表没食子儿茶素没食子酸酯延缓软骨细胞衰老的相关研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）能否延缓软骨细胞衰老及其作用机制。方法 取4周龄SPF级SD大鼠关节软骨，采用Ⅱ型胶原酶分步消化法分离培养软骨细胞并传代。经甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色及Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色鉴定后，将第2代细胞分为空白对照组、10 ng/mL IL-1β培养组以及6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μmol/L EGCG+10 ng/mL IL-1β共培养组，对应培养24 h后采用细胞计数试剂盒8观测软骨细胞活性，筛选EGCG最佳药物浓度进行下一步实验。进一步将第2代软骨细胞分为空白对照组（A组）、10 ng/mL IL-1β培养组（B组）、EGCG+10 ng/mL IL-1β共培养组（C组）、EGCG+10 ng/mL IL-1β+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）组（D组），对应培养后采用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老程度，单丹磺酰尸胺法检测细胞自噬情况，实时荧光定量PCR检测软骨细胞衰老相关基因[Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3(m...