Torin1、Nutlin-3a促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究

目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin-3a和Torin1可以抑制3T3细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。Western blot检测结果显示,Nutlin-3a组和Torin1组cTnT、cTnI蛋白表达量相比DMSO组有增高的趋势。qRT-PCR结果表明,Torin1处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中Torin1组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1组和Nutlin-3a组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1组和Nutlin-3a组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。结论用Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。     

p53 modRNA促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的初步研究

目的 探索p53 modRNA对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的影响.方法 将p53 mod-RNA转染至人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态...     

静电纺有序rGO/PLCL支架对hiPSC-CPC心肌分化影响的初步研究

目的探索静电纺丝技术制备的有序rGO/PLCL支架对hiPSC-CPC心肌分化的影响。方法采用静电纺丝技术制备有序rGO/PLCL支架。使用扫描电镜观察支架表面结构;通过拉伸试验测定材料机械性能;利用XRD测定支架成分;通过电阻率测定评估支架导电性;种植hiPSC-CPC评估该材料对心肌分化、增殖、形态的影响;通过qPCR、RNA-seq探索rGO对hiPSC-CPC心肌分化基因水平的影响。结果扫描电镜显示,支架材料表面纤维有序排列。拉伸试验显示,在干燥和湿润情况下支架都具有良好机械性能,rGO的加入增加了支架材料的应变能力。XRD验证了rGO/PLCL的成分组成。电阻率测定提示rGO的加入显著增加了支架的导电性。细胞试验显示支架对细胞具有引导作用,rGO的添加使更多的心肌细胞趋于成熟细胞形态,rGO的加入对细胞增殖无明显影响。qPCR结果提示rGO的加入上调了肌节成熟相关基因cTNT、MYH7/MYH6以及细胞间通信相关的连接蛋白CX43的表达。RNA-seq检测提示rGO主要通过下调与细胞外空间、细胞外区域、钙离子结合、细胞外基质组成和排列、细胞黏附等相关基因的表达来影响细胞分化。结论有序rGO/PLCL支架具有有序排列的表面微结构、合适的力学性能以及良好的导电性和生物相容性,能够引导细胞排列,有利于改善hiPSC-CPC分化形成的心肌细胞的形态,以及促进肌节成熟相关基因的表达。