血小板膜GPⅡb/ⅢaFab噬菌体抗体库进行富集筛选,采用细胞ELISA法筛选特异性阳性克隆,用Western blot法鉴定表达蛋白与GPⅡb/Ⅲa结合的特异性,将阳性克隆进行扩增、测序。结果以CHO123细胞富集淘筛3轮,并用ELISA法检测到2个高亲合力的特异性识别血小板膜GPⅡb/Ⅲa的克隆,Westernblot鉴定结果显示在阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清均有特异性条带出现。对核苷酸序列进行同源性分析,证实这两个克隆轻链基因与人免疫球蛋白κ轻链的同源性分别高达97%和98%,重链基因与人免疫球蛋白Fd段的同源性分别高达94%和93%。结论利用噬菌体抗体库技术,成功地从人源性抗血小板膜GPⅡb/ⅢaFab抗体库中筛选出抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa的特异性阳性克隆,该克隆具有较高的特异性,其克隆基因符合抗体可变区结构特点。     

上海市健康金融发展现状及对策分析

目的在"健康中国"战略背景下,对与上海市医疗健康行业相关的金融发展状况进行系统梳理,并以现状为基础,对上海市当前的健康金融中存在的问题进行总结,并提出改善建议。方法收集上海市健康产业投融资数据,并进行描述性分析。结果上海市健康金融的主要矛盾如下:资本逐利与产业扶植之间的矛盾、私人资本与医疗健康产业属性的矛盾、金融资本分布与健康产业分布的矛盾、研发和产业化之间的矛盾。结论建议加强政府引导,推进信用体系以及融资信息共享平台建设,并对重点发展领域进行扶持。     

低分子肝素在临床的应用及护理

低分子肝素是一种低分子量的肝素,由普通肝素解聚而成,皮下注射后能形成有限的血浆浓度,发挥其降低高凝状态的抗血栓形成的作用,与普通肝素相比其生物利用度高,半衰期长,安全性高,出血及血小板减少等并发症发生率低,给药方便,不需要特殊监测,临床上被广泛应用于预防。     

可跨国比较的中国医院管理调查体系的构建研究

为了解中国医院的管理水平以及国际定位,本研究团队根据国际上已广泛使用的世界管理调查方法论,研发了中国医院管理调查工具(Chinese hospital management survey,CHMS),包括20个管理实践的调查项目,涵盖四个主要管理维度:运营管理、绩效管理、目标管理和人才管理,形成了四维度、20项的医院管理模型。基于CHMS方法,在全国400多家有代表性的医院中抽取科室管理人员开展了调查研究,并对调查结果进行模型验证研究。结果显示,该模型卡方/自由度(CMIN/DF)为2.209,近似均方根误差(RMSEA)为0.039,表现出良好的模型拟合。其它拟合优度指数如GFI,IFI和CFI等均在0.9以上,都符合良好拟合模型的标准。本研究表明,CHMS已经在中国医院管理实践中得到验证,可作为有效的调查方法来测量和评价中国医院管理水平,并为中国医院管理水平的跨国比较提供通用研究平台。     

联合检测网织血小板、血小板生成素在血小板减少症中的临床意义

网织血小板 (ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｄｐｌａｔｅｌｅｔｓ,ＲＰ)是新从骨髓中释放的血小板 ,具有较高的止血活性 ,许多学者认为ＲＰ百分率(ＲＰ % )及其绝对值对于分析血小板生成动力学及血小板减少机制有重要意义[1 ,2 ] 。血小板生成素 (Ｔｐｏ)是巨核细胞分化、成熟和血小板生成的特异性调节因子[3] ,被认为是诊断血小板减少的重要指标[4 ] 。我们对 10 7例血小板减少患者的ＲＰ及Ｔｐｏ水平进行了检测并探讨了其临床意义。现报告如下。对象和方法1　研究对象　①健康对照组 :正常健康献血员及健康体检者 6 0名 ,男 2 8名 ,女 32名 ,年龄 …     

慢白灵治疗慢性粒细胞白血病及对血清sIL-2R,IL-2水平影响的研究

目的 :研究慢性粒细胞白血病 (CML)患者免疫功能变化 ,探讨慢白灵胶囊对CML患者免疫功能的影响及其疗效机理。方法 :采用ELISA法测定实验组、对照组CML治疗前后及正常人血清可溶性白细胞介素 2受体 (sIL - 2R) ,白细胞介素2 (IL - 2 )水平 ,实验组采用慢白灵胶囊治疗 ,对照组用靛玉红治疗 ,均采用单盲法。结果 :(1)CML患者血清sIL - 2R明显高于正常组 (P <0 .0 1) ,而IL - 2则明显低于正常组 (P <0 .0 1) ;(2 )使用慢白灵胶囊治疗后 ,升高的sIL - 2R水平有明显回落 (P<0 .0 1) ,而降低的IL - 2水平则有明显升高 (P <0 .0 1) ,且疗效优于靛玉红对照组 (P <0 .0 1)。结论 :CML患者存在着免疫抑制 ,慢白灵胶囊能在一定程度上解除免疫抑制 ,这也许正是慢白灵取得疗效的机理所在 ,也是其疗效优于靛玉红的原因