视蛋白基因启动子的克隆和鉴定

目的 克隆出视蛋白基因启动子。方法 以小鼠全基因组为模板，用PCR法克隆出目的大小的片断。然后连接到T-载体上作酶切鉴定，最后测序。结果 酶切结果与预期相符，测序结果与公布序列完全一致。结论 视蛋白基因启动子克隆成功。     

肾小球系膜细胞的分离和培养

目的分离、培养和鉴定正常人肾小球系膜细胞。方法筛网滤过分离正常人肾小球系膜细胞,同时采用免疫荧光技术,利用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记单克隆抗体:抗Ⅷ因子相关抗原抗体、抗结蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗细胞角蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体对系膜细胞特有的中间微丝进行鉴定。并采用同期培养的同一来源的肾小球内皮细胞作对照。结果抗Ⅷ因子相关抗原、抗角蛋白和抗细胞角蛋白抗体表达均为阴性,而抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体为阳性,说明培养的细胞为系膜细胞。结论该种方法分离培养的细胞经过免疫荧光染色鉴定为肾小球系膜细胞。     

皮肤中弹性纤维三种染色方法的比较

弹性纤维广泛分布于纤维结缔组织 ,尤其集中分布于椎弓间黄韧带、声带、肺泡壁、动脉壁及弹性软骨等处 ,赋予所在的组织以良好的弹性。弹性纤维可被多种试剂着色 ,如地衣红、醛复红、苯胺黑、Ｓｃｈｉｆｆ试剂等染成不同的颜色。下面我们就分别用Ｇｏｍｏｒｉ醛复红染色法、Ｓｃｈｍｏｒｌ染色法 (Ｗｅｉｇｅｒｔ间苯二酚 品红染色法 )及地衣红染色法 3种染色法 ,对ＳＤ大鼠皮肤中的弹性纤维染色效果做一简单比较。1　材料和方法1 1　试剂　碱性品红、石碳酸、间苯二酚、三化铁、盐酸、聚乙醛、地衣红。1 2　实验方法1 2 1　Ｇｍｏｒｉ醛…     

三种反义c-myc RNA的瞬时表达对血管平滑肌细胞的体外生物学效应的影响

目的 了解癌基因c-myc分子中各个区域的作用,找出最佳的反义封闭靶区,为c-myc表达增高相关疾病的基因治疗提供依据。方法 系统地构建了人类3种反义c-myc重组逆转录病毒表达载体（aM1、aM2和aM3）,分别载有c-myc第1、2和3外显子的反义片段,经脂质体转染大鼠主动脉平滑肌细胞,并于转染后48 h采用流式细胞仪对细胞进行瞬时表达检测。结果 与对照组相比,aM2使c-myc表达量减少了37.6%,aM1为对照组的98.8%,而aM3却使c-myc表达增高21.7%;与此同时,aM1和aM2组增殖细胞核抗原（PCNA）表达分别下降了36.0%和30.9%,而aM3组PCNA表达增高。DNA分析则表明3种载体均使处于G0/G1期的细胞比例略为增高（aM2>aM1>aM3）,S 期比例略下降（aM1>aM2>aM3）,但尚未有DNA合成量的明显改变。结论 反义基因的导入在瞬时表达时可影响细胞中靶蛋白及其他生长相关蛋白的表达,但对细胞周期和DNA合成的影响尚小。     

胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达

目的 将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率.方法 将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48 h用RT-PCR检测目的 基因的表达情况.结果 质粒2～10 μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率.RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达.结论 通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据.     

阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染

目的联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题。方法采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒pCX-EGFP形成复合物作为转染示踪物质进行转染,通过激光共聚焦显微镜,检测复合物在细胞的分布情况。结果与对照组单纯使用PEI转染相比较,联合使用组虽然精子活力和活率有一定程度的下降,但是无论胞质还是胞核荧光物质的携带量都有很大程度的提高,实现了对精子的核内转染。结论本实验为我们以后开展大动物精子载体法的研究提供了一个成功的模式。     

刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响

目的观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用。方法选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析。结果黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成。     

冠心病人单个核白细胞表面粘附相关蛋白的表达

采用免疫组织化学形态计量学的方法，观察了正常人和冠心病人外周血单个核细胞表面Ｖｎ、ＣＤ４４和ＣＤ１１ｂ三种有代表性的粘附相关蛋白的分布及量的变化。结果表明，冠心病组单个核细胞粘附相关蛋白的表达达量明显高于正常人群组，三种粘附相关蛋白的表达量亦有明显差异。     

大鼠胚胎期及出生早期乳腺干细胞的免疫组织化学研究

取妊娠20日龄胎鼠及出生后3、8d的SD大鼠乳腺组织标本进行HE染色显微镜下观察,借助抗体SCA-1、CK18和α-SMA,用免疫酶标法和免疫荧光法对细胞进行免疫组化鉴定。结果表明,妊娠第20d鼠胚、出生后3d和8d乳鼠的次级导管上皮中可鉴别出4种细胞表型：SCA-1阳性细胞、CK18阳性细胞、SCA-1和CK18双阳性细胞、SCA-1和？或CK18阴性细胞。根据细胞的形态大小和分布位置,确定SCA-1阳性的小亮细胞为乳腺干细胞。提示大鼠胚胎期及出生早期的乳腺干细胞存在分化潜能;此可为其分离及作为种子细胞转染外源性基因提供实验依据;CK18阳性细胞为已分化的腺上皮细胞,SCA-1和CK18双阳性细胞为已定向的腺上皮祖细胞。