柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(high glucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/e NOS信号通路的影响。方法:利用HG(33 mmol/L glucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72 h)后,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中e NOS和磷酸化e NOS(p-e NOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100 mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72 h),用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKT inhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24 h,再用50 mg/L的Nar处理24 h,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,检测细胞上清中NO的水平,以及e NOS、p-e NOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50 mg/L Nar预处理HUVECs 24 h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-e NOS的水平升高(P0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-e NOS和NO水平的作用完全取消(P0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/e NOS信号通路介导的。     

经颅直流电刺激对认知损害模型大鼠学习、记忆功能的影响

目的观察经颅直流电刺激(tDCS)对认知损害模型大鼠学习、记忆能力及海马皮质神经细胞形态的影响, 并探讨大鼠认知功能损害行为学特征与海马CA1区颗粒层厚度的相关性。方法采用随机数字表法将30只SD大鼠分为观察组、模型组及对照组, 每组10只大鼠。通过腹腔注射东莨菪碱将观察组、模型组大鼠制成认知损害动物模型, 对照组大鼠则同期注射生理盐水。制模后观察组大鼠给予tDCS干预, 模型组、对照组大鼠电极放置方法同观察组, 但期间不予电刺激, 3组大鼠均连续干预16 d。待干预结束后采用穿梭箱及Morris水迷宫实验检测各组大鼠行为学变化;于制模后第30天时各组大鼠均断头取脑, 观察其海马及皮质神经元形态学改变, 同时测量海马颗粒层厚度。结果干预后观察组被电击次数[(60.5±6.67)次/min]较模型组[(145.8±19.31)次/min]显著减少(P<0.05), 寻找平台时间[(50.4±3.68)s]较模型组[(91.9±3.09)s]显著缩短(P<0.05), 穿越D象限平台次数[(23.3±3.56)次/分]较模型组[(15.3±3.43)次/分]显著增加(P<...     

43例会阴部赘生物的形态观察及人乳头状瘤病毒抗原的检测

对43例会阴部乳头状赘生物进行形态学观察及人乳头状瘤病毒抗原(HPV—AS)的检测,结果诊断为尖锐湿疣(CA)29例(67.4％),其中HPV—Ag阳性24例(82.8％);湿疣样病变14例(32.6％),HPV—Ag均为阴性。赘生物肉眼分两型,第Ⅰ型菜花或鸡冠状,17例全为CA,具有典型的空泡细胞等组织相,其中15例HPV—Ag阳性;第Ⅱ型细乳头状26例,其中12例具有典型CA组织相,9例HPV—Ag阳性。另14例切片中无空泡细胞而见空泡样细胞,HPV—Ag全为阴性,诊断为湿疣样病变。     

星形细胞瘤瘤细胞核的密度参数和形状参数的分析

运用体视学原理,自制方格网络系统,对48例星形细胞瘤各个分级(1—4)的瘤细胞核进行了形态测量学分析。以密度参效反映瘤细胞核的大小、多少;以形状参数反映瘤细胞核形态的不均一性(多形性)。结果表明,各级瘤细胞核的体积密度参效和表面积密度参效,随着肿瘤分级的增加而显著性增大(P<0.01),瘤细胞核的比表面则相应减少;瘤细胞核的轴比及平均外径呈明显的递增趋势(P<0.05),表明星形细胞瘤随着分级的增高,核的体积增大,核的异型性(不均一性)增加。从形态上获得某种反映肿瘤生物学行为的信息,因此,瘤细胞核作为星形细胞瘤分级定量分析的一个重要指标,是一个既简单重复性又好的方法。     

PPARγ介导卡托普利改善高糖诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗的作用

目的研究卡托普利(captopril,Cap)对高糖(high glucose,HG,33 mmol·L-1)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制。方法首先观察Cap对HG(33 mmol·L-1)诱导的HUVECs IR的改善作用。实验随机分为5组,即正常对照(Control)组、IR组、IR+CapⅠ(1×10-6mol·L-1)组、IR+CapⅡ(1×10-5mol·L-1)组、IR+CapⅢ(1×10-4mol·L-1)组。其次证实Cap改善HG(33mmol·L-1)诱导HUVECs IR的作用是由PPARγ介导。实验随机分为6组,即Control组、IR组、IR+Cap(1×10-5mol·L-1)组、PPARγ抑制剂GW9662(PI,1.0μmol·L-1)组、IR+PPARγ抑制剂(IR+PI,1.0μmol·L-1)组、IR+Cap+PPARγ抑制剂(IR+Cap+PI,1.0μmol·L-1)组,除Control组和PI组外,所有各组先用含33 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养48 h,Cap各组再加不同浓度的Cap处理4 h,最后胰岛素(100 nmol·L-1)处理30 min,抑制剂组再加抑制剂(1.0μmol·L-1)处理1 h,最后进行指标检测。结果 IR组NO水平明显降低、ET-1含量明显升高,提示细胞已产生IR,但PPARγmRNA和蛋白表达水平与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05);Cap呈浓度依赖性逆转HG诱导NO和ET-1水平的改变,明显增加磷酸化PPARγ(PPPARγ)水平,说明其可明显改善HG诱导的IR,但对PPARγmRNA和蛋白表达水平无明显影响(vs IR,P>0.05);加PI处理后,Cap改善IR的作用完全取消,提示Cap改善IR的作用是由PPARγ介导。结论Cap可通过PPARγ介导改善高糖所致血管内皮细胞IR,其机制可能与PPARγ表达水平无关,而与PPARγ激活有关。     

针刺结合颈交感神经阻滞治疗椎动脉型颈椎病及其对血流动力学的影响

目的观察针刺结合颈交感神经阻滞治疗方法对椎动脉型颈椎病患者的疗效及对血流动力学的影响。方法选择诊断明确的椎动脉型颈椎病患者60例,随机分为对照组和治疗组各30例。对照组仅行针刺治疗,治疗组患者在针刺治疗后行颈交感神经阻滞治疗。1个疗程结束后评估治疗效果,运用TCD观察两种疗法治疗前后椎动脉、基底动脉Vs、Vd及Vm的变化并进行组间比较。结果两组总有效率及治愈率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组双侧椎动脉、基底动脉的Vs、Vd、Vm值经治疗后明显加快,接近或已经恢复到正常值范围,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论针刺结合颈交感神经阻滞治疗椎动脉型颈椎病疗效优于单纯针刺疗法,能显著改善椎-基底动脉血流。     

人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建人的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)基因的重组腺病毒载体。方法从人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中提取并扩增人PPARγcDNA目的片段,将该目的片段经AgeⅠ/NheⅠ酶切后插入经相同内切酶酶切后表达质粒(CMV-MCS-SV40-EGFP)得到重组穿梭质粒;再将该重组穿梭质粒与AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒(pBHG loxΔE1,3Cre)经Cre/loxP酶切重组,构建重组腺病毒(Ad-PPARγ);最后,将Ad-PPARγ感染HEK293T细胞,进行病毒的包装、扩增、纯化及滴度检测。结果通过PCR鉴定及基因测序分析,PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功;Western blot结果显示经包装及纯化的Ad-PPARγ感染HUVECs后,可显著上调HUVECs中PPARγ基因的表达。结论PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功,且能有效上调HUVECs中PPARγ基因的表达。     

星形细胞瘤的免疫组化研究 I GFAP.Vimentin与组织学分级的关系

应用GFAP及Vimentin(ABC法)对74例星形细胞瘤进行了免疫组织化学研究。发现所有肿瘤均有GFAP及Vimentin两种中间丝蛋白。GFAP阳性细胞数与组织学分级呈负相关,而Vimentin与组织学分级无明显关系。V/G值R可以说明星形细胞瘤的分化程度。GFAP及Vimentin有两种显色类型,即核周型与胞浆突起型,显色类型与组织学类型有关,而与组织学分级无关。GFAP的阳性细胞数与细胞密度呈负相关。Rosenthal纤维中心轴GFAP阴性,边缘部分则强阳性。