107例静注海洛因成瘾者TT病毒感染状况

目的：调查贵州地区静注海洛因成瘾者TT病毒感染状况。方法：以公布的TTV第1读码区序列设计两对寡核苷酸引物，用套式聚合酶链反应（nPCR)检测107例静注海洛因成瘾者血清中TTVDNA，以62列正常人为对照。同时用酶联免疫法测丙肝病毒抗体（抗HCV），逆转录套式聚合酶链反应（RT－nPCR)测庚肝病毒核糖核酸（HGVRNA）。结果：正常人TTVDNA阳性率6．45％，海洛因成瘾者25．23％。两组相比，差异有显著意义（P＜0．005）。成瘾者TTVDNA阳性率在男、女组间无差异，与注毒时间长短无相关（P＞0．05）。27例TTVDNA阳性成瘾者中，11例为单纯TTV感染，16 重叠HCV或HGV感染，其中TTV、HCV、HGV三重感染8例，TTV重叠HCV5例，重叠GCV3例。结论：贵州地区静注海洛因成瘾者中有TTV感染存在，感染率高低与性别、注毒时间长短无关。TTV可以单独感染，但与HCV、HGV的重叠感染率较高。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异检测方法的比较研究

目的 建立错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（mPCR-RFLP）检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区A1896、基本核心启动子（BCP）T1762/A1764双变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp、C启动子区长184 bp的基因片段,扩增产物分别经限制性内切酶Bsu36I、BclI酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896、BCP T1762/A1764双变异的方法,对127份HBsAg、HBV DNA阳性的HBV感染者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 127份血清中125（98.42%）份能用酶切、121（95.21%）份能用测序分析HBV前CA1896、BCP T1762/A1764状况.酶切与测序均成功的119份血清中,16份为前C区A1896变异株,34份为BCP T1762/A1764双变异株,21份为前C区A1896、BCP T1762/A1764联合变异株,48份为前C区G1896、BCP A1762/G1764野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为前C区A1896、G1896混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株;另1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异标本的5个克隆子均为前C区A1896变异株,酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论 与测序法相比,本方法较简便、特异性强,能区分野毒株、变异株混合感染,适合较大样本分析,可用于流行病学调查及临床筛查.     

132例乙型肝炎病毒感染者基本核心启动子变异分析

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者基本核心启动子（BCP）变异情况。方法收集HBV感染者血清标本132份(HBV DNA均阳性),用半巢式聚合酶链反应扩增HBV C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测BCP T1762/A1764变异。用S基因错配聚合酶链反应（PCR RFLP）法确定HBV基因型。结果51例乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为27.45%,81例HBeAg阴性患者BCP T1762/A1764双变异检出率为62.96%,两组比较,差异有高度显著性（χ2=15.79,P＝0.00）。 BCP T1762/A1764双变异的HBV感染者B基因型检出率为33.85%,明显低于C基因型的检出率66.15%（χ2=24.25,P＝0.00）。结论HBV感染者普遍存在BCP T1762/A1764双变异,以C基因型感染者多见。     

乙型肝炎病毒S基因限制性片段长度多态性分型方法的建立及应用

目的 建立乙型肝炎病毒(HBV)S基因片段聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(RFLP)的基因分型方法并用于基因型与临床疾病谱关系的研究。 方法 比较GenBank中124株各基因型HBV全序列的S基因核苷酸序列及13株单独S基因序列,设计利用限制性内切酶Mbo Ⅰ、BsTN Ⅰ、BsmA Ⅰ、HpaⅡ酶切S基因片段鉴定HBV基因型(A-F)的方法。对贵州地区176份乙型肝炎患者血清进行基因分型并分析基因型与疾病谱的关系。直接测序2份B型和3份C型毒株的PCR扩增产物,以验证本酶切分型方法的正确性。 结果 测序结果证明本方法能够准确鉴定基因型。在176份标本中,B型100份(56.8％),C型76份(43.2％),未发现其他基因型。B型中无症状携带者(ASC)比例(40.0％)高于C型(15.8％),x2=12.16,P<0.005;慢性中度比例(14.0％)低于C型(31.6％),x2=7.88,P<0,005。 结论 本S基因片段PCR-RFLP基因分型方法简便、准确。贵州地区存在HBV B和C基因型。     

HCVNS5B区序列克隆和重组质粒的构建

选ＨＣＶ２ｂ基因型的ＮＳ５Ｂ区序更合成引的，以ＲＴ－ＰＣＲ从慢性丙肝病人血清中扩增一段４０１ｂｐ的ｃＤＮＡ片断作目的基因，插入ｐＴＤ－Ｔ７的多克隆位点，构建了重组质粒ｐＴＤ－ＨＣＶ－ＮＳ５Ｂ。应用ＥＣＯＲＩ ＢａｍＨＩ双切出克隆ＨＣＶ基因，酶切片断的分子量与预期相符。用载体序列特异的通用引物进行测序分析证实ｐＴＤ－ＨＣＶ－ＮＳ５Ｂ中克隆基因是ＨＣＶ２ｂ的ＮＳ６Ｂ６序列，且为正方向插入。     

贵州存在戊型病毒性肝炎

对180例病毒性肝炎患者进行了血清抗-HEV的检测,并对急性肝炎进行了病原学分型研究。抗-HEV总阳性率为11.11％(20/180)。亚急性重型肝炎患者血清抗-HEV阳性率最高达33.33％(2/16),急性肝炎和慢性活动性肝炎血清抗-HEV的阳性率分别为11.13％(17/154)与7.14％(1/14)。17例抗-HEV阳性的急性肝炎患者血清学上无甲、乙、丙、丁肝炎病毒、CMV和EBV感染标志。戊型肝炎在急性肝炎中的比例为11.03％。结果提示贵州存在有戊型肝炎。     

ELISA和套式PCR相结合检测血液病患者丙型肝炎病毒感染

HCV主要经血传播，供血者作抗一HCV筛查前（筛前），本地区血液病患者有较高的HCV感染率[1]。为了解筛查后（筛后）血液病患者HCV感染状况，我们采用第二代EllSA和套式peR相结合的方法对92例血液病患者进行了HCV感染率检测，并探讨有关问题。1资料和方法1．至病例选择：1996年8月至1997年8月我院血液病房住院的血液病患者92例，男45例，女47例，年龄14－78岁，平均扬．8岁。其中急性白血病（AL）四例，慢性白血病（CL）6例，骨髓增生异常综合征（MDS）6例，淋巴瘤6例，多发性骨髓瘤5例，恶性组织细胞病（恶组应例，骨髓纤维化2例…     

贵州省四城市乙型肝炎病毒感染者病毒基因型调查研究

目的 调查贵州省4城市乙型肝炎病毒（HBV）感染者的病毒基因型及其与临床的关系。方法 选择贵阳、遵义、凯里、都匀4城市慢性HBV感染患者共786例，其中无症状携带者（ASC）346例，慢性肝炎（CH）313例，肝硬化（LC）77例，肝细胞肝癌（HCC）50例。用S基因限制性片段长度多态性确定基因型，直接测序分析B基因亚型，比较主要基因型地区分布及临床特征。结果 786例中，B基因型497例（63．23％），C型275例（34．99％），A型7例（0．89％），D型7例（0．89％），未发现E、F型。B型的分布：凯里市最高（96．04％），遵义、都匀市其次（78．79％、64．52％），贵阳市最低（53．14％）。C型的分布，贵阳（45．84％）高于都匀（34．41％）、遵义（13．13％）及凯里市（3．96％），差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。94例B型感染者中，93例为Ba（98．94％）、1例为目亚型。从ASC、CH、LC到HCC组，B型的分布逐渐降低，而C型在各组的分布逐渐增高。与B型相比，C型感染者年龄较大；ALT水平较高（P〈0．05）；HBeAg阳性较低（P〈0．025）。结论 贵州省存在A、B、C、D4种HBV基因型，但以B型为主，C型其次，A、D型极少。B型中又以Ba亚型为主。B、C基因型在贵州省4城市的分布有一定差异。     

贵州地区不同人群TTV核酸检测及部分核苷酸序列分析

目的 了解贵州地区TTV感染状况，分析TTV贵州株的基因特点。方法 以公布的TTV第1读码区序列设计两对寡核苷酸引物，用套式聚合酶链反应法(nested—PCR)检测贵州地区不同人群血清中TTV核酸(TTV DNA)，并对3份TTV DNA阳性血清的PcR产物，用直接测序法测定核苷酸序列。结果 62例正常人，37例志愿献血员，50例血液透析患者，107例静脉药瘾者及139例肝病患者血清中TTV DNA阳性率分别为6．45％(4／62)，8．1％(3／37)，26.0％(13／50)，25.23％(27／107)和16.55％(23／139)。在肝病组中，重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的TTV DNA阳性率分别为35.71％(5／14)，14．15％(15／106)和15．79(3／19)。测定的282个核苷酸中，3株贵州株的同源性均高于99％，与日本株N22相比，同源性都为98％。结论 贵州存在TTV感染，血透患者中有较高的TTV感染率，TTV可能是重型肝炎的病原因子，3株贵州株可能为同一基因型。