真菌源性CD::UPRT联合基因治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究5-FC/CD：：UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6的杀伤效应。方法扩增yCD：：UPRT融合基因并构建含yCD：：UPRT基因的重组表达载体；载体转染包装细胞PT67,所获重组病毒转染胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆；用MTT法检测不同浓度5-FC对CD：：UPRT转基因细胞的杀伤效应。结果PCR法扩增出全长CD：：UPRT基因,经测序证实序列正确,重组逆转录病毒表达载体pLXSN-yCD：：UPRT经双酶切获目的条带,载体转染包装细胞获重组逆转录病毒(滴度达3．5×10~6CFU/ml)并转染C6,经筛选获得转基因阳性克隆C6-yCD：：UPRT细胞株,检测显示该细胞株有效表达目的基因。当5-FC终浓度≥10μmol/L时,实验组与对照组的细胞增殖力出现显著差异(P＜0．01),5-FC作用96h后电镜观察到凋亡小体。结论5-FC/yCD：：UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6有明显的杀伤作用。     

逆转录病毒介导Fcy∷Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究

目的:研究融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果。方法:扩增Fcy∷Fur基因并构建Fcy∷Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcy∷Fur;载体转染包装细胞PT67获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy∷Fur转基因细胞的杀伤效应。结果:PCR法扩增出全长Fcy∷Fur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-Fcy∷Fur滴度为3×106CFU/ml;RT-PCR检测显示Fcy∷Fur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTT法检测细胞有明显的杀伤效应。结论:融合型自杀基因Fcy∷Fur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用。     

5-FC/CD∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤的治疗作用

目的探讨5-氟胞嘧啶(5-FC)/CD∷UPRT联合基因系统对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法以逆转录病毒介导构建C6-CD∷UPRT细胞系,应用立体定向技术移植C6-CD∷UPRT细胞至SD大鼠尾状核,设立C6-pLXSN和C6细胞为对照组,建立脑胶质瘤荷瘤鼠模型,应用5-FC腹腔注射治疗,观察肿瘤大小、大鼠存活期、电镜观察细胞形态和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡指标的变化。结果5-FC/CD∷UPRT治疗组(A组)与各对照组相比,A组肿瘤直径平均为(4.2±0.7)mm,远小于对照组的(8.3±1.3)mm,(P<0.01);对照组平均存活期(32±3)d,A组为(85±2)d(P<0.01);A组电镜显示核染色质分裂明显,并见典型的凋亡小体;A组肿瘤细胞中凋亡细胞所占百分率为19.36%。结论5-FC/CD∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤有显著的治疗效果。     

凝血及纤溶指标检测评估脑外伤伤情的价值研究

目的探讨凝血及纤溶指标评估脑外伤伤情的价值。方法选择80例脑外伤患者作为观察组,分别于入院时、伤后第4天、第8天测定其血浆组织因子(TF)、D-二聚体(D-D)水平,再按伤情及有无迟发性颅内血肿或血肿增大进行组间比较。另选20例年龄及性别与观察组相匹配的健康者作为对照组。结果观察组患者TF、D-D水平入院时显著升高,此后水平逐渐下降。GCS>8分患者及血肿无变化患者TF、D-D水平下降较快,第8天接近正常范围,与对照组比较无显著性差异;GCS≤8分患者TF、D-D水平持续高于对照组和GCS>8分患者。血肿无变化组入院时最高,伤后8 d时TF接近正常上限值;血肿变化组的TF、D-D水平均持续高于对照组和血肿无变化组。结论早期检测脑外伤患者凝血及纤溶功能指标对伤情评估具有重要的临床意义。     

三维EH复合型人工颅骨板修补颅骨缺损53例

目的:观察三维EH复合型人工颅骨板在修补颅骨缺损中的作用.方法:回顾性分析2004-07/2007-05泰兴市人民医院神经外科住院患者53例,男31例,女22例;年龄19～68岁,均符合颅骨修补适应证.颅骨缺损原因:创伤41例,高血压7例,肿瘤3例,动脉瘤2例.13例患者为双侧颅骨缺损.额部颅骨缺损5片(其中合并眶部严重缺损2例),颢部9片,额颞部42片,颞顶部3片,项枕部4片,额顶部3片.单片最小缺损面积为4 cm×6 cm,最大缺损面积12 cm×18 cm.全部患者均采用经螺旋CT(层厚≤5 mm)扫描、CAD三维重建成像、快速成型技术顶制的三维EH复合型人工颅骨板进行颅骨修补.观察有无切口感染、排异反应及并发症发生.结果:53例患者均获得随访,平均随访18个月.患者对塑形的满意率达100%.其中2例患者曾分别于术后4 d和1周时出现轻度皮瓣下积液,经穿刺抽吸加压包扎同时应用抗生素预防感染处理后积液于短时间内消失.未见其他颅骨修补术后常见的并发症.结论:三维EH型复合人工颅骨板具有良好的生物相容性,操作方便,外形满意,并发症少,是一种理想的颅骨修补材料.     

逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗胶质瘤的体内试验研究

目的构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡。结果PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制。FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体。结论AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。     

早期高压氧联合依达拉奉对颅脑外伤患者血管活性因子的影响及疗效

目的：研究重型颅脑损伤患者高压氧（HBO）联合依达拉奉治疗重型脑外伤后NO、ET的变化,并观察治疗效果。方法随机选取30例符合标准的急性重度颅脑外伤患者作为治疗组,同时随机抽取符合标准的30例患者作为对照组,予常规治疗。治疗组在常规治疗的基础上,给予早期高压氧治疗,并予依达拉奉静滴,30 mg/d,共用28 d,于伤后1 d、4 d、14 d用放射免疫法检测血浆NO-1、ET结果的变化。伤后3个月行预后判断GOS评分比较。结果治疗组和对照组治疗前血浆指标差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后4 d、14 d,两组数据差异均有统计学意义（P＜0.01）,且治疗组患者GOS评分明显好于对照组。结论高压氧联合依达拉奉治疗能有效降低颅脑外伤患者血清NO、ET的数值,改善颅脑外伤的血液流变,从而改善患者预后。     

颅脑外伤后血浆凝血及纤溶指标的变化及意义

目的 检测脑外伤患者的凝血及纤溶指标,分析其脑外伤后的变化及与伤情和预后的关系.方法 选取80例脑外伤患者,测定入院时、伤后第4及第8天血浆组织因子(TF)和D-二聚体(D-D)水平,与对照组比较,再按格拉斯哥昏迷评分(GCS)及预后进行组间比较.结果 脑外伤患者的TF、D-D水平于入院时较对照组显著升高(P<0.01),此后逐渐下降,第4天时仍高于对照组(P<0.01),第8天时接近正常范围.GCS≤8分组的TF、D-D水平持续高于GCS>8分组和对照组(P<0.01);GCS>8分组伤后8 d时的TF水平基本降为正常值,而GCS≤8分组TF、D-D水平持续高于对照组和GCS>8分组(P<0.01).预后不良和死亡组同样高于预后良好组(P<0.01).结论 脑外伤患者早期存在高凝和继发性纤溶功能亢进,早期检测凝血纤溶功能对脑外伤伤情评估和预后具有重要的临床意义.     

颅脑外伤后凝血及抗凝因素与其预后的临床研究

目的检测脑外伤患者的凝血及纤溶因素,分析其脑外伤后的变化及与伤情和预后的关系,探讨其临床意义。方法选取80名脑外伤患者,测定入院时、伤后第4天及第8天血浆组织因子(TF)和D-二聚体(D-D)水平,与正常对照组比较,再按格拉斯哥昏迷评分(GCS)及预后进行组间比较。结果脑外伤患者的TF、D-D水平于入院时较对照组显著升高(P<0.01),此后逐渐下降,第4天时仍高于对照组(P<0.01),第8天的时候接近正常范围。GCS≤8分组的TF、D-D水平持续高于GCS>8分组和对照组(P<0.01);GCS>8组伤后8天时的TF水平基本降为正常值,而GCS≤8分组TF、D-D水平持续高于对照组和GCS>8分组(P<0.01)。预后不良和死亡组同样高于预后良好组(P<0.01)。结论脑外伤患者早期存在高凝和继发性纤溶功能亢进,早期检测凝血纤溶功能对脑外伤伤情评估和预后具有重要的临床意义。     

逆转录病毒介导Fcy::Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究

目的研究融合型自杀基因FcyFur联合5-FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果.方法扩增FcyFur基因并构建FcvFur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-FcvFur;载体转染包装细胞PT67获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;以MTT法和FCM法检测5-FC对FcyFur转基因细胞的杀伤效应.结果PCR法扩增出全长FcyFur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-FcyFur滴度为3×106CFU/ml;RT-PCR检测显示FcyFur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTT法检测细胞有明显的杀伤效应.结论融合型自杀基因FcyFur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用.