灵芝多糖调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞恶性表型

目的：观察灵芝多糖对肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法：将肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7作为主要研究对象,设立空白组和灵芝多糖低、中、高组（3.5、7、14 g·L-1）。细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测灵芝多糖对肝癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测灵芝多糖对肝癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术测定灵芝多糖对肝癌细胞周期的影响;Hoechst33258染色法测定灵芝多糖对肝癌细胞凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹法检测灵芝多糖对肝癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平的影响。结果：与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组SK-HEP-1和Huh-7细胞增殖和迁移能力降低（P<0.05）;灵芝多糖低、中、高组G1期细胞比例升高（P<0.05）,S期和G2期细胞比例降低（P<0.05）;灵芝多糖低、中、高组可以诱导2种肝癌细胞凋亡,并且药物浓度越高作用越明显。与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组PI3K和Akt的磷酸...     

检测DENV-2活病毒含量RTCA标准曲线法的建立

目的利用实时无标记细胞分析系统(real-time cellular analysis,RTCA)建立半数细胞指数时间(CIT50)与病毒滴度(TCID50)相关性的标准曲线,评估RTCA技术在监测2型登革病毒(DENV-2)感染BHK细胞后引发细胞病变效应(CPE)中的可行性和应用价值。方法检测不同培养条件下BHK细胞的CI值变化,筛选合适的初始细胞接种密度及血清浓度;应用RTCA分析已知不同TCID50滴度DENV-2感染BHK细胞的CIT50值,构建CIT50-TCID50标准曲线,计算回归方程;收集DENV-2感染C6/36细胞后第1~4d的培养上清(D1,D2,D3,D4),利用RTCA法和TCID50法分别检测上清中DENV-2滴度,分析CIT50-TCID50标准曲线法的灵敏度和可行性。结果 BHK细胞以初始接种密度为2×104个/孔,血清浓度为2%的培养条件为最佳;不同滴度DENV-2感染后BHK细胞的生长曲线均左移,CIT50与TCID50间呈线性负相关,线性方程为y=-7.007x+75.546(R2=0.9854);不同时间感染C6/36细胞培养上清中病毒含量(logTCID50/mL):RTCA标准曲线法为4.90±0.05(D2)、6.18±0.20(D3)、6.04±0.10(D4);传统TCID50法为0(D1)、6.25±0.49(D3)、5.87±0.35(D4)。结论利用RTCA技术建立的CIT50-TCID50标准曲线法,可用于已知DENV-2在BHK细胞的定量检测,结果较TCID50法更客观,且该法操作便捷且灵敏度高,为评估DENV-2感染性活病毒颗粒的毒力提供了新的技术手段。     

急进高原遂行任务对汽车兵心理应激和心理弹性的影响

目的探讨由低海拔环境急进高海拔环境遂行军事运输任务对汽车兵心理应激与心理弹性的影响,为高原汽车兵心理应激干预提供科学依据。方法以由低海拔环境急进高海拔环境执行军事运输任务的川藏线某部汽车兵126人为研究对象,选取症状自评量表(SCL-90)、状态-特质焦虑问卷(STAI)、特质应对方式问卷(TCSQ)、艾森克个性问卷(EPQ)、心理弹性量表(CD-RISC)作为心理应激及复原力指标,在执行任务前3 d(营区,海拔600 m)、执行任务后第2 d(藏区,海拔4100 m)进行团体心理测试。结果 (1)执行任务后,汽车兵SCL-90总均分(1.92±0.67)及各因子分均显著高于执行任务前和常住高原汽车兵(P<0.05或P<0.01);CD-RISC中坚韧性、力量、乐观因子分及TCSQ中积极应对因子分均显著低于执行任务前(P<0.05或P<0.01);TCSQ中消极应对因子分及STAI中状态焦虑、特质焦虑因子分均显著高于执行任务前(P<0.05或P<0.01)。(2)执行任务后汽车兵SCL-90总分及STAI因子分与消极应对、稳定性及精神质因子分呈显著正相关(r=0.214~0.715,P<0.01),与积极应对、内外向、掩饰性、坚韧性、乐观性、力量性因子分呈显著负相关(r=-0.169~-0.599,P<0.01)。回归分析结果显示,对执行任务后汽车兵SCL-90总分有显著影响的因素依次为:消极应对、特质焦虑、乐观性、状态焦虑、稳定性、坚韧性、精神质,7个变量的决定系数R2=0.65。结论急进高海拔环境执行军事运输任务后,汽车兵心理健康水平降低;人格特质、应对方式和心理弹性是影响汽车兵心理应激和心理健康的重要中介调节因素。     

综合心理行为训练对新兵心理应激的干预效果

目的探讨综合性心理行为训练对集训期新兵心理应激的干预效果,寻求调控新兵心理应激和促进心理健康的有效方法。方法以某部集训期新兵为研究对象,随机分为干预组(216人)和对照组(220人)。对照组进行常规军事训练;干预组在此基础上进行综合性心理行为训练,共2个月。采用应激反应问卷(SRQ)、状态特质焦虑问卷(STAI)、艾森克个性问卷(EPQ)、特质应对方式问卷(TCSQ)于干预前和干预第60天进行心理应激及相关因素评估。结果 (1)干预组干预前SRQ总分及各因子分与消极应对、状态焦虑、特质焦虑、神经质及精神质呈显著正相关(r=0.113~0.698,P均0.01),与内外向、掩饰性呈显著负相关(r=-0.188~-0.304,P均0.01);多元线性回归分析显示,影响SRQ总分的因素从大到小依次为:消极应对、神经质、状态焦虑、精神质,这4个变量的决定系数R2=0.560。(2)干预组干预第60天SRQ总分和各因子分均显著低于干预前和对照组(P0.05,P0.01);而在同一时间点上,对照组SRQ总分和各因子分前后比较,差异均无显著性(P0.05)。结论新兵心理应激受多因素影响,综合性心理行为训练能有效减轻新兵心理应激,促进心理健康。     

盐酸坦索罗辛结构解析

目的:通过波谱学对盐酸坦索罗辛化学结构进行分析。方法:测定了盐酸坦索罗辛的核磁共振氢谱(1HNMR)、无畸变极化转移增强谱(DEPT)、核磁共振碳谱(13CNMR)、氢-氢相关谱(1H-1HCOSY)、碳氢相关谱(HMQC)、碳氢远程相关谱(HMBC)、质谱(MS)、红外光谱(FT-IR)和紫外光谱(UV),并进行结构分析和讨论。结果:该化合物的1HNMR和13CNMR谱的所有谱峰均得到合理的归属,其FT-IR吸收峰所对应的官能团振动形式、MS的分子主要碎片以及紫外特征吸收均能得到合理的解释。结论:上述各种图谱分析数据均能与盐酸坦索罗辛的结构式相吻合。     

HPLC法测定恩替卡韦原料药含量及其有关物质

目的:建立以高效液相色谱法测定恩替卡韦原料药含量及其有关物质的方法。方法:色谱柱为Luna C18,流动相为乙腈(梯度洗脱),流速为1·0mL·min-1,检测波长为254nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:恩替卡韦检测浓度的线性范围为0·03345~0·1672mg·mL-1(r=0·99998);平均回收率为100·09%,RSD=0·20%;有关物质含量为0·54%~1·48%。结论:该方法简便、准确、专属性强,可用于恩替卡韦的含量测定。     

盐酸坦索罗辛缓释片的制备及其体外释药特性研究

目的:制备盐酸坦索罗辛缓释片,并考察其体外释药特性及机制。方法:以羟丙基甲基纤维素(HPMC)为骨架材料制备坦索罗辛缓释片;以累积释放度为指标,评价多种因素对体外释放速率的影响,并与普通片比较缓释性。结果:HPMC用量及制片压力对释药影响最大,二者最佳值分别为25%、8～11kg时缓释效果最佳,缓释片与普通片0.5h时体外累积释放度分别为10%、50%。结论:所制缓释片缓释效果优于普通片,其释药特性为药物扩散与溶蚀协同作用,释放机制为非Fick扩散。     

抗氧化法制备高旋光度的新型手性拆分试剂R-四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸

目的对R-四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸合成产率的影响因素进行探讨,并通过抗氧化方法优化合成工艺。方法以L-半胱氨酸和二硫化碳为起始原料,在硫酸铜作催化剂的条件下合成目的化合物,比较不同抗氧化方法的结果,并对亚硫酸钠的抗氧化进行了优化。结果产品收率提高到75%,比旋度高达[α]2D0-102.1,均比原来提高了约10%,产物的化学结构经IR和1HNMR确定证。结论优化后的方法简便、有效。     

负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响

目的 包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-miR149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响.方法 全基因合成microRNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载microRNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-miR149对人肝癌细胞株增殖的影响.结果 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5× 109 pfu/ml.采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒.采用PCR扩增,Ad-miR149可获得腺病毒及microRNA-149特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-miR149可显著抑制肝癌细胞株增殖.结论 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用.