琥珀酸盐受体介导Foxm1表达促进肺纤维化

目的:探讨琥珀酸盐受体(succinate receptor,SUCNR1)在肺纤维化发生发展中的作用和机制.方法:用SUCNR1敲除(SUCNR1-/-)小鼠构建博来霉素诱导的肺纤维化模型,观察对肺纤维化的影响.组织生长因子[β1(tissue growth factor β1,TGF-β1)刺激SUCNR1-/-原代肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖、Western blot检测细胞外基质(Collagen Ⅰ和α-SMA)生成.检测各组肺纤维化小鼠肺组织中叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,Foxm1)表达,使用Foxm1抑制剂处理TGF-β.1和琥珀酸盐刺激的原代肺成纤维细胞,观察对细胞增殖和细胞外基质生成的影响.结果:SUCNR1-/-小鼠肺纤维化较SUCNR1wt明显减轻.刺激SUCNR1-/-原代肺成纤维细胞增殖能力、Collagen Ⅰ和α-SMA生成明显降低.Foxm1在博来霉素诱导的肺纤维化模型中明显升高,但在SUCNR1-/-模型中明显减少;抑制Foxm1可减少TGF-β1和琥珀酸盐诱导的肺成纤维细胞增殖、Collagen Ⅰ和α-SMA生成.结论:SUCNR1参与了肺纤维化的发生发展,其可能机制是通过促进Foxm1表达而启动肺成纤维细胞.     

烟熏联合脂多糖气管内滴注建立原发性高血压大鼠慢性肺阻塞模型

目的通过单纯烟熏法和烟熏联合气管内滴入脂多糖法建立符合慢性肺阻塞(COPD)病人病理生理特点的原发性高血压大鼠COPD模型,比较两种方法复制COPD模型的效果。方法将15只原发性高血压雄性大鼠随机分为3组,每组5只。其中一组为正常对照组,其他两组分别为单纯烟熏(CS)组和脂多糖联合烟熏(LPS+CS)组建立COPD模型组。八周后观察动物一般情况,测量大鼠肺功能,肺组织病理学;Western blot检测各组肺组织中肺泡表面活性物质结合蛋白A(SP-A)、核蛋白NF-κB、Histone、胞浆蛋白p-Iκ-Kα/β、Iκ-Kα/β、IκB-α蛋白表达;qRT-PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA表达的变化。结果两个模型组大鼠消瘦,伴有间歇咳嗽和气促。有创肺功能检测CS组气道阻力(RI)较对照组增高,但差异无统计学意义;气峰流速(PEF)较对照组明显降低。LPS+CS组PEF明显低于对照组和CS组,而RI较对照组和CS组明显增高(P<0.05)。肺组织HE染色显示两个模型组大鼠均具有慢性支气管炎和肺气肿的典型病变,CS组和CS+LPS组平均肺泡数(MAN)明显低于对照组,而肺组织平均内衬间隔(ML I)和肺泡破坏指数(DI)明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CS+LPS组ML I和DI值较CS组明显升高,MAN值较CS组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠肺组织中,SP-A和IκB-α表达水平在CS+LPS组和CS组中表达较对照组明显减少(P<0.05),CS+LPS组较CS组明显减少(P<0.05);而NF-κB表达水平及Iκ-Kα/β的磷酸化水平表达在CS+LPS组和CS组中表达较Control组明显增加(P<0.05),CS+LPS组较CS组明显增加(P<0.05)。CS和CS+LPS组大鼠肺组织中TNF-α组和IL-6 mRNA表达水平较正常组明显增加(P<0.05),且CS+LPS组TNF-α和IL-6 mRNA表达水平较CS组明显增加(P<0.05)。结论烟熏加气管注内毒素及单纯熏香烟,在原发性高血压大鼠上可复制较理想的COPD模型,但烟熏加气管注内毒素较单纯熏香烟建立的COPD大鼠模型更为理想。     

胆管结扎诱导的肝纤维化大鼠肝脏上皮间质表型的变化

摘要：目的观察胆管结扎诱导肝纤维化大鼠肝细胞是否发生上皮间质表型变化。方法24只Wistar大鼠分为假手术组和胆管
结扎组,运用HE及Massion染色检测肝纤维化变化;免疫印迹方法检测大鼠肝脏中上皮标志E-钙蛋白、白蛋白和I型胶原、波形
蛋白的表达;采用免疫荧光双染的方法检测成纤维细胞特异性蛋白(FSP-1)+波形蛋白;FSP-1+I型胶原;FSP-1+白蛋白;白蛋白+
I型胶原等蛋白在细胞中的定位。结果胆管结扎组大鼠的ISHAK纤维化评分（4.42±1.16 vs 0.00±0.00,P=0.000）,METAVIR纤
维化评分（3.42±0.67 vs 0.00±0.00,P=0.000）及Massion 染色中胶原含量(0.30±0.06 vs 0.11±0.07,P=0.000)较假手术组明显增
高。与假手术组相比,胆管结扎组中上皮标志白蛋白（0.53±0.63 vs 1.12±0.01,P=0.000）、E-钙蛋白（0.21±0.01 vs 0.44±0.01,P=
0.000）明显减少,而I型胶原（8.21±0.12 vs 0.24±0.01,P=0.000)、波形蛋白（3.14±0.01 vs 0.37±0.01,P=0.000）显著增高。胆管结扎
组中共表达FSP-1+波形蛋白、FSP-1+I型胶原、FSP-1+白蛋白、白蛋白+I型胶原的细胞较假手术组明显增多。结论在胆管结扎
组诱导的肝纤维化大鼠肝脏中上皮标记减少,间质标志增加,提示有部分上皮细胞可能发生了上皮间质表型转化。
     

TSLP siRNA干预对哮喘模型大鼠气道重塑的作用及对ERK信号通路的影响

目的 分析胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)小干扰RNA(siRNA)干预对哮喘模型大鼠气道重塑的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响.方法 选取清洁及健康的雄性大鼠56只,随机选取14只为正常组,剩余42只建立哮喘模型,分为模型组、空白对照组和TSLP siRNA干预组,各14只.Im-age-Pro Plus软件计算出大鼠的小气道支气管壁总管壁面积、小气道支气管壁内管壁面积和支气管壁平滑肌的面积,生理记录仪记录大鼠的肺顺应性和肺弹性阻力,显微镜下观察大鼠白细胞数量、嗜酸性粒细胞(EOS)数量,并计算出EOS/白细胞的值,Western blot法检测细胞外信号调节激酶-1(ERK1)、伤害性信息与即刻早期基因(C-FOS)、血小板衍生因子(PDGF)蛋白水平表达.结果 与模型组、空白对照组相比,TSLP siRNA干预组小气道支气管壁总管壁面积、小气道支气管壁内壁面积、支气管壁平滑肌面积均减小,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组、空白对照组相比,TSLP siRNA干预组肺顺应性均升高,肺弹性阻力均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组、空白对照组相比,TSLP siRNA干预组白细胞、EOS/白细胞均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组、空白对照组相比,TSLP siRNA干预组ERK1、C-FOS、PDGF通路蛋白均降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TSLP siRNA干预通过调控ERK信号通路相关蛋白,改善气道重塑指标,提高大鼠的肺顺应性,降低大鼠的肺弹性阻力,抑制炎性反应.     

肺成纤维细胞参与支气管哮喘气道重塑研究进展

支气管哮喘( 哮喘) 气道重塑可引起不可逆性气道阻塞和顽固性气道高反应性。哮喘患者气道上皮下肺成纤 维增殖、转化为肌成纤维细胞及大量细胞外基质(ECM) 合成是导致上皮下纤维化的主要机制之一。近年来,上皮下 肺成纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用越来越受关注,研究也发现很多哮喘治疗药物也对肺成纤维细胞有一定的 影响。明确药物对肺成纤维细胞的影响,对哮喘气道重塑的治疗有重要的意义。     

晚期糖基化终末产物受体促进甲苯二异氰酸脂哮喘小鼠MUC5AC表达及气道黏液高分泌

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号对甲苯二异氰酸脂(TDI)哮喘小鼠黏蛋白MUC5AC表达及气道黏液分泌的影响.方法 在体内水平上建立TDI小鼠哮喘模型,实验分4组:对照组、TDI溶剂(AOO)致敏激发组、TDI致敏激发组、RAGE抑制剂处理组.采用糖原染色评估各组间气道黏液分泌情况,Western blotting及免疫组化法检测MUC5AC表达水平.同时通过Western blotting检测各组间细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路磷酸化水平.在体外水平配制TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA)复合物,刺激人支气管上皮细胞(16HBE)及经慢病毒转染空载体和shRNA-RAGE载体的人支气管上皮细胞,检测各组MUC5AC及ERK通路分子表达情况,加入ERK抑制剂U0126后,进一步评估MUC5AC mRNA表达情况.结果 与对照组相比,TDI哮喘组小鼠糖原染色阳性率及MUC5AC表达升高(P<0.05),p-ERK表达增多(P<0.05),RAGE抑制剂处理组糖原染色阳性率及MUC5AC表达较TDI组减少(P<0.05).同时,p-ERK表达下降(P<0.05).体外水平,与对照组相比,TDI-HSA处理组MUC5AC mRNA及p-ERK表达增多(P<0.05),sh RNA-RAGE组MUC5AC mRNA及p-ERK表达下调(P<0.05),ERK抑制剂预处理组,MUC5AC mRNA表达下调(P<0.05).结论 TDI小鼠哮喘模型下RAGE可能通过激活ERK通路促进黏蛋白MUC5AC的表达及黏液高分泌的发生.